1．下列有關(guān)微生物營養(yǎng)物質(zhì)的敘述，正確的是(　　)
A．是碳源的物質(zhì)不可能同時是氮源
B．碳源都能提供能量
C．除水以外的無機物只能提供無機鹽
D．無機氮源也能提供能量
【解析】　    A、B選項的表達不完整。有的碳源只能是碳源，如CO2，有的碳源可以同時是氮源，如NH4HCO3，有的碳源可以同時是能源，如葡萄糖，有的碳源可以同時是氮源和能源；如蛋白胨。C選項中，除水以外的無機物種類繁多，功能也多樣，如CO2為自養(yǎng)型微生物的碳源，NaHCO3可作為自養(yǎng)型微生物的碳源和無機鹽，而NaCl則只能提供無機鹽。D選項中，無機氮源提供能量的情況是存在的，如NH3可以為硝化細菌提供能量和氮源。
【答案】　D
2．關(guān)于配制培養(yǎng)基的敘述中，正確的是(　　)
A．制作固體培養(yǎng)基必須加入瓊脂
B．加入青霉素可得到放線菌
C．培養(yǎng)自生固氮菌不需氮源
D．發(fā)酵工程一般用半固體培養(yǎng)基
【解析】　固體培養(yǎng)基需加入凝固劑，瓊脂是常用的，但不是唯一的，青霉素可抑制細菌和放線菌的生長，發(fā)酵工程一般用液體培養(yǎng)基。自生固氮菌能夠?qū)⒖諝庵械牡€原成氨，故配制培養(yǎng)基時不需加氮源。
【答案】　C
3．下列為某同學在培養(yǎng)金黃色葡萄球菌實驗中的部分操作步驟，其中正確的是(　　)
A．培養(yǎng)基中蛋白胨、牛肉膏溶化后，直接補充蒸餾水至100 mL
B．用1 mol/L NaOH調(diào)試pH，使pH為5.0～6.0
C．加壓至98 kPa之前，要徹底排出鍋內(nèi)的冷空氣
D．將接種環(huán)放在酒精燈上灼燒，滅菌后立即伸入菌種試管內(nèi)挑取少量菌種
【解析】　A選項應該先加水，后加熱溶化，否則培養(yǎng)基會被燒焦；B選項用1 mol/L NaOH調(diào)試pH是正確的，但金黃色葡萄球菌是細菌，本實驗應把pH調(diào)7.4～7.6；C選項加壓至98 kPa之前，要徹底排出鍋內(nèi)的冷空氣，是為了使高壓鍋能夠在很短的時間內(nèi)達到較高的溫度，使鍋內(nèi)充滿水蒸氣，并使水蒸氣分子運動達到盡可能快的速度，穿透各微生物菌體及芽孢等；D選項接種環(huán)放在酒精燈上灼燒滅菌是應該的，但不能立即伸入菌種試管內(nèi)，這樣會燙死菌種。
【答案】　C
4．某同學在101、102、103倍稀釋液的平均菌落數(shù)為2 760、295和46，則菌落總數(shù)(個/mL)為(　　)
A．2.76×104   B．2.95×104
C．4.6×104   D．3.775×104
【解析】　菌落計數(shù)法，注意是計算不同稀釋度的平均菌落數(shù)。首先選擇平均菌落數(shù)在30～300之間的，當只有一個稀釋倍的平均菌落數(shù)符合此范圍時，則以該平均菌落乘以稀釋倍數(shù)即為該樣品的細菌總數(shù)；若有兩個稀釋倍的平均菌落數(shù)均在30～300之間，則按兩者菌落總數(shù)之比值來決定，若比值小于2應采取兩者的平均數(shù)，若大于2，則取其中較小的菌落總數(shù)。本題295、46在30～300之間，46×103與295×102比值為1.6。應取二者平均數(shù)(46×103＋295×102)÷2＝3.775×104。若所有稀釋倍數(shù)的菌落數(shù)均不在30～300之間，則應以最接近300或30的平均菌落乘以稀釋倍數(shù)。
【答案】　D
5．產(chǎn)生標準菌落的最初數(shù)目和培養(yǎng)基分別是(　　)
A．同種少數(shù)細菌，液體培養(yǎng)基
B．許多細菌，液體培養(yǎng)基
C．同種少數(shù)細菌，固體培養(yǎng)基
D．許多細菌，固體培養(yǎng)基
【解析】　    在液體培養(yǎng)基中生活的細菌，無論是一個還是許多，肉眼都是不可見的。在固體培養(yǎng)基上的細菌，當數(shù)目較少時也是不可見的。當固體培養(yǎng)基上有許多細菌并且集中在較小范圍時，肉眼可見。而菌落是一個細菌或幾個細菌的子細胞群體，形成于固體培養(yǎng)基上，有一定的形態(tài)結(jié)構(gòu)，所以肉眼可見。同種細菌形成的菌落，形態(tài)結(jié)構(gòu)是相同的。如果有許多細菌形成的菌落，就不可能有比較標準的形態(tài)，因為這許多細菌第一不可能是同一種細菌，第二不可能在培養(yǎng)基的同一個點上。
【答案】　C
6．分離纖維素分解菌的實驗過程中操作有誤的是(　　)
A．經(jīng)選擇培養(yǎng)后將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上
B．富集培養(yǎng)這一步可省略；但培養(yǎng)纖維素分解菌少
C．經(jīng)稀釋培養(yǎng)后，用剛果紅染色
D．對照組可用同樣量的培養(yǎng)液涂布到不含纖維素的培養(yǎng)基上
【解析】　    經(jīng)選擇培養(yǎng)后，再經(jīng)稀釋，才能將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上；富集培養(yǎng)可省略；經(jīng)稀釋培養(yǎng)后，用剛果紅染色，設置對照能證明經(jīng)富集培養(yǎng)的確得到了欲分離的微生物。
【答案】　A
7．(2010年南京質(zhì)檢)甲、乙、丙是三種微生物，下表Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ是用來培養(yǎng)微生物的三種培養(yǎng)基。甲、乙、丙都能在Ⅲ中正常生長繁殖；甲能在Ⅰ中正常生長繁殖，而乙和丙都不能；乙能在Ⅱ中正常生長繁殖，甲、丙都不能。下列說法正確的是(　　)
 粉狀硫10 g K2HPO44 g FeSO40.5 g 蔗糖10 g (NH4)2SO4
0.4 g H2O
100 mL MgSO4
9.25 g CaCl2
0.5 g
Ⅰ ＋ ＋ ＋ ＋ － ＋ ＋ ＋
Ⅱ ＋ ＋ ＋ － ＋ ＋ ＋ ＋
Ⅲ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋
注：“＋”表示培養(yǎng)基中加入了這種物質(zhì)，“－”表示培養(yǎng)基中沒有加入這種物質(zhì)。
A．甲、乙、丙都是異養(yǎng)型微生物
B．甲、乙都是自養(yǎng)型微生物，丙是異養(yǎng)型微生物
C．甲是異養(yǎng)型微生物、乙是固氮微生物、丙是自養(yǎng)型微生物
D．甲是固氮微生物、乙是自養(yǎng)型微生物、丙是異養(yǎng)型微生物
【解析】　Ⅰ培養(yǎng)基缺少N素， Ⅱ培養(yǎng)基缺少有機物，Ⅲ營養(yǎng)全面。N是微生物生長的必需元素，每一種微生物正常生長都需要N，但自己能夠固氮的微生物可以生活在無氮培養(yǎng)基上。甲能在Ⅰ上生長繁殖，而乙、丙都不能，說明甲是能夠固氮的微生物；乙能在Ⅱ中生長繁殖，甲、丙不能，說明乙不需要培養(yǎng)基為它的正常生命活動提供能源物質(zhì)，乙一定為自養(yǎng)型微生物，甲、丙一定都為異養(yǎng)型微生物。
【答案】　D
8．某小組同學為了調(diào)查湖水中細菌的污染情況而進行了實驗。實驗包括制備培養(yǎng)基、滅菌、接種及培養(yǎng)、菌落觀察計數(shù)。請回答與此實驗相關(guān)的問題。
(1)培養(yǎng)基中含有的蛋白胨、淀粉分別為細菌培養(yǎng)提供了________和________。除此之外，培養(yǎng)基還必須含有的基本成分是________和________。
(2)對培養(yǎng)基進行滅菌，應該采用的方法是______________。
(3)為了使該實驗所得結(jié)果可靠，還應該同時在另一平板上接種________作為對照進行實驗。
(4)培養(yǎng)20小時后，觀察到平板上有形態(tài)和顏色不同的菌落，這說明湖水樣品中有________種細菌。一般說來，菌落總數(shù)越多，湖水遭受細菌污染的程度越________。
(5)如果要檢測水中是否含有大腸桿菌，培養(yǎng)基中還應加入________。
【解析】　(1)蛋白胨可提供氮源、碳源、維生素，而淀粉可提供碳源，除此之外，微生物的生長還需要無機鹽和水。
(2)對培養(yǎng)基的滅菌，在實驗室內(nèi)常用高壓蒸汽滅菌法。
(3)在實驗的過程中，除實驗變量以外其他各變量均應適宜且相同，以利于更好地實現(xiàn)實驗目的。
(4)不同的菌落具有各自的菌落特征(如形狀、顏色、大小、隆起程度等)。
(5)培養(yǎng)基中加入某種試劑，以鑒別某種微生物是否存在，稱為鑒別培養(yǎng)基。大腸桿菌用伊紅—美藍鑒別。
【答案】　(1)氮源(碳源不作要求)　碳源　水　無機鹽(后兩空順序可顛倒)　(2)高壓蒸汽滅菌　(3)無菌水　(4)多　大(或嚴重)　(5)伊紅—美藍
9．纖維素是一種由葡萄糖首尾相連而組成的高分子化合物，廣泛存在于植物的根、葉、莖等器官中，根據(jù)人們的需要，有時要對纖維素進行相應處理。
(1)在生產(chǎn)果汁時為了解決果肉出汁率低的問題，人們使用________、纖維素酶等處理。
(2)目前纖維素酶的主要來源是分解纖維素的微生物，菌株選育是纖維素酶的基礎性工作，以下流程為纖維素分解菌的分離純化過程：
土壤取樣→選擇培養(yǎng)→梯度稀釋→將菌懸液涂布到有特定選擇作用的培養(yǎng)基上→挑選單個細菌→發(fā)酵培養(yǎng)→大量纖維素分解菌。
①人們在篩選過程中常用的方法是____________________，原理是_________________
________________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
②與分離尿素分解菌的培養(yǎng)基相比，分離纖維素分解菌的培養(yǎng)基中應添加的主要成分是________、________。
(3)為了使纖維素分解菌能反復利用可以采用________技術(shù)，它與普通酶相比優(yōu)點有：________________________________________________________________________。
(4)下圖中屬于上述技術(shù)得到的菌是(　　)
 
(5)下圖中表示纖維素酶活性與pH變化的關(guān)系，若pH=m表示最適，在下列甲～丁中最可能表示實驗結(jié)果的曲線圖上標出“m”的位置。
 
【答案】　(1)果膠酶
(2)①剛果紅染色法　纖維素被分解后，就無法形成剛果紅——纖維素復合物，培養(yǎng)基中會出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈
②纖維素、剛果紅
(3)固定化細胞　成本低，易操作，可以反復利用
(4)D　(5)
10．富集培養(yǎng)是微生物學中強有力的技術(shù)手段之一，主要是指利用不同微生物間生命活動特點的不同，制定環(huán)境條件，使僅適應該條件的微生物旺盛生長，從而使其在群落中的數(shù)量大大增加，人們能夠更容易地從自然界中分離得到所需的特定微生物。富集條件可根據(jù)所需分離的微生物的特點，從物理、化學、生物及綜合多個方面進行選擇，如溫度、pH、紫外線、高壓、光照、氧氣、營養(yǎng)等許多方面。下圖描述了采用富集方法從土壤中分離能降解酚類化合物對羥基苯甲酸的微生物的實驗過程。

 
(1)本實驗所需培養(yǎng)基為________，碳源為_____________。
(2)實驗原理是_______________________________________。
(3)①→③重復培養(yǎng)的目的是_________________________________________。
(4)⑤菌落中大部分是降解____________的微生物。
(5)⑥為__________組，⑦為________組，設置⑥的目的是________________。
(6)⑤→⑥采用________法接種到⑥的培養(yǎng)基中，在操作過程中為防止污染應注意的事項是________________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
【解析】　從混合物中分離某種微生物要用選擇培養(yǎng)基，利用該分離對象對某一營養(yǎng)物質(zhì)有“嗜好”的原理，專門在培養(yǎng)基中加入該營養(yǎng)物質(zhì)，從而使其成為一種“加富”培養(yǎng)基，可使該微生物大量繁殖，在數(shù)量上超過原有占優(yōu)勢的微生物，以達到富集培養(yǎng)的目的，用于“加富”的一些物質(zhì)主要是一些特殊的碳源和氮源。
【答案】　(1)選擇培養(yǎng)基　對羥基苯甲酸　(2)利用以對羥基苯甲酸為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基，經(jīng)富集培養(yǎng)，分離出能降解酚類化合物對羥基苯甲酸的微生物　(3)增大對羥基苯甲酸微生物的比例　(4)對羥基苯甲酸　(5)對照　實驗　說明通過富集培養(yǎng)的確得到了能降解對羥基苯甲酸的微生物　(6)單細胞挑取　接種環(huán)在火焰上灼燒滅菌，燒紅的接種環(huán)在空氣中冷卻，同時打開皿蓋挑取菌落接種到試管中，并塞好棉塞，接種環(huán)在火焰上灼燒，殺滅殘留物
11．(2010年如皋質(zhì)檢)根據(jù)各類微生物的形態(tài)結(jié)構(gòu)特點和新陳代謝類型，利用選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基，結(jié)合顯微鏡鏡檢以及菌落特征可以把混雜在一起的大腸桿菌、硝化細菌、乳酸菌、酵母菌、金黃色葡萄球菌、圓褐固氮菌、尿細菌、纖維桿菌分離開來。下面是分離篩選的方法步驟，請根據(jù)各個步驟的條件，填寫橫線上的內(nèi)容：首先配制一系列不同性質(zhì)的固體培養(yǎng)基，然后進行高溫滅菌。再將上述微生物的混合液分別接種到各種培養(yǎng)基上培養(yǎng)。
(1)利用無氮培養(yǎng)基可以篩選出________。
(2)用不含有有機碳源的選擇培養(yǎng)基可篩選________。
(3)酵母菌的篩選需要在常規(guī)培養(yǎng)基中另加入________。
(4)用含較高濃度食鹽的培養(yǎng)基可選擇出________；或者根據(jù)菌落的顏色呈現(xiàn)________色，將其挑取單獨培養(yǎng)。
(5)利用伊紅—美藍培養(yǎng)基培養(yǎng)混合菌，菌落呈________色并帶有金屬光澤的是________，挑取該菌落單獨培養(yǎng)，結(jié)合顯微鏡鏡檢和進一步用伊紅—美藍鑒別培養(yǎng)基培養(yǎng)來確定。
(6)在無氧環(huán)境下培養(yǎng)混合菌，________________可以生長，加入一定濃度的乳酸，使培養(yǎng)基的pH充分降低，可抑制________的生長，利用菌落的特征，結(jié)合顯微鏡鏡檢，選取生長優(yōu)勢的菌落，即可分離出________。
(7)利用只含纖維素為碳源的液體培養(yǎng)基可篩選________________。
(8)若篩選尿細菌，則配制的培養(yǎng)基的特點是____________。
【解析】　    從混合樣品中獲得某種微生物的方法，通常有兩種：第一種方法可利用該分離對象對某一營養(yǎng)物質(zhì)有專一“嗜好”的原理，專門在培養(yǎng)基中加入該營養(yǎng)物質(zhì)，從而使它成為一種加富培養(yǎng)基。采用這類“投其所好”的策略即可使該微生物大大增殖，在數(shù)量上超過原有占優(yōu)勢的微生物，以達到富集培養(yǎng)的目的。用于加富的一些物質(zhì)主要是一些特殊的碳源和氮源，如纖維素可被用來富集分解纖維素的微生物，甘露醇用來富集自生固氮菌。第二種方法可利用該分離對象對某種抑菌物質(zhì)的抗性，在混合培養(yǎng)物中加入該抑制物質(zhì)，經(jīng)培養(yǎng)后，由于原來占優(yōu)勢的其他微生物的生長受到抑制，而分離對象卻可借機大大增殖。
【答案】　(1)圓褐固氮菌　(2)硝化細菌　(3)青霉素　
(4)金黃色葡萄球菌　金黃　(5)深紫　大腸桿菌　(6)大腸桿菌、乳酸菌、酵母菌　大腸桿菌、酵母菌　乳酸菌　(7)纖維桿菌　(8)氮源只含尿素