EJNMMI 放射性醫(yī)藥化學(xué)2023年12月;8: 42.

2023 年 12 月 13 日在線發(fā)布。 doi： 10.1186/s41181-023-00229-9

PMCID：PMC10719436

PMID：38091157

基于微流控的[68Ga]Ga-FAPI-46 和 [68Ga]Ga-DOTA-TOC使用基于盒式磁帶的iMiDEV?微流控放射合成器

赫曼莎·馬拉普拉，1 奧爾加·奧夫迪丘克，2 艾瑪·朱辛，3,4 陳 A. 翠，3,4 卡米爾·皮亞特科夫斯基（Camille Piatkowski），5 洛朗·坦吉，5 夏洛特·科萊特-德福塞斯，2,6 Bengt L?ngstr?m，7 克里斯特·哈爾丁，1和桑格拉姆·納格1

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抽象

背景

需求68在過去十年中，由于FAPI衍生物、PSMA-11、DOTA-TOC和DOTA-TATE等多樣化成像示蹤劑的發(fā)展，Ga標(biāo)記的放射性示蹤劑顯著增加。這些示蹤劑在治療診斷學(xué)應(yīng)用中顯示出有希望的結(jié)果，激發(fā)了人們對(duì)探索它們用于臨床的興趣。在這些探針中，68Ga標(biāo)記的FAPI-46和DOTA-TOC因其診斷廣譜癌癥的能力而成為關(guān)鍵參與者。68Ga]Ga-FAPI-46）在后期研究中，而[68Ga]Ga-DOTA-TOC已獲得臨床批準(zhǔn)用于神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤。為了促進(jìn)它們的生產(chǎn)，我們利用了基于微流控盒的iMiDEV放射合成器，能夠合成[68Ga]Ga-FAPI-46 和 [68Ga]Ga-DOTA-TOC 基于按需劑量 （DOD） 方法。

結(jié)果

探索了不同的混合技術(shù)來影響放射化學(xué)產(chǎn)率。我們實(shí)現(xiàn)了 44 ± 5% 的衰減校正收率 [68Ga]Ga-FAPI-46 和 46 ± 7% 用于 [68Ga]Ga-DOTA-TOC 約 30 分鐘。[68Ga]Ga-FAPI-46 和 [68Ga]Ga-DOTA-TOC分別為98.2%±0.2%和98.4±0.9%。所有質(zhì)量控制結(jié)果均符合歐洲藥典質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。我們優(yōu)化了各種參數(shù)，包括68Ga捕獲和洗脫、盒式分批、反應(yīng)器中的被動(dòng)混合以及固相萃?。⊿PE）純化和配制。與傳統(tǒng)的放射合成器相比，開發(fā)的合成方法減少了合成所需的前體和其他化學(xué)物質(zhì)的量。

結(jié)論

基于微流控的方法使[68Ga]Ga-FAPI-46 和 [68Ga]Ga-DOTA-TOC在iMiDEV?微流控模塊上，為它們?cè)谂R床前和臨床應(yīng)用中的應(yīng)用鋪平了道路。微流控合成方法使用的前驅(qū)體比基于盒式磁帶的傳統(tǒng)合成少 2-3 倍。該合成方法也在另一個(gè)研究中心的類似微流控iMiDEV模塊中成功驗(yàn)證，用于合成[68Ga]Ga-FAPI-46，運(yùn)行次數(shù)有限。我們的研究證明了微流控方法在高效可靠的放射性金屬放射性藥物合成方面的潛力，為該領(lǐng)域的未來發(fā)展提供了寶貴的見解，并為不久的將來的常規(guī)臨床應(yīng)用鋪平了道路。

補(bǔ)充資料

在線版本包含補(bǔ)充材料，可在 10.1186/s41181-023-00229-9 獲得。

關(guān)鍵字：正電子發(fā)射斷層掃描 （PET）、放射性藥物、微流控、iMiDEV、[68Ga]Ga-FAPI-46， [68Ga]Ga-DOTA-TOC、放射性標(biāo)記、按需劑量 （DOD）、放射性示蹤劑

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介紹

鎵-68 （68Ga）放射性核素因其可通過68通用 電氣/68Ga發(fā)生器，快速高效68Ga絡(luò)合化學(xué)（Breeman等人，2011）。因此，各種68Ga-放射性示蹤劑已被引入 PET 成像領(lǐng)域，用于診斷腫瘤疾病 （Satpati 2021）。新型放射性示蹤劑的開發(fā)68Ga-放射性核素增加了對(duì)診斷應(yīng)用的需求（Kratochwil 等人，2019 年）。同時(shí)，合成方法68Ga-放射性示蹤劑也已從手動(dòng)放射性標(biāo)記發(fā)展到使用放射合成器的基于盒式自動(dòng)放射性標(biāo)記（Mueller 等人，2016 年;Pieve 等人，2022 年）。已經(jīng)開發(fā)了許多自動(dòng)放射合成器來滿足放射性示蹤劑生產(chǎn)的需求，并能夠合成 PET 放射性示蹤劑（Bruton 和 Scott，2020 年）。

常規(guī)的放射合成方法更適合大規(guī)模集中生產(chǎn);但是，它們需要大量的化學(xué)品和試劑。相比之下，微流控技術(shù)與傳統(tǒng)方法相比具有多項(xiàng)優(yōu)勢(shì)，適用于分散生產(chǎn)。由于微尺度體積，微流體技術(shù)實(shí)現(xiàn)了更大的表面積與體積比，導(dǎo)致放射合成中更快的反應(yīng)速率和更短的反應(yīng)時(shí)間（Gillies等人，2006;Lu 和 Pike 2007），并且可用于按需劑量 （DOD） 生產(chǎn)（Arima 等人，2013 年;Uz Zaman 等人，2014 年）。最近，研究的重點(diǎn)是實(shí)施微流控技術(shù)進(jìn)行PET放射性示蹤劑的放射合成（Pascali等人，2013年;Knapp 等人，2020 年）。

已經(jīng)展示了許多微流控模塊的原型，并且已經(jīng)應(yīng)用了幾種微流控技術(shù)來生產(chǎn) PET 放射性示蹤劑（Elkawad 等人，2022 年）。這些適用于在臨床前和臨床環(huán)境中制造 DOT。然而，由于可重復(fù)性問題和 GMP 合規(guī)性，將這些微流控方法納入常規(guī)生產(chǎn)仍然具有挑戰(zhàn)性，主要是因?yàn)樗鼈冎械拇蠖鄶?shù)是針對(duì)特定應(yīng)用和相關(guān)工程問題定制的（Knapp 等人，2020 年）。對(duì)于放射性示蹤劑合成，連續(xù)流動(dòng)微流體（Wilson 等人，2000 年;Matesic 等人，2017 年）、批次型微流體和數(shù)字微流體已被研究（Lebedev 等人，2013 年;Wang 等人，2019 年）。然而，微流控技術(shù)在各種放射性示蹤劑生產(chǎn)中的應(yīng)用正在進(jìn)行中，需要可靠的微流控放射合成器來利用其在常規(guī)臨床前和臨床環(huán)境中的優(yōu)勢(shì)。

研究了iMiDEV?間歇式微流控放射合成器對(duì)氟-18（18F）、碳-11（11C），以及68室溫下的 Ga-放射性示蹤劑（Ovdiichuk 等人，2021 年，2022 年;Mallapura 等人，2022 年）以及高溫（Ovdiichuk 等人，2023 年）。DOTA螯合劑的放射性標(biāo)記68Ga-放射性核素需要高溫（León-Rodríguez 和 Kovacs，2008 年）。目前，大多數(shù)傳統(tǒng)方法使用基于盒的方法進(jìn)行合成68Ga-放射性示蹤劑，需要 40-50 μg（Nelson 等人，2022 年;Alfteimi 等人，2022 年）用于放射性標(biāo)記的前體。通過應(yīng)用基于微流控的合成可以減少前體的量。建議使用低肽量來生產(chǎn)受體靶向放射性示蹤劑，因?yàn)檩^高的肽量可能導(dǎo)致受體飽和并減少靶向受體的攝?。˙reeman等人，2001）。微流控技術(shù)已經(jīng)證明了這種方法在放射性示蹤劑合成中的可行性，從而生產(chǎn)出具有高摩爾活性的放射性藥物（Wang 和 Dam 2020）。

我們選擇合成眾所周知的放射性示蹤劑，例如68Ga標(biāo)記的FAPI-46和DOTA-TOC。[68Ga]Ga-FAPI-46 用于癌組織中成纖維細(xì)胞活化蛋白的成像（Kratochwil 等人，2019 年），而 [68Ga]Ga-DOTA-TOC 主要用于神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤成像（Hennrich 和 Bene?ová，2020 年）。

在這項(xiàng)研究中，我們探索了 [68Ga]Ga-FAPI-46 和 [68Ga]Ga-DOTA-TOC 通過使用基于微流控盒的 iMiDEV? 放射合成器。我們的目標(biāo)是 （1） 優(yōu)化 [68Ga]GaCl3從充滿陽離子交換劑的反應(yīng)器 1 （R1） 中提高 Ga-68 的回收率，（2） 通過使用被動(dòng)混合技術(shù)改進(jìn)反應(yīng)器 2 （R2） 中試劑的混合來提高放射化學(xué)轉(zhuǎn)化率，以及 iii） 在相同的實(shí)驗(yàn)條件下，在不同的研究中心使用 iMiDEV? 放射合成器轉(zhuǎn)移和驗(yàn)證合成方法。

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結(jié)果

放射性核素提取、放射性標(biāo)記和純化在暗盒上的嵌入式微反應(yīng)器上進(jìn)行。對(duì)于初始測(cè)試，使用 50 至 200 MBq 的放射性，在優(yōu)化放射性標(biāo)記后，使用 1100 MBq 至 1200 MBq 來產(chǎn)生單一臨床劑量。進(jìn)行手動(dòng)放射性標(biāo)記以調(diào)節(jié)反應(yīng)混合物的pH值，手動(dòng)合成的放射化學(xué)產(chǎn)率（非分離）為95±5%（n = 4）。

放射性示蹤劑的詳細(xì)生產(chǎn)總結(jié)見表表 1.1.[68Ga]Ga-FAPI-46 和 [68Ga]Ga-DOTA-TOC分別為381±31 MBq和367±78 MBq。放射化學(xué)產(chǎn)率直流（RCY直流） 的 [68Ga]Ga-FAPI-46為44±5%（n = 3），放射化學(xué)純度為97.7±0.5%（HPLC）和98.2±0.15%（TLC）。對(duì)于 [68Ga]Ga-DOTA-TOC， RCY直流為46±7%（n=3），放射化學(xué)純度為99.6±0.2%（HPLC）和99.1±0.7%（TLC）。[68Ga]Ga-FAPI-46 和 [68合成結(jié)束時(shí)的Ga]Ga-DOTA-TOC分別為30±11 GBq/μmol（n = 3）和61±10 GBq/μmol（n = 3）。質(zhì)量控制測(cè)試的細(xì)節(jié)總結(jié)在表格中表2.2.所有進(jìn)行的質(zhì)量控制測(cè)試均符合歐洲藥典（Ph.Eur.）的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。TLC和HPLC的色譜圖（附加文件1：圖S1-S4）和[68Ga]Ga-DOTA-TOC 和 [68Ga]Ga-FAPI-46（附加文件 1：圖 S5-S6）位于附加文件 1 中。

為了驗(yàn)證完整自動(dòng)合成的可重復(fù)性，在Nancyclotep（放射化學(xué)實(shí)驗(yàn)室）使用與驗(yàn)證運(yùn)行相同的實(shí)驗(yàn)設(shè)置重復(fù)進(jìn)行。脈沖流方法使我們能夠獲得 [68Ga]Ga-FAPI-46 具有 42 ± 6% （n = 3） 的放射化學(xué)產(chǎn)率和高放射化學(xué)純度 （≥ 95%）。盒和模塊中的活性損失為 11 ± 2% （n = 3）。所有詳細(xì)信息都匯總在附加文件 1：表 S1 中。

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討論

放射合成優(yōu)化分三個(gè)步驟進(jìn)行，如圖所示。1.要優(yōu)化 [68嘎]嘎3+濃度，選擇Chromafix PS-H+樹脂，評(píng)估不同參數(shù)，如直接和反向捕獲和洗脫，以及不同批次的暗盒。對(duì)于放射性標(biāo)記，探索了不同的混合技術(shù)，以更好地混合[68嘎]嘎3+以及 R2 上的緩沖肽混合物，以實(shí)現(xiàn)高放射化學(xué)產(chǎn)率。優(yōu)化后，對(duì)HLB和C18樹脂進(jìn)行SPE純化和配制，并使用不同的乙醇洗脫壓力評(píng)估產(chǎn)品洗脫。最后，驗(yàn)證了優(yōu)化后的實(shí)驗(yàn)條件，以檢查使用同一合成模塊的不同研究中心結(jié)果的重現(xiàn)性。

優(yōu)化[68Ga]GaCl3

[68Ga]GaCl3是實(shí)現(xiàn)高放射性標(biāo)記產(chǎn)率的關(guān)鍵步驟，當(dāng)使用發(fā)生器進(jìn)行68Ga-洗脫液。然而，反應(yīng)器R2的有限體積（286 μL）帶來了挑戰(zhàn)，因?yàn)樗拗屏丝捎糜谙疵摰南疵撘旱捏w積，以及放射性標(biāo)記過程所需的緩沖液-肽混合物。測(cè)試了不同濃度和體積的洗脫液，以直接捕獲和洗脫[68Ga]GaCl3以提高從 R1 的恢復(fù)?？紤]到 R2 的體積，洗脫液的初始體積為 170 μL，濃度為 0.12 M HCl 在 5 M NaCl（洗脫液 1）中（Jussing 等人，2021 年）。所有測(cè)試在樣品瓶B（玻璃樣品瓶;0.3 mL）上的洗脫壓力為0.2 bar。所有測(cè)試的捕獲效率>98.5%。[68Ga]GaCl3總結(jié)在表中表3.3.[68Ga]GaCl3在相同的方向上如圖所示。2一個(gè)。[68嘎]嘎3+直接捕獲為 78 ± 4% （n = 10）。盡管在某些情況下實(shí)現(xiàn)了超過80%的回收率，但它缺乏可重復(fù)性，有時(shí)，我們觀察到[68Ga]GaCl3（45 ± 20%;n = 6），導(dǎo)致放射性顯著損失，對(duì)最終放射化學(xué)產(chǎn)率產(chǎn)生不利影響。[68Ga]GaCl3歸因于較大的相互作用表面積和R1上珠子填充密度的變化。為了解決這個(gè)問題，改變了R1的捕獲和洗脫方向，并將洗脫液濃度調(diào)整為5 M NaCl（洗脫液2）中的0.15 M HCl。此外，還探索了不同的洗脫液體積以優(yōu)化回收過程。

反向捕獲和洗脫（圖 1）。2b） 在正常和脈沖流下，使用 140 μL 洗脫液 2 產(chǎn)生 84 ± 4% （n = 12） 和 88 ± 4% （n = 17） 的回收率。連續(xù)流和交替流的回收率分別為 75 ± 8% （n = 21） 和 79 ± 6% （n = 6）。反向捕獲和洗脫的高回收率是由于樹脂與放射性的低表面積相互作用導(dǎo)致R1上殘留活性低，當(dāng)[68嘎]嘎3+從R1洗脫（圖1）。2將洗脫液 2 的體積增加到 200 μL 以優(yōu)化放射性標(biāo)記，將回收率略微提高到 91 ± 6% （n = 4）。通過反向捕獲實(shí)現(xiàn)，[68嘎]嘎3+增長了近20%。

對(duì)疏水閥施加不同的壓力 [68Ga]GaCl3在Chromafix PS-H +樹脂上，使用脈沖流洗脫顯示0.75和1.0 bar之間沒有顯著差異。兩個(gè)壓力值都使脈沖流量的回收率超過85%。因此，我們使用 1.0 bar 進(jìn)行捕獲 [68Ga]GaCl3和 200 mbar 用于在放射性標(biāo)記優(yōu)化過程中進(jìn)行的所有后續(xù)測(cè)試中的洗脫。然而，盡管優(yōu)化了洗脫條件，但由于 R1 上磁珠密度的變化，不同批次的盒式回收率較低。在合成中使用的不同批次的盒中觀察到這些珠密度的差異。使用R1上的壓降測(cè)試測(cè)量珠密度。當(dāng)在 R1 上施加 1 bar 時(shí)，當(dāng) R1 上的壓降落在 0.28–0.30 bar 范圍內(nèi)時(shí)，回收率最高，而低于 0.28 bar 的較低壓降值導(dǎo)致回收率降低。值得注意的是，本研究中使用的暗盒始終表現(xiàn)出大約 0.28–0.30 bar 的壓降。

放射性標(biāo)記的優(yōu)化

混合技術(shù)

洗脫 [68嘎]嘎3+經(jīng)過優(yōu)化，使用不同的混合技術(shù)對(duì)FAPI-46進(jìn)行放射性標(biāo)記，以實(shí)現(xiàn)高放射性標(biāo)記產(chǎn)率。使用相同體積的洗脫液、乙酸鹽緩沖液和肽手動(dòng)進(jìn)行放射性標(biāo)記，以調(diào)節(jié)反應(yīng)混合物的pH值。通過應(yīng)用不同的混合技術(shù)并使用不同體積的洗脫液和緩沖液-肽混合物獲得的放射化學(xué)產(chǎn)率（非分離）總結(jié)在表中表44.

首先，研究了直接捕獲和正常流動(dòng)的放射性標(biāo)記。放射性標(biāo)記具有挑戰(zhàn)性，因?yàn)?[68嘎]嘎3+和緩沖肽混合物;盡管如此，實(shí)現(xiàn)的放射化學(xué)產(chǎn)率（非分離）為64%±16%（n = 8）。緩沖液-肽混合物與R2中放射性的混合不充分主要?dú)w因于緩慢的擴(kuò)散速率，這是由于溶劑的粘度、氣泡的形成和微流控盒中流體的層流行為造成的。

[68Ga]GaCl3和洗脫液濃度（洗脫液2）進(jìn)行調(diào)整，以提高回收率和放射化學(xué)收率。雖然恢復(fù)良好（表（表3）3），這種組合導(dǎo)致正常流動(dòng)混合的放射化學(xué)產(chǎn)率（非分離）較差，為 27 ± 28% （n = 12）。這可以通過濃縮 [68嘎]嘎3+放入R2中，R2未與緩沖液-肽混合物混合，導(dǎo)致放射性標(biāo)記收率低。

具有反向捕獲和洗脫 [68嘎]嘎3+并檢查緩沖液-肽混合物以提高放射化學(xué)收率。這種方法在反向捕獲中效果更好，放射化學(xué)產(chǎn)率（非分離）為 67 ± 16% （n = 16）。我們?cè)诖_保重現(xiàn)性方面遇到了困難，主要是由于洗脫[68嘎]嘎3+.洗脫過程依賴于壓力驅(qū)動(dòng)的機(jī)制，由于使用不同的暗盒批次，因此難以保持一致性。每個(gè)批次中的壓降變化需要仔細(xì)管理R1中的壓力釋放和壓降，這對(duì)于每個(gè)測(cè)試都是不切實(shí)際的。即使是流量限制的微小調(diào)整也會(huì)直接影響混合，導(dǎo)致緩沖液被推到 [68嘎]嘎3+并隨后導(dǎo)致放射性標(biāo)記產(chǎn)量低。

評(píng)估了具有反向捕獲和洗脫的替代流動(dòng)，以解決R2中的混合問題。由于氣泡的形成影響了混合，該方法沒有顯著提高放射化學(xué)產(chǎn)率（非分離;68±18%;n = 6）。在大多數(shù)合成過程中，緩沖液的第一部分被轉(zhuǎn)移到 R2 的末端，而 [68嘎]嘎3+從 R1 洗脫，導(dǎo)致 V13 和 V14 之間的通氣堵塞，并阻止試劑從小瓶 B 和 C 流動(dòng)。

[68嘎]嘎3+在 R1 上執(zhí)行以釋放 30-40% 的被困 [68Ga]GaCl3在與M2中的緩沖液-肽混合物混合之前，在R1上。圖中顯示了使用不同的流動(dòng)/混合技術(shù)在R2上填充試劑的圖形表示以及R2填充不足的圖片。3.緩沖液和洗脫液的快速運(yùn)動(dòng)對(duì)混合的影響如圖所示。3a、b（左側(cè)）。由于緩慢/快速洗脫，緩沖液或放射性物質(zhì)都流向了R2的另一端?；旌霞夹g(shù)的正常、連續(xù)和替代流動(dòng)更容易在 R2 上形成氣泡（圖 1）。3d;右側(cè)），從而降低放射性標(biāo)記產(chǎn)量。相比之下，脈沖流技術(shù)表現(xiàn)出出色的試劑混合效果，從微流控盒中填充的R2可以明顯看出，如圖所示。3c（左上角）。

當(dāng)氣泡在R2中形成時(shí)，[68嘎]嘎3+和緩沖肽混合物;因此，沒有達(dá)到反應(yīng)混合物的合適pH值。當(dāng)在R2中觀察到混合不充分時(shí)，R4上留下了更多的放射性殘留物，這意味著68由于 pH 值的變化而導(dǎo)致的 Ga-膠體（Brom 等人，2016 年;McInnes 等人，2017 年）在 R2 中。

總體而言，雖然連續(xù)流動(dòng)和替代流動(dòng)方法產(chǎn)生了相當(dāng)和令人滿意的放射化學(xué)產(chǎn)率，但它們?cè)谥噩F(xiàn)性方面表現(xiàn)出局限性。然而，與連續(xù)流動(dòng)相比，盡管放射性標(biāo)記產(chǎn)量存在一些波動(dòng)，但替代流動(dòng)技術(shù)顯示出有希望的結(jié)果，并且回收率有所提高。我們開發(fā)并采用了脈沖流方法，以進(jìn)一步增強(qiáng)這種方法。

通過優(yōu)化替代流來調(diào)整脈沖流（連續(xù)-替代流）混合技術(shù)，以解決 R2 中的混合問題和氣泡形成。由于混合緩慢，達(dá)到了適合放射性標(biāo)記的pH值。因此，放射化學(xué)產(chǎn)率（非分離產(chǎn)物）為79±8%（n = 4）。對(duì)R2進(jìn)行預(yù)熱以增加試劑在R2上的擴(kuò)散速率。用脈沖流評(píng)估了 50 和 70 °C（設(shè)定點(diǎn)）的預(yù)熱溫度，對(duì)最終的放射化學(xué)產(chǎn)率沒有觀察到顯著影響。脈沖流技術(shù)允許高放射化學(xué)產(chǎn)率和可重復(fù)性。它還通過解決 [68嘎]嘎3+和緩沖液-肽混合物，以及不同批次的盒式。

試劑混合問題主要是由于使用不同流量的試劑混合過程中隨機(jī)形成氣泡，導(dǎo)致R2填充不足。這要?dú)w功于試劑在小瓶 B 中的快速/慢速洗脫，這是由于 R1 上的壓降變化以及偶爾有缺陷或受損的透氣孔。表中總結(jié)了不同混合方法的優(yōu)缺點(diǎn)表55.

通過評(píng)估不同反應(yīng)時(shí)間的影響來評(píng)估放射化學(xué)產(chǎn)率?？紤]到反應(yīng)體積，選擇反應(yīng)時(shí)間為5 min。然而，這導(dǎo)致了低放射化學(xué)產(chǎn)率（非分離）（50%;n = 1）。隨后，將反應(yīng)時(shí)間延長至10 min，使放射性標(biāo)記收率顯著提高至86%。因此，所有后續(xù)合成均始終保持10 min反應(yīng)時(shí)間。

在反應(yīng)中使用了不同量的前體，范圍從10到40μg，以評(píng)估其對(duì)使用盒的放射化學(xué)產(chǎn)率的影響。[68Ga]Ga-FAPI-46 和 [68使用不同量的母體獲得的Ga]Ga-DOTA-TOC總結(jié)在表中表6.6.最初，用 10 μg 母體進(jìn)行測(cè)試，在手動(dòng)合成中產(chǎn)生了定量結(jié)果 （n = 1）。然而，當(dāng)將相同量施加到微流控盒上時(shí)，放射化學(xué)產(chǎn)率 [68Ga]Ga-FAPI-46（31 ± 2%;衰減校正;n = 2）和[68Ga]Ga-DOTA-TOC（26 ± 4%;衰變校正;n = 2）不能令人滿意，因?yàn)樾∑恐袣埩舻乃荔w積導(dǎo)致前體利用不足。然后將前驅(qū)體量從10 μg增加到40 μg，以提高放射化學(xué)轉(zhuǎn)化率和重現(xiàn)性。當(dāng)前驅(qū)體數(shù)量增加時(shí)，F(xiàn)API-46和DOTA-TOC的放射化學(xué)產(chǎn)率均增加。然而，混合不良也導(dǎo)致了[68Ga]Ga-FAPI-46（53± 1%;衰減校正;n = 2）和[68Ga]Ga-DOTA-TOC（41±5%;衰變校正;n = 2），即使使用40μg前體進(jìn)行合成。在優(yōu)化混合技術(shù)后，選擇脈沖流法，并將兩者的最終前體濃度固定為20 μg（2 mg/mL）[68Ga]Ga-FAPI-46 （62 ± 2%; n = 2） 和 [68Ga]Ga-DOTA-TOC（51 ± 4%;n = 2），以確保最佳和一致的放射化學(xué)產(chǎn)率。然而，由于前體小瓶中的死體積（30–50 μL），總共沒有使用170 μL的緩沖液-前體混合物進(jìn)行合成，并且使用了四分之三的前體量（≈ 15 μg）進(jìn)行合成。

有趣的是，在優(yōu)化的洗脫壓力下，兩種樹脂在使用56%乙醇洗脫產(chǎn)品方面沒有觀察到差異。然而，當(dāng)在放射性標(biāo)記過程中發(fā)生混合不充分時(shí)，兩種樹脂上都保留了更多的放射性，這歸因于68由于反應(yīng)混合物中的pH值變化而形成的Ga膠體。在SPE純化步驟中，選擇HLB樹脂進(jìn)行后續(xù)測(cè)試，并使用0.65 bar洗脫壓力有效洗脫產(chǎn)品。

放射性在完全放射合成（產(chǎn)物、濾光片和微流控盒）中的分布

[68使用脈沖流方法實(shí)現(xiàn)的Ga]Ga-FAPI-46為51±5%（衰減校正;n = 13）（附加文件1：表S2）。比較 RCY直流的 [68Ga]Ga-FAPI-46 使用常規(guī)方法 69 ± 4%（來自 Eckert 和 Ziegler 的模塊化實(shí)驗(yàn)室 Pharmtracer;n = 4）（Jussing 等人，2021 年）和 66 ± 8%（Trasis AiO 平臺(tái);n = 10）（Pieve 等人，2022 年），我們的產(chǎn)量相當(dāng)，足以用于臨床和臨床前應(yīng)用。值得注意的是，這些常規(guī)方法還對(duì)[68Ga]GaCl3.通過測(cè)量放射化學(xué)產(chǎn)率、合成廢料和過濾器來分析完整合成的放射性分布。

我們還評(píng)估了完全放射合成后微流控盒的殘余活性。整個(gè)放射性合成過程中的放射性分布如圖所示。4一個(gè)。RCY公司直流成功批次的 [68Ga]Ga-FAPI-46 和 [68Ga]Ga-DOTA-TOC為51±4%（n = 3），合成廢物為38±4%（n = 3），無菌過濾器和盒中的殘留活性分別為3±1%和8±0.1%（n = 3）（附加文件1：表S3）。在合成廢物中觀察到更多的放射性，這可以通過試劑的次優(yōu)混合來解釋。還對(duì)暗盒進(jìn)行手動(dòng)切片以測(cè)量各個(gè)部件，以評(píng)估殘余活性分布。圖中顯示了盒的殘余活性的摘要。4b.R1、R2 和 R4 的保留活性分別為 1.5 ± 0.3%、1 ± 0.6% 和 3.2 ± 1.2% （n = 3）。由于磁珠與產(chǎn)物的大表面積之間的相互作用，R4 上的最高殘留活性更高。此外，在通風(fēng)口中觀察到 1.1% ± 0.3% （n = 3） 的損失。R3和制劑室的活性分別為0.5±0.3%（n = 3）和0.5±0.1%（n = 3）（附加文件1：表S4）。

表觀摩爾活性 （AMA）

[68Ga]Ga-FAPI-46 和 [68Ga]Ga-DOTA-TOC在驗(yàn)證運(yùn)行后進(jìn)行測(cè)量。合成結(jié)束時(shí)測(cè)得的表觀摩爾活性為30±11 GBq/μmol（n = 3），[68Ga]Ga-FAPI-46 和 61 ± 10 GBq/μmol （n = 3） 用于 [68Ga]Ga-DOTA-TOC.基于微流控生產(chǎn)的 AMA [68Ga]Ga-FAPI-46 高于基于試劑盒的 [68Ga]Ga-FAPI-46（10 ± 1.7 GBq/μmol;n = 4）（Jussing 等人，2021 年）和 13–30 GBq/μmol;n = 3 （Spreckelmeyer 等人，2020 年），也適用于 [68Ga]Ga-DOTA-TOC（21.7 ± 5.6 GBq/μmol;n = 86）（Jussing 等人，2021 年）。這是因?yàn)樵诨谖⒘骺氐暮铣芍惺褂玫那膀?qū)體量幾乎減少了 3 倍。此外，我們正在努力進(jìn)一步提高放射化學(xué)產(chǎn)率，以增加68Ga標(biāo)記的化合物，主要應(yīng)用于治療診斷學(xué)應(yīng)用。

放射化學(xué)產(chǎn)率與傳統(tǒng)模塊的比較

[68將使用iMiDEV?微流控模塊的Ga]Ga-FAPI-46與其他兩個(gè)常規(guī)模塊進(jìn)行了比較。所有細(xì)節(jié)都總結(jié)在附加文件 1：表 S5 中。所有質(zhì)量測(cè)試要求都與傳統(tǒng)組件質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)相當(dāng)，但與 Eckert 和 Ziegler 的模塊化實(shí)驗(yàn)室制藥示蹤劑 （MLPT）（69 ± 4% n = 4） 相比，放射化學(xué)產(chǎn)率 iMiDEV? 組件（44 ± 5%;n = 3）（Alfteimi et al. 202±2）的產(chǎn)率較低。但是，RCY 對(duì)于單劑量或 DOD 要求是令人滿意的。iMiDEV?的產(chǎn)率較低可以解釋為合成時(shí)間增加以及由于不同批次的微珠填充導(dǎo)致試劑混合不充分。我們正在努力改善微流控盒在R1上的背壓方面的狀況，這對(duì)于實(shí)現(xiàn)可重復(fù)性至關(guān)重要。由于所有試劑的轉(zhuǎn)移都是由壓力驅(qū)動(dòng)的，因此在填充過程中，由于其尺寸（40–85 μm）而導(dǎo)致的磁珠密度的任何變化都會(huì)顯著影響小體積的轉(zhuǎn)移和混合。目前，我們正在利用我們的經(jīng)驗(yàn)制造具有均勻尺寸珠子的微流控盒。這種調(diào)整旨在確保整個(gè)盒裝批次的背壓一致，從而消除不同批次之間的生產(chǎn)差異。該原理也適用于用于固相萃取 （SPE） 純化的 R4，其中背壓升高可以延長純化時(shí)間。最終，這種優(yōu)化可以解決合成條件的不一致，使模塊條件更加穩(wěn)健。這表明iMiDEV?模塊在臨床生產(chǎn)中的應(yīng)用潛力。

盒式材料的選擇以其化學(xué)不敏感性而聞名，不僅維護(hù)了系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)穩(wěn)健性，而且在確保合成過程的完整性方面起著關(guān)鍵作用（Ovdiichuk 等人，2021 年）。此外，由于采用一次性盒式生產(chǎn)，因此不存在交叉污染問題，這與基于盒式磁帶的生產(chǎn)一致。使用微流控盒進(jìn)行生產(chǎn)，在合成過程中不會(huì)引入雜質(zhì)，從而確保產(chǎn)品質(zhì)量。

在不同的研究中心驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)條件

在不同的研究中心評(píng)估了iMiDEV?模塊的相同實(shí)驗(yàn)條件和合成配方，以評(píng)估結(jié)果的可重復(fù)性。保持合成和盒要求中使用的所有試劑以重現(xiàn)結(jié)果。僅對(duì)[68Ga]Ga-FAPI-46，放射化學(xué)產(chǎn)率為42±6%（n = 3）。

在不同的研究中心復(fù)制裝置時(shí)觀察到的放射化學(xué)產(chǎn)量下降可能源于幾個(gè)因素。一個(gè)關(guān)鍵方面是微流控系統(tǒng)對(duì)不同實(shí)驗(yàn)室之間環(huán)境條件、個(gè)人培訓(xùn)和設(shè)備校準(zhǔn)變化的敏感性。溫度、壓力（流動(dòng)動(dòng)力學(xué)）或其他實(shí)驗(yàn)參數(shù)的微小差異可能會(huì)影響合成的重現(xiàn)性。此外，試劑質(zhì)量和特性的變化，即使看似相同，也可能導(dǎo)致產(chǎn)量的差異。即使是反應(yīng)器腔室中珠子密度的微小偏差也可能導(dǎo)致流動(dòng)阻力的變化，從而影響產(chǎn)量。研究中心之間的合作努力，以標(biāo)準(zhǔn)化方案、校準(zhǔn)設(shè)備和驗(yàn)證試劑，對(duì)于提高基于微流控的合成方法在不同地點(diǎn)的可重復(fù)性至關(guān)重要。系統(tǒng)地解決這些因素將有助于在不同的研究環(huán)境中成功實(shí)施這項(xiàng)技術(shù)，并為更廣泛的基于微流體的放射性示蹤劑合成領(lǐng)域貢獻(xiàn)寶貴的知識(shí)。

為了增強(qiáng)方法的彈性并盡量減少出錯(cuò)的機(jī)會(huì)，建議對(duì)參與合成過程的工作人員實(shí)施全面的培訓(xùn)計(jì)劃。此外，考慮到某些部件的潛在脆弱性，加強(qiáng)設(shè)備的耐用性，并就處理敏感部件提供明確的指導(dǎo)方針，有助于將故障風(fēng)險(xiǎn)降至最低。評(píng)估系統(tǒng)在不同操作員技能和潛在錯(cuò)誤情況下的性能的魯棒性研究對(duì)于在不同環(huán)境中建立基于微流控的合成方法的可靠性很有價(jià)值。我們從更廣闊的角度全面評(píng)估所有變化，以應(yīng)對(duì)在不久的將來在不同研究中心驗(yàn)證不同合成方法的潛在挑戰(zhàn)。

研究的局限性和未來展望

盡管在基于微流控的放射性示蹤劑合成方面取得了可喜的進(jìn)展，但某些局限性值得考慮。目前重點(diǎn)關(guān)注已建立的示蹤劑，例如 [68Ga]Ga-FAPI-46 和 [68Ga]Ga-DOTA-TOC可能會(huì)將研究結(jié)果的推廣范圍限制在更廣泛的放射性藥物上。有必要進(jìn)一步探索該系統(tǒng)對(duì)各種示蹤劑的適應(yīng)性，以便進(jìn)行全面評(píng)估。該研究主要涉及技術(shù)方面，需要進(jìn)行額外的研究，以評(píng)估常規(guī)臨床前和臨床使用的經(jīng)濟(jì)可行性和可擴(kuò)展性。產(chǎn)量的波動(dòng)凸顯了優(yōu)化以提高可重復(fù)性的必要性。雖然努力在不同的實(shí)驗(yàn)室中復(fù)制合成，但更廣泛的多中心驗(yàn)證將增強(qiáng)系統(tǒng)的穩(wěn)健性。該研究沒有廣泛涵蓋監(jiān)管批準(zhǔn)的挑戰(zhàn)，這是臨床實(shí)施的一個(gè)關(guān)鍵方面。認(rèn)識(shí)到并解決這些局限性將指導(dǎo)未來的研究，將微流控合成更有效地轉(zhuǎn)化為常規(guī)臨床實(shí)踐。

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結(jié)論

我們的研究成功地優(yōu)化并建立了[68Ga]Ga-FAPI-46 和 [68Ga]Ga-DOTA-TOC使用基于微流控盒的iMiDEV?模塊，并實(shí)現(xiàn)了足夠的放射化學(xué)產(chǎn)率和高表觀摩爾活性，可用于臨床前和臨床使用。這種方法可以很容易地適應(yīng)常規(guī)臨床前和臨床應(yīng)用中的單劑量或DOD。脈沖流混合方法有效地提供了混合良好的試劑和一致的產(chǎn)量，從而實(shí)現(xiàn)了全自動(dòng)化過程。我們對(duì)各種參數(shù)進(jìn)行了微調(diào)，包括反應(yīng)溫度、前驅(qū)體用量和純化方法。前驅(qū)體用量被優(yōu)化到比傳統(tǒng)方法少2-3倍。已經(jīng)解決了與磁珠填充可變性相關(guān)的挑戰(zhàn)，以提高產(chǎn)量和可重復(fù)性。我們的研究證明了微流控方法在高效可靠的放射性金屬放射性藥物合成方面的潛力，為該領(lǐng)域的未來發(fā)展提供了寶貴的見解，并為常規(guī)臨床前和不久的將來的臨床應(yīng)用鋪平了道路。

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材料和方法

這68通用 電氣/68Ga 發(fā)電機(jī) （1.85 GBq） 購自德國柏林的 Eckert 和 Ziegler。本研究中使用的微流控盒（一次性）和自動(dòng)微流控 iMiDEV? 放射合成器由法國佩尼爾的 PMB-Alcen 提供。醋酸鹽緩沖液 pH 4.6 （31048–500 mL） 和水 （TraceSELECT，?用于痕量分析，2.5 L） 購自德國 Seelze 的 Honeywell （Fluka）。鹽酸 （HCl）、醋酸銨、甲醇、三氟乙酸、抗壞血酸鈉和 5 M NaCl 購自德國 Sigma Aldrich。乙腈（HPLC級(jí)）是從瑞典Fisher Scientific訂購的。DOTA-TOC（目錄號(hào)不。HY-106033）和FAPI-46（貨號(hào)。不。HY-137331）購自瑞典索倫蒂納的MedChemTronica。無菌水（注射用）和0.9%氯化鈉由德國Melsungen的B Braun提供。乙醇（99.5%）購自瑞典馬爾默的KiiltoClean。無水乙醇購自法國Val de Reuil的Carlo Erba Reagents SAS。無菌通氣過濾器（Millex FG. 0.2 μm，25 mm）和無菌過濾器（Millex GV，0.22 μm，33 mm）購自愛爾蘭Carrigtwohill的Merck Millipore。無菌 15 mL 小瓶購自中國華誼同位素有限公司 （HIC）。iTLC-SG 聯(lián)帶 （SGI0001） 是從美國加利福尼亞州安捷倫訂購的。Milli-Q水（18 MΩ）來自內(nèi)部的Millipore凈水系統(tǒng)。玻璃樣品瓶用于從瑞典尼克瓦恩的Nordic Pack采購的試劑（4 mL和15 mL）。插入瓶 （300 μL） 和帶隔墊 （11 mm） 的鋁密封件從德國 Langerwehe 的 Thermo Scientific 訂購。Wheaton? W986212NG NextGen? V 樣品瓶? 0.3 mL 透明玻璃高回收率樣品瓶由美國 Wheaton 提供。

基于微流控盒的iMiDEV?放射合成器

基于微流控盒的iMiDEV?放射合成器用于執(zhí)行[68Ga]Ga-DOTA-TOC 和 [68Ga]Ga-FAPI-46合成。無線電合成器分為兩部分：i）合成盒和ii）控制模塊。合成盒允許我們使用微流控盒和試劑進(jìn)行放射化學(xué)?？刂颇K有助于在自動(dòng)模式下執(zhí)行所有合成過程，而無需手動(dòng)中斷。先前報(bào)道了模塊和暗盒的詳細(xì)工作原理（Ovdiichuk 等人，2021 年;Mallapura 等人，2022 年）。模塊工作原理詳細(xì)信息在附加文件 1 （SI;iMiDEV?放射合成器工作原理;第7-8頁）。該盒的概述，包括用于合成、反應(yīng)器和混合器的所有試劑，如圖所示。5.

[68Ga]Ga-FAPI-46 和 [68Ga]Ga-DOTA-TOC

優(yōu)化[68Ga]GaCl3 

對(duì)所有暗盒進(jìn)行了壓降測(cè)試，以檢查是否有任何泄漏（Mallapura 等人，2022 年）。在特定壓力條件 （1 bar） 下，使用 EV A 或 B 上的空小瓶測(cè)量 R1 上的壓降，流量通過 R1 流向廢物。這些測(cè)試有助于深入了解反應(yīng)器腔內(nèi)珠子的排列情況。當(dāng) R1 中的磁珠沒有密集堆積時(shí)，會(huì)導(dǎo)致流動(dòng)阻力降低。相反，當(dāng)珠子緊湊排列時(shí)，它會(huì)導(dǎo)致更高的流動(dòng)阻力。然后根據(jù) R1 上測(cè)得的壓降選擇暗盒。選擇壓降為 0.2 至 0.3 bar 的膜盒對(duì) R1 進(jìn)行捕獲和洗脫。[68Ga]GaCl3按照先前研究（Ovdiichuk 等人，2022 年，2023 年）中提出的方法，使用 Chromafix PS-H + 樹脂進(jìn)行，并根據(jù) Mueller 等人（2012 年）的工作調(diào)整洗脫技術(shù)。在這種方法中，R1 （50 μL） 填充 Chromafix PS-H + 樹脂以濃縮 [68Ga]GaCl3.在整個(gè)優(yōu)化測(cè)試過程中，樣品瓶 B 位置用于淋洗液輸送。在優(yōu)化過程中，我們加入了插入器和全玻璃瓶 （300 μL），以減少死體積。這68Ga-洗脫液是從68通用 電氣/685 mL 0.1 M HCl 中的 Ga 發(fā)生器。將所有必需的試劑小心地放在盒上，然后夾在對(duì)接板上。

探索不同的洗脫策略，例如洗脫液的濃度和體積。評(píng)估了兩種不同濃度的5 M NaCl（洗脫液1）中的0.12 M HCl和5 M NaCl（洗脫液2）中的0.15 M HCl。評(píng)估了直接和反向捕獲以提高 [68Ga]GaCl3.直接和反向捕獲和洗脫的詳細(xì)程序添加到附加文件 1 （SI;優(yōu)化[68Ga]GaCl3;第8-9頁）。

捕獲效率的百分比是通過將R1上的捕獲活性除以起始活性來計(jì)算的，回收的百分比[68嘎]嘎3+通過將收集的活性除以Chromafix PS-H +墨盒上的捕獲活性來計(jì)算。

放射性標(biāo)記的優(yōu)化

為了優(yōu)化放射性標(biāo)記，進(jìn)行自動(dòng)合成，并分析反應(yīng)混合物以確定放射化學(xué)純度。放射性標(biāo)記反應(yīng)也使用為自動(dòng)放射性標(biāo)記選擇的相同體積的洗脫液、乙酸鹽緩沖液和前體手動(dòng)進(jìn)行。手動(dòng)放射性標(biāo)記的反應(yīng)溫度設(shè)定為95°C，反應(yīng)時(shí)間為5-10分鐘。在自動(dòng)合成的第一步中，[68Ga]GaCl3被困在R1上，并填充了Chromafix PS-H +樹脂。捕獲 [68Ga]GaCl3在微量小柱（R1）上，用水洗滌（TraceSELECT，?用于痕量分析），然后洗脫[68Ga]GaCl3將酸化的NaCl加入微反應(yīng)器R2（286μL）中，并與緩沖液和肽混合物同時(shí)混合。

采用不同的混合技術(shù)進(jìn)行放射性標(biāo)記。反應(yīng)器R2內(nèi)使用不同流動(dòng)技術(shù)混合試劑的圖形可視化如圖所示。6.試劑的混合比例在不同的壓力和從洗脫液和緩沖液肽混合物瓶中分液的時(shí)間進(jìn)行管理。

探討了以下混合技術(shù);對(duì)于所有這些，都使用了洗脫液（位置B）和緩沖液-肽混合物（位置C）樣品瓶的確切位置。樣品瓶 B 和 C 的死體積為 30–50 μL。

• （一）

  正常流式：該技術(shù)首先洗脫 [68Ga]GaCl3從 R1 到 R2，然后是緩沖液-肽混合物。將緩沖肽混合物推入R2后，將其與洗脫液混合（圖1）。6然后，進(jìn)行反應(yīng)。

• （二）

  連續(xù)流：在開始連續(xù)流之前，R1上的放射性洗脫到混合器2中。洗脫液和緩沖液混合物通過混合器2同時(shí)釋放到R2（圖1）。6混合器 2 有助于在進(jìn)入 R2 之前混合試劑。

• （三）

  替代流：在這種方法中，放射性在開始替代流之前洗脫到混合器 2 中。然后，將一定比例的緩沖液混合物加入到R2中，然后完全洗脫Ga-68，最后將剩余的緩沖液混合物加入到R2中。試劑的混合是通過增加相互作用的表面積通過擴(kuò)散實(shí)現(xiàn)的（圖1）。6c).

• （四）

  脈沖流：混合方法改為連續(xù)交替或脈沖流（圖 1）。6d）. 按照這種方法，[68嘎]嘎3+并將緩沖液-肽混合物逐部分洗脫到預(yù)熱的反應(yīng)器2中（圖1）。7).優(yōu)化了微流控閥的打開和關(guān)閉時(shí)間，以實(shí)現(xiàn)可重復(fù)性和高放射性標(biāo)記產(chǎn)量。優(yōu)化后，我們將這種混合技術(shù)應(yīng)用于其余的合成。

  

  圖7

  脈沖流和反應(yīng)器 2 填充淋洗液和緩沖液的視覺表示

混合后，將反應(yīng)混合物在130°C（設(shè)定溫度）下加熱10分鐘，然后冷卻至40°C。 用無菌水收集反應(yīng)混合物，使用分析型HPLC和無線電TLC掃描儀分析放射化學(xué)效率。在優(yōu)化放射性標(biāo)記后，將最終產(chǎn)品的固相萃?。⊿PE）純化和配制步驟添加到自動(dòng)化過程中。放射性標(biāo)記產(chǎn)物被困在R4（HLB樹脂）上，同時(shí)用無菌水洗滌反應(yīng)混合物以將其與未結(jié)合的混合物分離68加語。完成這些步驟后，用無菌水沖洗R4，然后用乙醇（56%）洗脫。最后，用生理鹽水配制產(chǎn)品，并通過無菌過濾器收集在無菌小瓶中。

制備用于驗(yàn)證運(yùn)行的試劑和暗盒

選擇壓降為 0.28 至 0.30 bar 的暗盒。用于合成的試劑列表匯總在附加文件 1：表 S6 中。使用水（TraceSELECT，?用于痕量分析）制備FAPI-46（2.26mM）和DOTA-TOC（1.4mM）儲(chǔ)備溶液。將 10 μL 儲(chǔ)備溶液與 150 μL 乙酸鹽緩沖液和 10 μL 抗壞血酸鈉 （30 mg/mL） 一起用于小瓶 C 中。將酸化的 5 M NaCl（0.15 M HCl 溶于 5 M NaCl 中）裝入小瓶 B 中，用于洗脫68將小瓶D裝滿3 mL含有抗壞血酸鈉（15 mg）的無菌水，以洗滌R2中的反應(yīng)混合物。樣品瓶 F 中裝有 1.2 mL 乙醇 （56%），用于從 R4 洗脫產(chǎn)物。將小瓶 G 中裝滿 8 mL 生理鹽水（5 mg/mL 抗壞血酸鈉）用于配制。將小瓶 H 填充 3 mL 乙醇進(jìn)行 R4 預(yù)處理。小瓶 I 充滿 8 mL 含有抗壞血酸鈉 （40 mg/mL） 的無菌水，用于在 SPE 純化過程中洗滌 R4。除前體外，所有試劑均相同。68Ga]Ga-FAPI-46 和 [68Ga]Ga-DOTA-TOC.

放射性合成68Ga標(biāo)記的FAPI-46和DOTA-TOC

優(yōu)化后，所有合成步驟均在自動(dòng)模式下執(zhí)行，除68Ga -洗脫。將所有試劑裝入盒中并放入合成盒中。整個(gè)合成分三個(gè)步驟進(jìn)行：（a）濃縮和洗脫[68Ga]GaCl3（b）放射性標(biāo)記，以及（c）純化和配制。合成步驟的流程圖如圖所示。8.所有合成步驟均使用iMiDEV?監(jiān)督單獨(dú)顯示，放射合成程序的詳細(xì)信息可在SI中找到（附加文件1：圖S7-S14;第10-14頁）。

合成結(jié)束后，進(jìn)行質(zhì)量控制測(cè)試。來自完整合成的放射性傳感器圖如圖所示。9.放射化學(xué)產(chǎn)率的計(jì)算方法是將衰變校正的產(chǎn)物活性除以合成中使用的初始活性，然后從合成后的殘余初始活性中減去。

[68Ga]Ga-FAPI-46 和 [68使用與用于放射化學(xué)純度測(cè)定的分析HPLC相同的方法分析Ga]Ga-DOTA-TOC，并使用兩者的校準(zhǔn)曲線進(jìn)行計(jì)算[68Ga]Ga-FAPI-46 和 [68Ga]Ga-DOTA-TOC.

質(zhì)量管理

在合成結(jié)束后，通過目視檢查最終產(chǎn)品小瓶來檢查最終產(chǎn)品的外觀。使用pH試紙（pH 2–9，MQuant，Merck?）測(cè)定最終產(chǎn)品的pH值。使用LabLogic Scan-RAM TLC系統(tǒng)中的分析型HPLC（Agilent）和iTLC測(cè)定放射化學(xué)純度和穩(wěn)定性。分析型 HPLC 具有四元泵 G1311A、自動(dòng)進(jìn)樣器、紫外 （UV） 檢測(cè)器 G1314D 和無線電檢測(cè)器。對(duì)于 [68以0.1%三氟乙酸（TFA）的乙腈溶液（溶劑A）和0.1%TFA的H溶液為固定相和梯度流動(dòng)相，以反相色譜柱C18,5 μm，4.6*150 mm（Waters Atlantis）為固定相和梯度流動(dòng)相2O（溶劑B）;0–8 min，13–87% 溶劑 A;8-10 分鐘，87-13% 溶劑 A;10–14分鐘，13%溶劑A。流速為1.2 mL/min，UV波長為220 nm。對(duì)于 [68以0.1% TFA的乙腈溶液（溶劑A）和0.1% TFA的反相色譜柱X-18 μm，4.6*150 mm的反相柱Ga]Ga-DOTA-TOC為固定相和梯度流動(dòng)相2O（溶劑B）;0–10 min，13%–100% 溶劑 A;10–12 min，100–87% 溶劑 A;12–16分鐘，13%溶劑A。流速為1.2 mL/min，UV波長為260 nm。對(duì)于iTLC，使用浸漬硅膠（SG）的玻璃超細(xì)纖維色譜紙作為固定相，使用50%的1M醋酸銨和50%甲醇（1：1）作為兩種放射性示蹤劑的流動(dòng)相。通過測(cè)量放射性核素的半衰期來確定放射性核素的特性。使用 Agilent（6850 型）氣相色譜法進(jìn)行殘留溶劑分析。使用Endosafe? Nextgen-PTS Kinetic Reader（Charles River Laboratories，USA）進(jìn)行內(nèi)毒素測(cè)試。使用瑞典 DM automation 定制的氣泡點(diǎn)測(cè)試儀進(jìn)行過濾器完整性測(cè)試。

補(bǔ)充資料

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確認(rèn)

作者感謝卡羅林斯卡醫(yī)學(xué)院精神病學(xué)科和斯德哥爾摩卡羅林斯卡大學(xué)醫(yī)院放射性藥學(xué)的所有PET小組成員。瑞典?？_林斯卡大學(xué)醫(yī)院的放射性藥學(xué)核心設(shè)施 （RCF） 因?yàn)楸狙芯刻峁?Ga-68 洗脫液而受到高度認(rèn)可。

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縮寫

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作者貢獻(xiàn)

概念化，HM、SN、CH 和 BL;方法論、HM、SN、CH、LT、TT、EJ 和 BL;軟件，HM;驗(yàn)證、HM、OO 和 CC;形式分析，HM、SN、CH、LT 和 BL;調(diào)查、HM、TT、CP 和 SN;資源、SN、CH、TT 和 LT;數(shù)據(jù)管理，HM，OO，;寫作——原始草稿準(zhǔn)備，HM;寫作——審查和編輯 HM、SN、CH、LT、EM、TT、OO、CC、CP 和 BL;可視化，HM，SN;監(jiān)督、SN、CH、LT 和 BL;項(xiàng)目管理，HM、SN、CH 和 LT;資金收購，SN 和 CH。

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資金

卡羅林斯卡學(xué)院提供開放獲取資金。這項(xiàng)研究沒有得到外部資助。卡羅林斯卡學(xué)院提供開放獲取資金。

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數(shù)據(jù)和材料的可用性

當(dāng)前研究期間使用和/或分析的數(shù)據(jù)集可根據(jù)合理要求從通訊作者處獲得。

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聲明

倫理批準(zhǔn)和參與同意

不適用。

同意發(fā)布

不適用。

利益爭奪

作者聲明他們沒有相互競爭的利益。

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腳注

版本說明

施普林格·自然（Springer Nature）對(duì)已出版地圖和機(jī)構(gòu)隸屬關(guān)系中的管轄權(quán)主張保持中立。

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引用

EJNMMI 放射性藥學(xué)和化學(xué)的文章由施普林格提供