第1題

【12山東】除了高溫加熱以外，其它滅菌方法還有

A．紫外線照射

B．真空包裝

C．用保鮮膜密閉

D．添加防腐劑

【解析】此題考查滅菌的方法。滅菌是使用強烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物(包括芽孢和孢子)。本題中真空包裝、添加防腐劑、用保鮮膜密閉都起到了抑菌作用，紫外線照射使細菌的蛋白質(zhì)變性，核酸受破壞，是滅菌方法。

第2題

【07寧夏】某小組同學為了調(diào)查湖水中細菌的污染情況而進行了實驗。實驗包括制備培養(yǎng)基、滅菌、接種及培養(yǎng)、菌落觀察計數(shù)。請回答與此實驗相關(guān)的問題。

（1）培養(yǎng)基中含有的蛋白胨、淀粉分別為細菌培養(yǎng)提供了___和___。除此之外，培養(yǎng)基還必須含有的基本成分是___和___。

（2）對培養(yǎng)基進行滅菌，應(yīng)該采用的方法是_______。

（3）為了盡快觀察到細菌培養(yǎng)的實驗結(jié)果，應(yīng)將接種了湖水樣品的平板置于______中培養(yǎng)，培養(yǎng)的溫度設(shè)定在37℃。要使該實驗所得結(jié)果可靠，還應(yīng)該同時在另一平板上接種______作為對照進行實驗。

（4）培養(yǎng)20小時后，觀察到平板上有形態(tài)和顏色不同的菌落，這說明湖水樣品中有_____種細菌。一般說來，菌落總數(shù)越多，湖水遭受細菌污染的程度越_______。

（5）如果提高培養(yǎng)基中NaCl的濃度，可以用于篩選耐_______細菌，這種培養(yǎng)基被稱為_____________。

【答案】（1）氮源（碳源不作要求）；碳源；無機鹽；水（2）高壓蒸汽滅菌（3）恒溫培養(yǎng)箱；無菌水（4）多；高（5）鹽（或NaCl）；選擇性培養(yǎng)基

【解析】（1）培養(yǎng)基的基本成分有氮源、碳源、無機鹽和水，蛋白胨可提供氮源、碳源和維生素，淀粉可提供碳源。

（2）對培養(yǎng)基滅菌方法是高壓蒸汽滅菌。

（3）恒溫培養(yǎng)箱可以為細菌的培養(yǎng)提供一個無菌恒溫的環(huán)境，以接種無菌水的培養(yǎng)基為空白對照，是為排除培養(yǎng)基的污染。

（4）細菌不同形成的菌落形態(tài)和顏色不同，平板上出現(xiàn)形態(tài)、顏色不同的菌落說明湖水樣品中有多種細菌．污染程度越高污染物越多，適合生長的細菌越多。

（5）能夠在NaCl的濃度高的培養(yǎng)基上生長的細菌耐鹽能力強，而不耐鹽的細菌不能在此培養(yǎng)基上生長，該培養(yǎng)基從功能上來分屬于選擇培養(yǎng)基。

第3題

【12海南】回答下列關(guān)于腐乳制作的問題：

(1)腐乳是豆腐經(jīng)微生物發(fā)酵后制成的食品。多種微生物參與了該發(fā)酵過程，其中起主要作用的微生物是_______，其產(chǎn)生的蛋白酶可將豆腐中的蛋白質(zhì)水解為_______和_______；其產(chǎn)生的________能將豆腐中的脂肪水解為_______和_______。

(2)發(fā)酵完成后需加鹽腌制，加鹽還可以抑制________生長。

(3)腐乳制作的后期可加入由酒和多種香辛料配置而成的鹵湯。鹵湯除具有一定的防腐作用外，還能使腐乳具有獨特的_____。

【解析】(1)腐乳制作發(fā)酵過程中起作用的微生物有多種，如青霉、酵母、曲霉、毛霉等，其中起主要作用的是毛霉，毛霉產(chǎn)生的蛋白酶可將豆腐中的蛋白質(zhì)水解成多肽和氨基酸，產(chǎn)生的脂肪酶能夠?qū)⒍垢械闹舅鉃楦视秃椭舅帷?/span>

(2)發(fā)酵過程中加鹽腌制，不僅可以調(diào)制風味，而且能夠抑制雜菌等其他微生物的生長。

(3)腐乳制作后期加入鹵湯，鹵湯不僅可以防腐，還可以使腐乳具有獨特的風味(或香味)。

【答案】（1）毛霉(多)肽氨基酸脂肪酶甘油脂肪酸（2）微生物（3）風味

第4題

【14海南】已知泡菜中亞硝酸鹽含量與泡制時間有關(guān)。為了測定不同泡制天數(shù)泡菜中亞硝酸鹽的含量，某同學設(shè)計了一個實驗，實驗材料、試劑及用具包括：刻度移液管、比色管、不同濃度的亞硝酸鈉標準溶液、亞硝酸鹽的顯色劑、不同泡制天數(shù)的泡菜濾液等?；卮鹣嚓P(guān)問題：

（1）請完善下列實驗步驟：

①標準管的制備：用_____________和顯色劑制成顏色深淺不同的系列標準管。

②樣品管的制備：用刻度移液管分別吸取一定量的_______________，加到不同的比色管中，然后在各個比色管中加入等量的顯色劑進行顯色，得到樣品管。

③將每個________分別與系列標準管進行比較，找出與樣品管顏色深淺________的標準管，該管中亞硝酸鈉含量即代表樣品管中亞硝酸鹽含量，記錄各樣品管亞硝酸鹽的含量。

（2）下圖表示的是泡菜中______________________趨勢。

（3）泡菜制作過程中產(chǎn)酸的細菌主要是________(填“醋酸桿菌”或“乳酸菌”)。

【答案】（1）①亞硝酸鈉標準溶液②不同泡制天數(shù)的泡菜濾液③樣品管最相近（2）亞硝酸鹽含量隨泡制時間的變化（3）乳酸菌

【解析】本題考查傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)、實驗設(shè)計與探究。

（1）①在亞硝酸鹽的含量測定中，需用不同濃度亞硝酸鈉溶液和顯色劑制備具有顏色梯度變化的標準顯色液。②用刻度移液管分別吸取一定量的利用不同泡制天數(shù)的泡菜制備的濾液加到不同的比色管中，然后在各個比色管中加入等量的顯色劑進行顯色，得到樣品管；觀察各組樣品管的顏色變化，并與標準顯色管進行對比，找出與樣品管顏色最相近的一組，其對應(yīng)的亞硝酸鈉含量即代表樣品管亞硝酸鹽的含量。

（1）據(jù)圖可知，該圖表示亞硝酸鹽的含量隨發(fā)酵時間的變化趨勢。

（2）泡菜制作過程產(chǎn)生的乳酸來自于乳酸菌

第5題

【14新課標】（15分）植物秸稈中的纖維素可被某些微生物分解。回答下列問題:

（1）分解秸稈中纖維素的微生物能分泌纖維素酶，該酶是由3種組分組成的復(fù)合酶，其中的葡萄糖苷酶可將_______分解成________。

（2）在含纖維素的培養(yǎng)基中加入剛果紅（CR）時，CR可與纖維素形成______色復(fù)合物。用含有CR的該種培養(yǎng)基培養(yǎng)纖維素分解菌時，培養(yǎng)基上會出現(xiàn)以該菌的菌落為中心的_______。

（3）為從富含纖維素的土壤中分離獲得纖維素分解菌的單菌落，某同學設(shè)計了甲、乙兩種培養(yǎng)基（成分見下表）：

注：“+”表示有，“-”表示無。

據(jù)表判斷，培養(yǎng)基甲_____（填“能”或“不能”）用于分離和鑒別纖維素分解菌，原因是______；培養(yǎng)基乙______（填“能”或“不能”）用于分離和鑒別纖維素分解菌，原因是______。

【答案】（1）纖維二糖；葡萄糖（2）紅；透明圈（3）不能；液體培養(yǎng)基不能用于分離單菌落；不能；培養(yǎng)基中沒有纖維素，不會形成CR-纖維素紅色復(fù)合物，即使出現(xiàn)單菌落也不能確定其為纖維素分解菌

【解析】（1）纖維素是一種由葡萄糖首尾相連而成的高分子化合物，是含量最豐富的多糖類物質(zhì)。纖維素能被土壤中某些微生物分解利用。

（2）剛果紅與纖維素形成紅色復(fù)合物，當纖維素被纖維素酶分解后，紅色復(fù)合物無法形成，出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈，我們可以通過是否產(chǎn)生透明圈來篩選纖維素分解菌。

（3）分離和鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基位固體培養(yǎng)基，且需以纖維素為唯一碳源。

第6題

【14新課標】為了調(diào)查某河流的水質(zhì)狀況，某研究小組測定了該河流水樣中的細菌含量，并進行了細菌分離等工作?；卮鹣铝袉栴}：

（1）該小組采用稀釋涂布平板法檢測水樣中的細菌含量。在涂布接種前，隨機取若干滅菌后的空白干板先行培養(yǎng)了一段時間，這樣做的目的是______；然后，將1 mL水樣稀釋100倍，在3個平板上用涂布法分別接入0.1 mL稀釋液；經(jīng)適當培養(yǎng)后，3個平板上的菌落數(shù)分別為39、38和37。據(jù)此可得出每升水樣中的活菌數(shù)為________。

（2）該小組采用平板劃線法分離水樣中的細菌。操作時，接種環(huán)通過_____滅菌，在第二次及以后的劃線時，總是從上一次劃線的末端開始劃線。這樣做的目的是________。

（3）示意圖A和B中，________表示的是用稀釋涂布平板法接種培養(yǎng)后得到的結(jié)果。

（4）該小組將得到的菌株接種到液體培養(yǎng)基中并混勻，一部分進行靜置培養(yǎng)，另一部分進行振蕩培養(yǎng)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：振蕩培養(yǎng)的細菌比靜置培養(yǎng)的細菌生長速度快。分析其原因是：振蕩培養(yǎng)能提高培養(yǎng)液中______的含量，同時可使菌體與培養(yǎng)液充分接觸，提高______的利用率。

【答案】（1）檢測培養(yǎng)基平板滅菌是否合格；3.8×10⁷

（2）灼燒；將聚集的菌體逐步稀釋以便獲得單個菌落

（3）B

（4）溶解氧；營養(yǎng)物質(zhì)

【解析】涂布接種前，隨機取若干滅菌后的空白平板先行培養(yǎng)了一段時間，如果滅菌不合格，可在空白平板上發(fā)現(xiàn)菌落，所以用此法可檢測培養(yǎng)基平板滅菌是否合格。每升水樣中的活菌數(shù)為（39+38+37）/3=38，再除以0.1乘以100，這是1毫升的菌數(shù)量，再乘以1000就是1升中的菌數(shù)，故為3.8×10⁷。用平板劃線法先用灼燒滅菌再劃線。振蕩培養(yǎng)可使培養(yǎng)基中各營養(yǎng)分配的均勻和溶氧量大，所以菌的生長也快。

第7題

【14四川】有機農(nóng)藥苯磺隆是一種除草劑，長期使用會污染環(huán)境。研究發(fā)現(xiàn)，苯磺隆能被土壤中某些微生物降解。分離降解苯磺隆的菌株和探索其降解機制的實驗過程如圖甲、乙所示。

（1）微生物生長繁殖所需的主要營養(yǎng)物質(zhì)有碳源、水、______四類，該實驗所用的選擇培養(yǎng)基只能以苯磺隆作為唯一碳源，其原因是________。

（2）與微生物培養(yǎng)基相比，植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基常需添加生長素和_______，這些植物激素一般需要事先單獨配制成________保存?zhèn)溆谩?/span>

（3）純化菌株時，通常使用的劃線工具是_______。劃線的某個平板培養(yǎng)后，第一劃線區(qū)域的劃線上都不間斷地長滿了菌，第二劃線區(qū)域所劃的第一條線上無菌落，其他劃線上有菌落。造成劃線無菌落可能的操作失誤有_________。

（4）為探究苯磺隆的降解機制，將該菌種的培養(yǎng)液過濾離心，取上清液做圖乙所示實驗。該實驗的假設(shè)是_______，該實驗設(shè)計是否合理？為什么？_________。

【答案】（1）氮源和無機鹽只有能利用苯磺隆的微生物能正常生長和繁殖

（2）細胞分裂素母液

（3）接種環(huán)①接種環(huán)灼燒后未冷卻；②劃線未從第一區(qū)域末端開始

（4）目的菌株能分泌降解苯磺隆的蛋白質(zhì)。不合理，缺少空白對照

【解析】（1）微生物生長所需要的主要營養(yǎng)物質(zhì)包括：碳源、氮源、水和無機鹽。使用選擇培養(yǎng)基是因為他是允許特定的微生物生長，同時又能抑制或阻止其他微生物的生長的培養(yǎng)基。

（2）植物組織培養(yǎng)常需要添加的植物激素有生長素和細胞分裂素。MS培養(yǎng)基的成份一般先分別配制成母液備用。

（3）平板劃線法接種時常使用接種環(huán)劃線。第二區(qū)域只有第一條線無菌落，而其他的劃線卻有菌落，很可能是因為接環(huán)在灼燒后末冷卻，第一次劃線時將菌種燙死，而后接種環(huán)冷卻，能正常劃線，也可能是第一次劃線時劃線未從第一區(qū)域末端開始，使接種環(huán)上無菌種。

（4）題中實驗為取得菌種培養(yǎng)液過濾后離心上清液，加入蛋白酶處理后，測得其對苯磺隆的降解率。意為假設(shè)菌種能產(chǎn)生降解苯磺隆的蛋白質(zhì)類酶，若用蛋白酶處理后，可使該酶分解，苯磺隆降解率下降，則假設(shè)成立。但由于缺乏空白對照，不能比較蛋白酶是處理是否降低苯磺隆降解率，該實驗不能得出相應(yīng)結(jié)論。

第8題

【13新課標1】回答下列有關(guān)泡菜制作的習題：

（1）制作泡菜是，所用鹽水煮沸，其目的是__________。為了縮短制作時間，有人還會在冷卻后的鹽水中加入少量陳泡菜液，加入陳泡菜液的目的是________。

（2）泡菜制作過程中，乳酸發(fā)酵過程即為乳酸菌進行_______的過程。該過程發(fā)生在乳酸菌的_______中。

（3）泡菜制作過程中影響亞硝酸鹽含量的因素有________、________和________等。

（4）從開始制作到泡菜質(zhì)量最佳這段時間內(nèi)，泡菜液逐漸變酸，這段時間內(nèi)泡菜壇中乳酸菌和其他雜菌的消長規(guī)律是_________，原因是：___________。

【答案】（1）消滅雜菌增加乳酸菌含量（2）無氧呼吸細胞質(zhì)（3）溫度、食鹽用量、腌制時間（4）乳酸菌數(shù)量增加，雜菌數(shù)量較少乳酸菌比雜菌更為耐酸

【解析】（1）鹽水中可能含有雜菌，制作泡菜時，所用鹽水需要煮沸，以便殺死鹽水中的雜菌。陳泡菜中含有現(xiàn)成的乳酸菌，加入后，可以縮短制作時間。

（2）乳酸發(fā)酵的過程即為乳酸菌進行無氧呼吸的過程。該過程發(fā)生在乳酸菌細胞的細胞質(zhì)基質(zhì)中。

（3）都泡菜的制作過程中，影響亞硝酸鹽含量的因素有溫度過高、食鹽用量不足、腌制時間等。

（4）從開始制作到泡菜品質(zhì)最佳這段時間內(nèi)，泡菜液逐漸發(fā)酸，這段時間內(nèi)泡菜壇中乳酸菌數(shù)量增加，其他雜菌較少；原因是酸性條件下，不利于雜菌生存，增加乳酸菌的數(shù)量。

【試題點評】本題通過考查泡菜制作的相關(guān)基礎(chǔ)知識，主要考查識記能力和對相關(guān)知識的判斷能力。

第9題

【13課標Ⅱ】臨床使用抗生素前，有時需要做細菌耐藥實驗。實驗時，首先要從病人身上獲取少量樣本，然后按照一定的實驗步驟操作，以確定某致病菌對不同抗生素的敏感性。

回答下列問題：

（1）為了從樣本中獲取致病菌單菌落，可用________法或________法將樣本接種于固體培養(yǎng)基表面，經(jīng)過選擇培養(yǎng)、鑒別等步驟獲得。

（2）取該單菌落適當稀釋，用________法接種于固體培養(yǎng)基表面，在37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，使其均勻生長，布滿平板。

（3）為了檢測該致病菌對于抗生素的敏感性，將分別含有A、B、C、D四種抗生素的濾紙片均勻置于該平板上的不同位置，培養(yǎng)一段時間后，含A的濾紙片周圍出現(xiàn)透明圈，說明該致病菌對抗生素A________；含B的濾紙片周圍沒有出現(xiàn)透明圈，說明該致病菌對抗生素B________；含C的濾紙片周圍的透明圈比含A的小，說明________；含D的濾紙片周圍的透明圈也比含A的小，且透明圈中出現(xiàn)了一個菌落，在排除雜菌污染的情況下，此菌落很可能是抗生素D的________。

（4）根據(jù)上述實驗結(jié)果，為達到抗菌目的，最好應(yīng)選用抗生素________。

【解析】本題主要考查微生物培養(yǎng)的相關(guān)知識。(1)將細菌接種到固體培養(yǎng)基上的方法有平板劃線法和稀釋涂布平板法。(2)由(1)獲取的致病菌單菌落，經(jīng)過適當稀釋，用涂布法接種至固體培養(yǎng)基表面進一步培養(yǎng)。(3)在檢測致病菌對抗生素的敏感性實驗中，若含A種抗生素的濾紙片周圍出現(xiàn)透明圈，說明周圍的致病菌死亡，該致病菌對A種抗生素敏感；若含B種抗生素的濾紙片周圍沒有出現(xiàn)透明圈，說明致病菌對B種抗生素不敏感；若含C種抗生素的濾紙片周圍的透明圈比含A的小，說明該致病菌對C的敏感性比對A的弱；若含D種抗生素的濾紙片周圍透明圈也比含A的小，說明A、B、C、D四種抗生素的殺菌效果最顯著的為A。透明圈中出現(xiàn)的菌落為耐藥菌。(4)根據(jù)(3)中分析，為達到抗菌目的最好選用抗生素A。

【答案】(1)劃線稀釋涂布(或涂布)(2)涂布(3)敏感不敏感該致病菌對C的敏感性比對A的弱耐藥菌(4)A

第10題

【12浙江自選】幽門螺桿菌(Hp)感染是急慢性胃炎和消化性潰瘍的主要致病因素。在患者體內(nèi)采集樣本并制成菌液后，進行分離培養(yǎng)。實驗基本步驟如下：

請回答：

（1）在配制培養(yǎng)基時，要加入尿素和酚紅指示劑，這是因為Hp含有①________，它能以尿素作為氮源；若有Hp，則菌落周圍會出現(xiàn)②________色環(huán)帶。

（2）下列對尿素溶液進行滅菌的最適方法是③____滅菌。

A．高壓蒸汽

B．紫外燈照射

C．70%酒精浸泡

D．過濾

（3）步驟X表示④________。在無菌條件下操作時，先將菌液稀釋，然后將菌液⑤________到培養(yǎng)基平面上。菌液稀釋的目的是為了獲得⑥________菌落。

（4）在培養(yǎng)時，需將培養(yǎng)皿倒置并放在⑦________中。若不倒置培養(yǎng)，將導(dǎo)致⑧________。

（5）臨床上用¹⁴C呼氣試驗檢測人體是否感染Hp，其基本原理是Hp能將¹⁴C標記的⑨________分解為NH₃和¹⁴CO₂。

【解析】此題考查微生物的分離與培養(yǎng)知識。(1)幽門螺桿菌(Hp)含有脲酶，能以尿素為氮源，在加入尿素和酚紅指示劑的培養(yǎng)基中培養(yǎng)Hp，由于尿素經(jīng)脲酶的降解可產(chǎn)生堿性的NH₃，NH₃能使培養(yǎng)基中的酚紅由紅黃色變成紅色，故菌落周圍會出現(xiàn)紅色環(huán)帶。(2)由于尿素加熱會分解，對尿素溶液進行滅菌最好用G6玻璃砂漏斗過濾。(3)微生物的分離和培養(yǎng)步驟是：配制培養(yǎng)基→滅菌、倒平板→接種→培養(yǎng)。為獲得單菌落，接種操作前應(yīng)先將菌液稀釋，然后將菌液涂布到培養(yǎng)基平面上即可。(4)微生物培養(yǎng)時需將培養(yǎng)皿倒置并放在恒溫培養(yǎng)箱中，若不倒置培養(yǎng)，則無法形成單菌落。(5)幽門螺桿菌能將¹⁴C標記的尿素分解為NH₃和¹⁴CO₂，故臨床上常用¹⁴C呼氣試驗檢測人體內(nèi)幽門螺桿菌的存在。

【答案】（1）脲酶紅（2）D（3）接種涂布單（4）恒溫培養(yǎng)箱無法形成單菌落（5）尿素