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本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了臨床抗菌藥物敏感性試驗(yàn)的技術(shù)要求，包括常規(guī)藥敏試驗(yàn)的藥物選擇和報(bào)告、藥敏試
驗(yàn)方法、各種屬細(xì)菌藥敏試驗(yàn)、常見菌特殊耐藥表型檢測、藥敏試驗(yàn)的質(zhì)量控制、商品化藥敏試驗(yàn)檢測
系統(tǒng)的性能驗(yàn)證。本標(biāo)準(zhǔn)適用于開展臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)的各級臨床實(shí)驗(yàn)室。2 術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。2.1
抗微生物藥物敏感性試驗(yàn) Antimicrobial susceptibility testing
檢測微生物（本文件特指細(xì)菌）對抗微生物藥物（本文件特指抗菌藥物）的體外敏感性，以指導(dǎo)臨
床合理選用藥物的微生物學(xué)試驗(yàn)，簡稱藥敏試驗(yàn)。2.2
最低抑菌濃度 Minimal inhibitory concentration；MIC
在瓊脂或肉湯稀釋法藥物敏感性檢測試驗(yàn)中能抑制肉眼可見的微生物生長的最低抗菌藥物濃度。2.3
折點(diǎn) Breakpoint
能預(yù)測臨床治療效果，用以判斷敏感、中介、劑量依賴型敏感、耐藥、非敏感的最低抑菌濃度（MIC）
或者抑菌圈直徑（mm）的數(shù)值。2.3.1
敏感 Susceptible；S
當(dāng)抗菌藥物對分離株的MIC值或抑菌圈直徑處于敏感范圍時(shí)，使用推薦劑量進(jìn)行治療，該藥在感染
部位通常達(dá)到的濃度可抑制被測菌的生長，臨床治療可能有效。2.3.2
中介 Intermediate；I
當(dāng)菌株的MIC值或抑菌圈直徑處于中介時(shí)，該數(shù)值接近藥物在血液和組織中達(dá)到的濃度，從而治療
反應(yīng)率低于敏感菌群。該分類意味著采用高于常規(guī)劑量治療時(shí)或在藥物生理濃集的部位，臨床治療可能有效。該分類同樣可作為“緩沖域”，以防止由微小、不可控的技術(shù)因素導(dǎo)致的重大偏差，尤其是毒性
范圍較窄的藥物。2.3.3
劑量依賴型敏感 Susceptible-dose dependent；SDD
細(xì)菌菌株對抗菌藥物的敏感性依賴于抗菌藥物的劑量。當(dāng)某種藥物對菌株的MIC或抑菌圈直徑在SDD
范圍時(shí)，臨床可通過提高劑量和（或）增加給藥頻率等修正給藥方案以達(dá)到臨床療效。2.3.4
耐藥 Resistant；R
當(dāng)抗菌藥物對分離株的MIC值或抑菌圈直徑處于該分類范圍時(shí)，使用常規(guī)治療方案，該藥在感染部
位所達(dá)到的藥物濃度不能抑制細(xì)菌的生長，和（或）被測菌株獲得特殊耐藥機(jī)制，且治療性研究顯示該
藥臨床療效不確切。2.3.5
非敏感 Nonsusceptible；NS
對于那些因未現(xiàn)或罕現(xiàn)耐藥，而僅具有敏感折點(diǎn)的抗菌藥物， 當(dāng)該藥對某分離株的MIC值高于或抑
菌圈直徑低于敏感折點(diǎn)時(shí)，此分類為非敏感。2.4
流行病學(xué)界值 Epidemiological cutoff value；ECV
將微生物群體區(qū)分為有或無獲得性耐藥的MIC值或抑菌圈直徑，是群體敏感性的上限。根據(jù)ECV，可
將菌株分為野生型和非野生型。2.4.1
野生型 Wild-type；WT
根據(jù)ECV值，將抗菌藥物（包括抗真菌藥物）評估中未獲得耐藥機(jī)制或無敏感性下降的菌株定義為
野生型。2.4.2
非野生型 Non-wild-type；NWT
根據(jù)ECV值，將抗菌藥物（包括抗真菌藥物）評估中獲得了耐藥機(jī)制或存在敏感性下降的菌株，定
義為非野生型。2.5
效價(jià) Potency
抗菌藥物中具有抗菌活性的成分，通過同類標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)測定得出。單位mg/g、IU/g或用百分比表示。 2.6
基本一致性 Essential agreement；EA
待測MIC系統(tǒng)與參考方法MIC值相差不超過1個(gè)稀釋倍數(shù)。當(dāng)待評估方法為紙片擴(kuò)散法時(shí)，不計(jì)算EA。 2.7
分類一致性 Categorical agreement；CA
被評估藥敏方法與參考方法判斷試驗(yàn)結(jié)果為敏感、中介、耐藥的一致性。 2.8
極重大誤差 Very major error；VME
將耐藥誤判為敏感，即假敏感。 2.9
重大誤差 Major error，ME
將敏感誤判為耐藥，即假耐藥。 2.10
小誤差 Minor error
將中介判為敏感或耐藥、或者將耐藥或敏感判為中介。 2.11
常規(guī)藥敏試驗(yàn) Routine test
用于臨床常規(guī)檢測的紙片擴(kuò)散法、肉湯或瓊脂稀釋法。 2.12
補(bǔ)充（非常規(guī)）藥敏試驗(yàn) Supplemental (not routing) test
通過常規(guī)紙片擴(kuò)散法、肉湯或瓊脂稀釋法以外的方法檢測某種或某類藥物的敏感性或耐藥性，且該
方法無需額外試驗(yàn)確證藥物的敏感性或耐藥性。 2.13
篩選試驗(yàn) Screening test
提供假定結(jié)果的試驗(yàn)。當(dāng)篩查結(jié)果陽性時(shí)，需進(jìn)行附加試驗(yàn)進(jìn)行確認(rèn)。 2.14
替代藥物試驗(yàn) Surrogate agent test
當(dāng)目標(biāo)抗菌藥物的藥敏無法檢測或替代藥物的藥敏檢測性能優(yōu)于目標(biāo)藥物時(shí)，該藥物可替代目標(biāo)藥
物進(jìn)行藥敏試驗(yàn)。 2.15
等效藥物試驗(yàn) Equivalent agent test
某藥可預(yù)測與其密切相關(guān)的同類藥物的藥敏結(jié)果，測定該藥的藥敏試驗(yàn)可減少其他相關(guān)藥物的檢測
數(shù)量以提高檢測效率。 3 常規(guī)藥敏試驗(yàn)的藥物選擇和報(bào)告 3.1 藥敏試驗(yàn)測試藥物的分組
A組：對特定的菌種，常規(guī)測試并報(bào)告的基本抗菌藥物。B組：常規(guī)測試，但只選擇性報(bào)告的基本抗菌藥物，例如當(dāng)對A組同類藥物耐藥時(shí)。選擇性報(bào)告指征
還包括：特定部位分離菌（如三代頭孢菌素對腦脊液中腸桿菌科菌）、混合感染、多部位感染、患者對
A組藥物過敏/不耐受/無反應(yīng)、出于感染控制目的。C組：包括替代性或補(bǔ)充性的抗菌藥物。在某些醫(yī)療機(jī)構(gòu)，地方或流行菌株對A組/B組多個(gè)藥物耐藥
時(shí)，需測試該組藥物；當(dāng)對基本測試藥物過敏、或測試少見細(xì)菌時(shí)、或流行病學(xué)和感染控制需要時(shí)，需
測試的補(bǔ)充藥物。U組：包括那些僅僅或主要用于治療泌尿道感染的抗菌藥物。各級實(shí)驗(yàn)室結(jié)合當(dāng)?shù)夭≡V特征、藥物代表性、臨床需求和本實(shí)驗(yàn)室條件等，確定本室不同菌種/
藥物測試和報(bào)告組合。綜合上述原則選擇自動(dòng)化藥敏板，當(dāng)藥敏板無法滿足需求時(shí)，予以補(bǔ)充。 3.2 結(jié)果解釋分類
實(shí)驗(yàn)室測試和報(bào)告抗菌藥物的MIC值或抑菌圈直徑（mm）的結(jié)果，按折點(diǎn)分為:敏感（S）、劑量依
賴型敏感（SDD）、中介（I）、耐藥（R）或非敏感（NS）；按ECV分為野生型（WT）或非野生型（NWT）。 3.3 報(bào)告原則 3.3.1 基本原則只有當(dāng)分離株可能有臨床意義而非定植或污染時(shí)，才可報(bào)告藥敏試驗(yàn)。藥敏試驗(yàn)檢測獲得性耐藥而
非天然耐藥，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)明確各類菌屬的天然耐藥譜，避免將天然耐藥誤報(bào)為敏感。個(gè)別菌屬對某些藥非
常敏感，或該菌引起的感染不需使用抗菌藥物時(shí)（如大腸埃希菌O157引起的腹瀉），常規(guī)不需藥敏試驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)室根據(jù)藥物分組、標(biāo)本類型等，選擇性報(bào)告藥敏結(jié)果。 3.3.2 藥敏方法和折點(diǎn)的選擇
針對不同藥物/菌種組合，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)選擇適當(dāng)?shù)乃幟舴椒ǎ⒅贫ㄏ鄳?yīng)藥敏試驗(yàn)的操作程序（包括
質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)、結(jié)果解釋等）。實(shí)驗(yàn)室宜采用國內(nèi)、外權(quán)威機(jī)構(gòu)近兩年發(fā)布的折點(diǎn)，并每年評審本室藥敏檢
測系統(tǒng)的折點(diǎn)范圍；因藥敏板條濃度范圍受限，無法采用新折點(diǎn)時(shí)，需補(bǔ)充相應(yīng)的耐藥表型檢測試驗(yàn)，
且告知臨床。判定折點(diǎn)的適用性與菌種、藥敏方法、檢測條件、紙片含量、感染部位、藥物（種類、劑量、頻次、
途徑）有關(guān)。當(dāng)上述條件符合相應(yīng)要求時(shí)，折點(diǎn)方適用。對于國際藥敏委員會(huì)未給出折點(diǎn)的藥物，建議
采用國內(nèi)、外專家共識和權(quán)威文獻(xiàn)等進(jìn)行操作和判斷，并告知臨床。 3.3.3 藥敏報(bào)告特殊注意事項(xiàng)a) 腸道分離的沙門菌屬和志賀菌屬僅需報(bào)告氨芐西林、一種氟喹諾酮類藥物和甲氧芐啶/磺胺甲
噁唑。腸道外分離的沙門菌屬，需增加測試并報(bào)告一種三代頭孢菌素，必要時(shí)測試并報(bào)告氯霉
素。傷寒樣沙門菌（傷寒沙門菌和甲、乙、丙型副傷寒沙門菌）應(yīng)進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，腸道分離的
非傷寒樣沙門菌一般不進(jìn)行藥敏試驗(yàn)。沙門菌屬和志賀菌屬對第一代、第二代頭孢菌素、頭霉
素和氨基糖苷類體外可能敏感，但臨床治療無效，所以不測試和報(bào)告這些藥物。b) 苯唑西林耐藥葡萄球菌對目前可用的β-內(nèi)酰胺類（除頭孢洛林等外）均耐藥。測試青霉素和
苯唑西林或頭孢西丁可以推測其它β-內(nèi)酰胺類的敏感性。c) 腸球菌屬對氨基糖苷類（除外高濃度的氨基糖苷類）、頭孢菌素類、克林霉素和甲氧芐啶/磺
胺甲噁唑體外可能出現(xiàn)敏感，但臨床治療無效，不應(yīng)報(bào)告為敏感。d) 腦脊液分離菌株，不宜常規(guī)測試和報(bào)告下列藥物：僅有口服劑型的藥物、第一代和第二代頭孢
菌素（除外頭孢呋辛注射劑）和頭霉菌素類、克林霉素、大環(huán)內(nèi)酯類、四環(huán)素類和氟喹諾酮類。e) 呼吸道分離株不應(yīng)測試和報(bào)告達(dá)托霉素，尿液分離株不報(bào)告氯霉素、克林霉素和紅霉素，非尿
液分離株不測試和報(bào)告呋喃妥因。f) 罕見耐藥表型、廣泛耐藥或全耐藥菌應(yīng)復(fù)核后方可發(fā)出藥敏報(bào)告。一旦確認(rèn)應(yīng)報(bào)告醫(yī)院感染控
制辦公室。實(shí)驗(yàn)室保留這些菌株，以備流行病學(xué)調(diào)查或臨床追加額外的藥敏試驗(yàn)之需。3.3.4.1 一般信息
報(bào)告單包括：患者信息（姓名、年齡、性別、病歷號等）、臨床信息（如科室、臨床診斷、抗菌藥
物使用、標(biāo)本類型等）、實(shí)驗(yàn)室信息（包括標(biāo)本采集時(shí)間、送檢時(shí)間、接收時(shí)間和審核報(bào)告時(shí)間、操作
人和審核人雙簽名）等。3.3.4.2.1 細(xì)菌和藥物名稱
細(xì)菌名稱應(yīng)規(guī)范化，參見細(xì)菌命名標(biāo)準(zhǔn)。宜標(biāo)注拉丁文名稱。藥物名稱應(yīng)使用規(guī)范的化學(xué)通用名稱，
不使用商品名。宜同時(shí)顯示藥物的中英文名稱，且同一類藥物不同品種集中排列。3.3.4.2.2 結(jié)果呈現(xiàn) a) 報(bào)告單應(yīng)明確列出各類藥物對該菌種的折點(diǎn)、本實(shí)驗(yàn)室所用標(biāo)準(zhǔn)的版本號或出版時(shí)間。b) 若沒有折點(diǎn)而借用其他菌種折點(diǎn)或采用權(quán)威文獻(xiàn)折點(diǎn)，需備注說明。c) MIC 法報(bào)告 MIC 值（單位為 mg/L 或 μg/mL）和結(jié)果解釋；紙片擴(kuò)散法報(bào)告抑菌圈直徑值（應(yīng)
為整數(shù)，單位為 mm）。結(jié)果解釋根據(jù)折點(diǎn)或 ECV 判斷為 S、I、R、SDD、NS、WT、NWT 等類型。d) 不報(bào)告替代藥物的藥敏結(jié)果。如用于判斷金黃色葡萄球菌對苯唑西林耐藥性的頭孢西丁不應(yīng)報(bào)
告。3.3.4.2.3 特殊耐藥表型
宜在報(bào)告中明確標(biāo)注特殊耐藥表型，同時(shí)對特殊耐藥表型進(jìn)行專業(yè)解釋，包括含義、機(jī)制、用藥限
制和建議等。對于罕見耐藥現(xiàn)象，進(jìn)行復(fù)核，并標(biāo)示結(jié)果狀態(tài)，如復(fù)核中、已復(fù)核等。少見和矛盾耐藥
表型進(jìn)行確認(rèn)。a) 形式性注釋：用于符號、縮寫等的詳細(xì)解釋。b) 專業(yè)性注釋：包括概念解釋（如特殊菌天然耐藥）、臨床意義和治療建議等，專業(yè)性注釋宜有
科學(xué)依據(jù)。d) 時(shí)效性提示：如“若有疑義，請于 48 h 內(nèi)與實(shí)驗(yàn)室聯(lián)系”。e) 管理性提示：如“需要上報(bào)傳染病卡”。f) 免責(zé)提示：如“該結(jié)果僅對該標(biāo)本負(fù)責(zé)”，“該結(jié)果解釋宜結(jié)合患者臨床表現(xiàn)與治療反應(yīng)，僅
供參考”等。g) 醫(yī)院地址和實(shí)驗(yàn)室聯(lián)系方法等。3.3.5 報(bào)告發(fā)放
藥敏報(bào)告應(yīng)盡快發(fā)放。緊急情況應(yīng)將部分結(jié)果先行發(fā)出，如血培養(yǎng)和腦脊液等其他無菌體液培養(yǎng)的
初步藥敏試驗(yàn)結(jié)果。無論提前還是延時(shí)，報(bào)告上應(yīng)顯示時(shí)間，并注明報(bào)告級別（初步報(bào)告或最終報(bào)告）。保存抗菌藥物敏感性試驗(yàn)資料，至少每年向臨床報(bào)告流行病學(xué)分析結(jié)果。4.1 藥敏試驗(yàn)方法的分類
藥敏試驗(yàn)方法包括：稀釋法（包括瓊脂稀釋法和肉湯稀釋法）、紙片擴(kuò)散法、梯度擴(kuò)散法和自動(dòng)化
儀器法。稀釋法是檢測抗菌藥物敏感性的定量試驗(yàn)方法，為藥敏試驗(yàn)的參考方法。4.2.1.1 材料
4.2.1.1.1 Mueller-Hinton 瓊脂（Mueller-Hinton Agar，MHA）
a) 按產(chǎn)品說明稱量 MHA 干粉。b) 103.4 Kpa、121.3 ℃高壓蒸汽滅菌 15 min。c) 立即放至 40 ℃～50 ℃水浴鍋備用。d) 培養(yǎng)基制備完畢后室溫下（25 ℃）校正 pH 值為 7.2～7.4。e) 某些營養(yǎng)要求高的苛養(yǎng)細(xì)菌如流感嗜血桿菌、淋病奈瑟菌和鏈球菌屬等，MHA 培養(yǎng)基須加入相
應(yīng)補(bǔ)充物質(zhì)或使用特殊培養(yǎng)基，詳見附錄 A。a) 抗菌藥物梯度稀釋液的整個(gè)配制過程嚴(yán)格無菌操作。見光易分解的替加環(huán)素避光保存，易降解、
不穩(wěn)定的藥物如頭孢克洛、氨芐西林、克拉維酸和亞胺培南現(xiàn)用現(xiàn)配。b) 抗菌藥物粉末可采用標(biāo)準(zhǔn)品或藥廠生產(chǎn)的商品化粉末。c) 采用分析天平稱藥，抗菌藥物的有效成分按如下公式計(jì)算：實(shí)際稱取抗菌藥物粉末重量（mg）=實(shí)際配制抗菌藥物儲(chǔ)液的體積（mL）×儲(chǔ)液濃度（mg/L）/
抗菌藥物的效價(jià)（μg/mg）
或
實(shí)際配制抗菌藥物儲(chǔ)液的體積（mL）=實(shí)際稱取抗菌藥物粉末重量（mg）×抗菌藥物的效價(jià)
（μg/mg）/儲(chǔ)液濃度（mg/L）d) 配制藥物儲(chǔ)液：藥物儲(chǔ)液的濃度不低于 1000 mg/L 或高于待測抗菌藥物最高檢測濃度的 10 倍。對大多數(shù)穩(wěn)定、且不易降解的抗菌藥物，將未用完的儲(chǔ)液分裝至無菌小管，置于-70 ℃或更低
溫度貯存，時(shí)限為 6 個(gè)月。每次使用取一管，避免反復(fù)凍融影響其活性。e) 抗菌藥物儲(chǔ)液的稀釋：采用倍比稀釋法制備一系列所需抗菌藥物檢測梯度。4.2.1.1.3 含藥的 MHA 平皿
a) 將梯度對倍稀釋的抗菌藥物（生長對照 MHA 平皿加無菌水）按 1:9 比例加入 4.2.1.1.1 制備的
已高壓滅菌完畢且溫度在 40 ℃～50 ℃的 MHA 瓊脂中。b) 將瓊脂和抗菌藥物充分混勻。 c) 傾注平皿， MHA 含藥瓊脂平皿厚度為 3 mm～4 mm。 d) 室溫放置冷卻至凝固，當(dāng)日使用或?qū)⑵矫笱b入密閉塑料袋中，置于 2 ℃～8 ℃保存，貯存時(shí)
限為 5 天。 e) 平皿使用前置室溫平衡，可置于孵箱中 30 min 使瓊脂表面干燥。 4.2.1.2 操作步驟
4.2.1.2.1 制備初始接種菌懸液
被測菌株和質(zhì)控菌株配制0.5麥?zhǔn)蠞岫葐挝坏木鷳乙?，約1×108
CFU/mL～2×108
CFU/mL，作為初始
接種物，并按一定順序放入試管架。 4.2.1.2.2 稀釋接種菌懸液
用無菌肉湯或生理鹽水將初始接種物1:10稀釋，混勻后將稀釋后的接種物按排列順序分別吸取0.1
mL至96孔微孔板。 4.2.1.2.3 接種菌懸液 a) 標(biāo)記含藥 MHA 平皿接種點(diǎn)方向。 b) 采用多點(diǎn)接種儀或標(biāo)準(zhǔn)接種環(huán)等將稀釋后的接種物按順序分別接種 1 μL～3 μL 至無抗菌藥
物的生長對照平皿、含梯度藥 MHA 平皿表面（從低濃度到高濃度）和第二塊生長對照平皿。最
終菌液接種量為 104
CFU/點(diǎn)（點(diǎn)直徑為 5 mm～8 mm）。 c) 平皿室溫放置至菌點(diǎn)干燥，但放置時(shí)間不超過 30 min。 4.2.1.2.4 孵育
置于35 ℃±2 ℃空氣環(huán)境中孵育16 h～20 h?？琉B(yǎng)菌的藥敏試驗(yàn)平皿孵育條件和時(shí)間見附錄A。 4.2.1.2.5 結(jié)果判讀
將平皿置于黑色、無反光背景上讀取結(jié)果。以抑制細(xì)菌肉眼可見生長的最低濃度為MIC。 4.2.2 肉湯稀釋法
4.2.2.1 材料
4.2.2.1.1 陽離子校正的 Mueller-Hinton 肉湯 （Cation-adjusted Mueller-Hinton broth，CAMHB） a) 按產(chǎn)品說明稱量 CAMHB 干粉。b) 103.4 Kpa、121.3 ℃高壓蒸汽滅菌 15 min，冷卻至室溫備用。 c) 培養(yǎng)基制備完畢后宜在室溫環(huán)境（25 ℃）校正 pH 值為 7.2～7.4。4.2.2.1.2 抗菌藥物梯度稀釋液 a) 抗菌藥物儲(chǔ)液配制、保存和稀釋同瓊脂稀釋法。 b) 將配制好的梯度稀釋抗菌藥物溶液每個(gè)梯度按 0.05 mL/孔分裝至 96 孔微孔板（微量肉湯稀釋
法）或按 1 mL/管分裝至 13 mm×100 mm 帶螺帽的試管中（宏量肉湯稀釋法），當(dāng)日使用或凍
存于≤ -20 ℃?zhèn)溆谩?/p> 4.2.2.2 操作步驟 4.2.2.2.1 制備初始接種菌懸液
被測菌株和相應(yīng)質(zhì)控菌株如大腸埃希菌ATCC 25922配制0.5麥?zhǔn)蠞岫葐挝坏木鷳乙?，作為初始接種
物菌懸液。 4.2.2.2.2 稀釋接種菌懸液
用4.2.2.1.1制備的CAMHB肉湯將初始接種物1:100倍稀釋（微量肉湯稀釋法）或1:150倍（宏量肉湯
稀釋法）稀釋，混勻，菌液濃度約為1×106
CFU/mL。 4.2.2.2.3 接種菌懸液
a) 將稀釋后的接種物按順序依次吸取 0.05 mL 至 4.2.2.1.2 步驟制備的含等量藥 96 孔微孔板或
吸取 1 mL 至 4.2.2.1.2 步驟制備的含等量藥試管中（最終接種物濃度為 5×105
CFU/mL）。 b) 稀釋菌液在 15 min 內(nèi)接種完畢。 c) 同時(shí)將稀釋后的接種物接種至不含抗菌藥物的非選擇性瓊脂平皿，以檢測接種菌懸液的純度。d) 微量肉湯稀釋法：將稀釋后的菌懸液接種至不含抗菌藥物微孔作為生長對照，同時(shí)設(shè)置不加接
種菌懸液的含藥孔。 e) 宏量肉湯稀釋法：設(shè)置每一株菌的初始接種物的不含藥的生長對照管。4.2.2.2.4 孵育
a) 接種好的菌液和抗菌藥物混合液置于 35 ℃±2 ℃孵箱中孵育 16 h～20 h。b) 苛養(yǎng)菌的孵育條件和時(shí)間見附錄 A。 4.2.2.2.5 接種菌懸液的菌落計(jì)數(shù)
每一批試驗(yàn)應(yīng)同時(shí)進(jìn)行接種菌懸液的菌落計(jì)數(shù)，以保證微量肉湯稀釋法和宏量肉湯稀釋法的最終接
種菌懸液濃度為5×105
CFU/mL，具體步驟： a) 4.2.2.2.3 步驟接種完畢后，立即從質(zhì)控菌株大腸埃希菌 ATCC 25922 的生長對照孔或生長對
照管吸取 0.01 mL。 b) 置于 10 mL 無菌生理鹽水中（1:1000 倍稀釋）。 c) 混勻后，吸取 0.1 mL 均勻涂布在不含抗菌藥物的瓊脂平皿上（根據(jù)不同細(xì)菌生長特性選取非
選擇性營養(yǎng)瓊脂平皿）。 d) 置于 35 ℃±2 ℃孵箱中孵育 16 h～20 h 后觀測：若平皿生長菌落數(shù)為 50 CFU 左右，即為最
終接種細(xì)菌量為 5×105
CFU/mL。 4.2.2.2.6 結(jié)果判讀 a) 以抑制細(xì)菌肉眼可見生長的最低濃度為 MIC。 b) 根據(jù)生長對照孔/管菌液生長量判定生長終點(diǎn)。革蘭陽性球菌檢測氯霉素、克林霉素、紅霉素、
利奈唑胺和四環(huán)素時(shí)，易出現(xiàn)拖尾現(xiàn)象，讀取拖尾現(xiàn)象開始的第一個(gè)孔的 MIC 值，忽略微小菌
膜。若存在多孔跳孔現(xiàn)象，需重新檢測。 4.3 紙片擴(kuò)散法 4.3.1 材料
4.3.1.1 MHA 瓊脂 a) 按下列步驟制備 MHA 培養(yǎng)基： 1) 按產(chǎn)品說明書稱量 MHA 干粉，103.4Kpa、121.3 ℃高壓蒸汽滅菌 15 min 后放至 40 ℃～
50 ℃水浴。 2) 將無菌空平皿（內(nèi)徑 9 cm 或 14 cm）置于超凈臺水平臺面上，晃動(dòng)搖勻 MHA 后傾倒平皿，
每塊平皿瓊脂厚度為 3 mm～4 mm。 3) 平皿室溫冷卻后，2 ℃～8 ℃冰箱保存。 b) pH 值：紙片擴(kuò)散法使用的培養(yǎng)基 pH 值在室溫下為 7.2～7.4。c) 水分：進(jìn)行藥敏試驗(yàn)時(shí)，MHA 瓊脂表面應(yīng)濕潤，但不能有水滴，平皿蓋上不應(yīng)有水珠。 4.3.1.2 抗菌藥物紙片
藥敏紙片為直徑6.35 mm、吸水量為0.02 mL的專用藥敏紙片。藥敏紙片使用前需室溫平衡1 h～2 h。紙片需密封貯存于-20 ℃冰箱內(nèi)。開封后的紙片可置于含干燥劑的螺口塑料或玻璃管中2 ℃～8 ℃保存，
不超過1周。 4.3.1.3 標(biāo)準(zhǔn)比濁管 a) 用硫酸鋇比濁管（0.5 號麥?zhǔn)蠁挝粯?biāo)準(zhǔn)比濁管）標(biāo)定接種菌液濃度。 b) 比濁管制備方法：取 0.048 mol/L 氯化鋇（BaCl2）[1.175%（W/V）BaCl2.2H2O] 0.5 mL，加到
99.5 mL 的 0.18 mol/L 硫酸（1%,V/V）溶液中，制成比濁管，用光徑為 1 cm 的紫外分光光度
計(jì)測定吸光度值來標(biāo)定比濁管。0.5 號比濁管在 625 nm 波長的吸光度為 0.08～0.13。選取管
徑與制備菌液試管相同的螺口試管，每管分裝 4 mL～6 mL，密封，置于室溫避光環(huán)境。使用
前漩渦震蕩混勻。 4.3.2 操作步驟
4.3.2.1 制備接種菌懸液 a) 被測菌株和標(biāo)準(zhǔn)菌株接種于非選擇性培養(yǎng)基如血平皿，置于 35 ℃空氣培養(yǎng) 18 h～24 h（孵育
條件參照附錄 A 進(jìn)行）。 1) 直接菌落法：選取孵育 18 h～24 h 后的菌落形態(tài)一致的且生長較好的 3～5 個(gè)菌落；采用
接種環(huán)或無菌拭子觸碰每個(gè)菌落頂部，轉(zhuǎn)移至含有 4 mL～5 mL 的胰大豆肉湯或無菌生理
鹽水中。2) 肉湯增菌法: 將單個(gè)菌落接種至肉湯培養(yǎng)基，置于 35 ℃±2 ℃孵育，至濁度接近規(guī)定的
濃度（通常孵育 2 h～6 h）。c) 采用生理鹽水或肉湯校正菌液濃度至 0.5 麥?zhǔn)媳葷峁埽s 1×108
CFU/mL～2×108
CFU/mL），也
可用電子比濁儀。a) 用無菌棉拭子蘸取菌液，在管內(nèi)壁將多余菌液旋轉(zhuǎn)擠去。b) 在 MHA 平皿表面均勻涂布 3 次，每次旋轉(zhuǎn)平皿 60°，最后沿平皿內(nèi)瓊脂邊緣涂抹一周。c) 校正濃度后的菌液在 15 min 內(nèi)接種完畢。a) 接種菌懸液后的 MHA 平皿置室溫下干燥 3 min～5 min。b) 用紙片分配器或無菌鑷子將抗菌藥物紙片緊密貼于平皿。各紙片中心相距≥24 mm。紙片貼上
后不應(yīng)再移動(dòng)。4.3.2.4 孵育
貼上紙片15 min內(nèi)，須把平皿倒置放于35 ℃孵箱中孵育16 h～18 h。對于某些特殊抗菌藥物如苯
唑西林或萬古霉素，孵育時(shí)間需延長至24 h?？琉B(yǎng)菌等孵育環(huán)境和時(shí)間見附錄A。a) 將平皿置于黑色背景下，利用反射光從平皿背面用游標(biāo)卡尺或直尺測量無明顯細(xì)菌生長區(qū)域的
直徑（含紙片），即抑菌圈直徑，取整數(shù)位，單位為 mm。b) 培養(yǎng)基若加入血液，須打開平皿蓋，借助反射光，從正面測量抑菌圈直徑。c) 測量萬古霉素、利奈唑胺和苯唑西林等的抑菌圈時(shí)，使用透射光。d) 測量甲氧芐啶和磺胺類藥物的抑菌圈時(shí)，可忽視輕微生長（20%或較少菌苔生長）而測量較明
顯抑制的邊緣。4.4 梯度擴(kuò)散法
梯度擴(kuò)散法是一種結(jié)合稀釋法和紙片擴(kuò)散法原理對抗菌藥物敏感性直接定量的藥敏試驗(yàn)方法。4.4.1.1 梯度擴(kuò)散法條
商品化梯度擴(kuò)散法條是一條5 mm × 50 mm的無孔試劑載體，一面固定有一系列預(yù)先制備的、濃度
呈連續(xù)指數(shù)增長的抗菌藥物，另一面有讀數(shù)和判別刻度。梯度擴(kuò)散法條抗菌藥物濃度梯度可覆蓋有20
個(gè)MIC對倍稀釋濃度的寬度范圍。4.4.1.2 培養(yǎng)基
同紙片擴(kuò)散法。a) 待測細(xì)菌的菌懸液配制和接種方法同紙片擴(kuò)散法。b) 待平皿干燥后，用鑷子將梯度擴(kuò)散法條有 MIC 刻度面朝上，貼在已接種被測菌株的平皿表面，
梯度擴(kuò)散法條全長與瓊脂表面緊密接觸，試條貼好后不應(yīng)移動(dòng)。c) 置于 35 ℃±2 ℃孵箱中孵育 16 h～18 h。4.4.3 結(jié)果判讀
讀取橢圓形抑菌圈與梯度擴(kuò)散法條交界點(diǎn)的讀值，即為待測抗菌藥物的MIC值。4.5 自動(dòng)化儀器法
0.5麥?zhǔn)蠞岫葐挝痪鷳乙旱呐渲品椒ㄍ埰瑪U(kuò)散法，按照各儀器說明書對菌懸液進(jìn)行稀釋。不同種
屬細(xì)菌稀釋后的菌懸液，加入對應(yīng)的商品化試驗(yàn)板條，上機(jī)進(jìn)行檢測。5.1 各種屬細(xì)菌藥敏試驗(yàn)方法和試驗(yàn)條件
臨床常見快速生長非苛養(yǎng)菌、常見苛養(yǎng)菌、不常見菌、潛在生物恐怖病原菌、諾卡菌屬和其他需氧
放線菌、厭氧菌的藥敏試驗(yàn)方法和試驗(yàn)條件見附錄A。常見菌各種屬細(xì)菌藥敏折點(diǎn)參照參考文獻(xiàn)[1]。5.2.1 β-內(nèi)酰胺酶表型檢測
臨床報(bào)告葡萄球菌屬、流感嗜血桿菌、卡他莫拉菌、淋病奈瑟菌和一些厭氧菌對青霉素的敏感性前，
應(yīng)進(jìn)行β-內(nèi)酰胺酶的補(bǔ)充藥敏試驗(yàn)（方法見表1）。青霉素可用于預(yù)測上述種屬對青霉素酶不穩(wěn)定的青
霉素類的敏感性，包括青霉素、阿莫西林、氨芐西林、羧芐西林、替卡西林、阿洛西林和哌拉西林等。
5.2.2 葡萄球菌屬對苯唑西林耐藥性檢測
檢測葡萄球菌屬對苯唑西林敏感性的方法見表 2。苯唑西林或頭孢西丁的藥敏結(jié)果適用于其他對青
霉素酶穩(wěn)定的青霉素類如氯唑西林、雙氯西林、氟氯西林、甲氧西林和萘夫西林。苯唑西林或頭孢西丁藥敏試驗(yàn)結(jié)果為敏感，即對 β-內(nèi)酰胺酶抑制劑復(fù)合物、頭孢菌素類和碳青霉烯類敏感。一旦檢測為苯
唑西林耐藥，即對所有 β-內(nèi)酰胺類（頭孢洛林除外）藥物耐藥。
5.2.3 萬古霉素中介的金黃色葡萄球菌（Vancomycin intermediate S. aureus，VISA）、萬古霉素耐
藥的金黃色葡萄球菌（Vancomycin resistant S. aureus，VRSA）和萬古霉素耐藥腸球菌（Vancomycin
resistant Enterococcus, VRE）表型檢測，見表 3 
5.2.4 誘導(dǎo)克林霉素耐藥性檢測
當(dāng)葡萄球菌屬、肺炎鏈球菌和β-溶血鏈球菌對大環(huán)內(nèi)酯類如紅霉素耐藥，而對克林霉素中介或敏
感時(shí)，宜進(jìn)行誘導(dǎo)克林霉素耐藥性檢測，包括紙片擴(kuò)散法（D試驗(yàn)，表4）、微量肉湯稀釋法和自動(dòng)化儀
器法。微量肉湯稀釋法是將4 mg/L的紅霉素和0.5 mg/L的克林霉素置于同一孔里，35 ℃±2 ℃空氣環(huán)
境孵育18 h～24 h檢測后，檢測菌株是否生長。生長即為陽性，不生長為陰性。 
5.2.5 腸球菌屬氨基糖苷類高水平耐藥（High-level aminoglycoside resistance, HLAR）表型檢測
腸球菌屬氨基糖苷類高水平耐藥表型檢測見表 5。 
5.2.6 產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶（Extended-spectrum β-lactamases, ESBLs）表型檢測
ESBLs檢測適用菌種為大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌、產(chǎn)酸克雷伯菌和奇異變形桿菌。ESBLs確證試驗(yàn)
包括紙片擴(kuò)散法、MIC法（稀釋法或梯度擴(kuò)散法）。紙片擴(kuò)散法：使用每片含30 μg頭孢他啶、頭孢噻肟紙片和頭孢他啶/克拉維酸（30 μg/10 μg）、
頭孢噻肟/克拉維酸（30 μg/10 μg）復(fù)合物紙片進(jìn)行檢測，當(dāng)任何一種復(fù)合物紙片抑菌圈直徑比其單
獨(dú)藥敏紙片抑菌圈直徑大于或等于5 mm，可確證該菌株產(chǎn)ESBLs。稀釋法：使用頭孢他啶（0.25 mg/L～128 mg/L）、頭孢他啶/克拉維酸（0.25/4 mg/L～128/4 mg/L）、
頭孢噻肟（0.25 mg/L～64 mg/L）、頭孢噻肟/克拉維酸（0.25/4 mg/L～64/4 mg/L）進(jìn)行檢測，當(dāng)與
克拉維酸聯(lián)合藥物組的MIC小于或等于單獨(dú)藥物組MIC 3個(gè)倍比稀釋度時(shí)（或比值≥8），可確證該菌株
產(chǎn)ESBLs。5.2.7.1 適用條件
當(dāng)腸桿菌科細(xì)菌和銅綠假單胞菌對厄他培南（銅綠假單胞菌不適用）、亞胺培南或美羅培南中任何
一種藥物中介或耐藥時(shí)，需進(jìn)行復(fù)核，并檢測該菌株是否產(chǎn)碳青霉烯酶，以便采取感染控制措施。碳青
霉烯酶表型檢測方法為改良碳青霉烯類滅活試驗(yàn)（Modified carbapenem inactivation method，mCIM）
等。銅綠假單胞菌碳僅采用 mCIM 試驗(yàn)，腸桿菌科細(xì)菌宜同時(shí)執(zhí)行 mCIM 試驗(yàn)和 EDTA-mCIM（eCIM）試驗(yàn)。b) 用 1 μL 接種環(huán)重懸腸桿菌科細(xì)菌（銅綠假單胞菌采用 10 μL 接種環(huán)）于 2 mL 胰大豆肉湯（TSB）
管中。當(dāng)檢測腸桿菌科細(xì)菌產(chǎn)酶株時(shí)，再另取一新的接種環(huán)重懸待測菌株于另一 2 mL TSB 管
中，并吸取 20 μL 0.5 M EDTA（終濃度為 5 mM）置于該管中。c) 渦旋震蕩 10 s～15 s。d) 分別取 10 μg 美羅培南紙片各一片置于 b)步驟含和不含 EDTA 的 TSB 菌液管中，確保整個(gè)紙片
浸沒在菌懸液中。e) 35 ℃±2 ℃空氣孵育 4 h±15 min。f) 待孵育時(shí)間接近 4 h 時(shí)，采用生理鹽水制備大腸埃希菌 ATCC 25922 的 0.5 麥?zhǔn)蠁挝痪鷳乙海?15 min 內(nèi)按照常規(guī)紙片擴(kuò)散法步驟將其涂布于 MHA 平皿上，干燥 3 min～10 min。g) 采用 10 μL 接種環(huán)從 TSB-美羅培南紙片懸液中取出美羅培南紙片，排出過多液體，將其貼在
已接種好大腸埃希菌 ATCC 25922 的 MHA 平皿上，反轉(zhuǎn)平皿，35 ℃±2 ℃空氣孵育 18 h～24 h
后，測量美羅培南抑菌圈直徑。①陽性：當(dāng)抑菌圈直徑 6 mm～15 mm 或在 16 mm～18 mm 抑菌圈內(nèi)存在大腸埃
希菌 ATCC 25922 菌落時(shí)，報(bào)告產(chǎn)碳青霉烯酶；②陰性：當(dāng)抑菌圈邊緣清晰可見，且其直徑≥19
mm 時(shí)，報(bào)告不產(chǎn)碳青霉烯酶；③不確定：當(dāng)抑菌圈直徑為 16 mm～18 mm 或抑菌圈直徑在≥19 mm
抑菌圈內(nèi)存在大腸埃希菌 ATCC 25922 菌落時(shí)，不能確定待測菌株是否產(chǎn)碳青霉烯酶，宜用分
子方法確認(rèn)。i) eCIM 結(jié)果判讀：僅在 mCIM 陽性才解讀 eCIM 結(jié)果。若抑菌圈內(nèi)存在菌落，測量 eCIM 抑菌圈時(shí)
可忽略不計(jì)，直接量取抑菌圈邊緣。①陽性：eCIM 抑菌圈直徑-mCIM 抑菌圈直徑≥5 mm，報(bào)告
產(chǎn)金屬酶；②陰性：eCIM 抑菌圈直徑-mCIM 抑菌圈直徑≤4 mm，報(bào)告不產(chǎn)金屬酶，產(chǎn)絲氨酸類
碳青霉烯酶。注：若菌株共產(chǎn)絲氨酸類碳青霉烯酶和金屬酶，eCIM 試驗(yàn)為假陰性，此時(shí)不能區(qū)分二者。5.3 不常見苛養(yǎng)菌和非苛養(yǎng)菌藥敏試驗(yàn)5.3.1 乏養(yǎng)球菌屬和顆粒鏈球菌屬乏養(yǎng)球菌屬和顆粒鏈球菌屬屬于苛養(yǎng)菌，是感染性心內(nèi)膜炎的重要致病菌。檢測藥物為青霉素、頭
孢噻肟或頭孢曲松和萬古霉素。來自呼吸道或傷口的分離株不必進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，來自無菌部位如血液、
深部組織或植入的假體裝置，特別是免疫缺陷患者，宜進(jìn)行藥敏試驗(yàn)。藥敏試驗(yàn)折點(diǎn)見附錄B表B.1。5.3.2 氣球菌屬、孿生球菌屬、乳球菌屬和微球菌屬
氣球菌屬常規(guī)檢測藥物為青霉素、頭孢曲松和萬古霉素。孿生球菌屬檢測藥物為青霉素、頭孢噻肟
或頭孢曲松和萬古霉素。乳球菌屬的檢測藥物則為青霉素或氨芐西林、頭孢曲松、萬古霉素、克林霉素
和紅霉素。格氏乳球菌對克林霉素天然耐藥。微球菌屬常為污染菌，多次血培養(yǎng)陽性或植入假體裝置分離的菌株可進(jìn)行藥敏試驗(yàn)。其檢測藥物為
青霉素和萬古霉素。這些菌屬藥敏試驗(yàn)折點(diǎn)見附錄B表B.2。5.3.3.1 明串珠菌屬和片球菌屬明串珠菌屬和片球菌屬為苛養(yǎng)菌，對萬古霉素天然耐藥。分離自無菌部位如血培養(yǎng)或深部組織的菌
株，尤其是免疫缺陷患者無菌部位分離的菌株可進(jìn)行藥敏試驗(yàn)。檢測藥物為青霉素或氨芐西林。5.3.3.2 豬紅斑丹毒絲菌
豬紅斑丹毒絲菌為苛養(yǎng)菌，對萬古霉素和氨基糖苷類天然耐藥。豬紅斑丹毒絲菌常規(guī)不必進(jìn)行藥敏
試驗(yàn)；但因其引起心內(nèi)膜炎時(shí)，宜立即進(jìn)行藥敏試驗(yàn)。檢測藥物為青霉素或氨芐西林。對青霉素過敏患
者，需檢測紅霉素和克林霉素的敏感性。5.3.3.3 乳桿菌屬
乳桿菌屬通常屬于苛養(yǎng)菌。分離自無菌部位如血培養(yǎng)或深部組織等的菌株，尤其是免疫缺陷患者無
菌部位分離的菌株需進(jìn)行藥敏試驗(yàn)。檢測抗菌藥物為青霉素或氨芐西林。干酪乳桿菌、發(fā)酵乳桿菌、植
物乳桿菌、羅伊氏乳桿菌、鼠李糖乳桿菌、唾液乳桿菌、陰道乳桿菌和玉米乳桿菌對萬古霉素天然耐藥；而嗜酸乳桿菌、卷曲乳桿菌、加氏乳桿菌、惰性乳桿菌、詹氏乳桿菌、約氏乳桿菌和乳酸乳桿菌對萬古
霉素敏感。5.3.4 棒桿菌屬、類棒狀桿菌屬和黏滑羅氏菌
棒桿菌屬、類棒狀桿菌屬（包括隱秘桿菌屬、節(jié)桿菌屬、短桿菌屬、纖維單胞菌屬、纖維微菌屬、
皮桿菌屬、利夫森菌屬、微桿菌屬和厄氏菌屬等）和黏滑羅氏菌通常為污染菌或定植菌。分離自無菌部
位如深部組織、腦脊液或血培養(yǎng)（多瓶培養(yǎng)陽性）的菌株，尤其是有植入假體裝置或免疫缺陷患者無菌
部位分離的菌株需進(jìn)行藥敏試驗(yàn)。其檢測藥物和藥敏試驗(yàn)折點(diǎn)詳見附錄B表B.3。5.3.5 需氧芽胞桿菌屬
需氧芽胞桿菌屬通常為污染菌，明確為污染菌時(shí)，不應(yīng)進(jìn)行藥敏試驗(yàn)。分離自無菌部位如深部組織、
腦脊液或血培養(yǎng)（多瓶培養(yǎng)陽性）的菌株，尤其是有植入假體裝置、免疫缺陷或靜脈吸毒史患者無菌部
位分離的菌株可進(jìn)行藥敏試驗(yàn)。需氧芽胞桿菌屬（不包括炭疽芽胞桿菌）檢測藥物為萬古霉素、氟喹諾
酮類和克林霉素。該菌屬通常對萬古霉素、大環(huán)內(nèi)酯類、氨基糖苷類和喹諾酮類藥物敏感。蠟樣芽胞桿
菌和蘇云金芽胞桿菌產(chǎn)廣譜β-內(nèi)酰胺酶，通常對青霉素類和頭孢菌素類耐藥。5.3.6 產(chǎn)單核細(xì)胞李斯特菌
產(chǎn)單核細(xì)胞李斯特菌對頭孢菌素類天然耐藥。因該菌通常對氨芐西林或青霉素敏感，因此常規(guī)不必
藥敏試驗(yàn)。其藥敏試驗(yàn)僅限于治療失敗或者對青霉素過敏的患者。檢測藥物為青霉素或氨芐西林、甲氧
芐啶/磺胺甲噁唑和美羅培南。這四個(gè)藥物的敏感性折點(diǎn)分別為≤2 mg/L, ≤2 mg/L, ≤0.5/9.5 mg/L、
≤0.25 mg/L，目前尚無中介和耐藥的折點(diǎn)。5.3.7 卡他莫拉菌
大部分卡他莫拉菌菌株因產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶對不耐酶的青霉素（如青霉素、氨芐西林和阿莫西林）類
耐藥。檢測藥物包括阿莫西林/克拉維酸、頭孢呋辛和甲氧芐啶/磺胺甲噁唑。流行病學(xué)調(diào)查或重癥感染
患者分離的菌株宜進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，藥敏試驗(yàn)折點(diǎn)詳見附錄B表B.4。5.3.8 HACEK 細(xì)菌群和巴斯德菌屬
HACEK細(xì)菌群包括凝聚桿菌屬、心桿菌屬、嚙蝕艾肯菌和金桿菌屬。HACEK群為苛養(yǎng)菌，檢測抗菌藥
物為青霉素、氨芐西林、阿莫西林/克拉維酸、頭孢噻肟或頭孢曲松、亞胺培南、環(huán)丙沙星或左氧氟沙星和甲氧芐啶/磺胺甲噁唑。分離自咬傷部位的艾肯菌屬對阿莫西林/克拉維酸高度敏感，不必進(jìn)行藥敏
試驗(yàn)。巴斯德菌屬通常對苯唑西林、頭孢氨芐和克林霉素耐藥，而對氨芐西林、阿莫西林和青霉素的MIC
值很少超過0.5 mg/L。檢測藥物為青霉素類、阿莫西林/克拉維酸、頭孢曲松、氟喹諾酮類、大環(huán)內(nèi)酯
類、四環(huán)素和甲氧芐啶/磺胺甲噁唑。藥敏試驗(yàn)折點(diǎn)詳見附錄B表B.5。
5.3.9 氣單胞菌屬和弧菌屬（不包括霍亂弧菌）
氣單胞菌屬對氨芐西林、阿莫西林/克拉維酸和頭孢唑啉均耐藥。氣單胞菌屬檢測藥物為第三代、
四代頭孢菌素、氟喹諾酮類和甲氧芐啶/磺胺甲噁唑。采用β-內(nèi)酰胺類藥物治療氣單胞菌屬時(shí)，該菌可
產(chǎn)生誘導(dǎo)性β-內(nèi)酰胺酶而對超廣譜頭孢菌素類產(chǎn)生耐藥?；【鷮賹儆谑塞}菌，嗜鹽弧菌屬常對磺胺類、青霉素類、頭孢噻吩和頭孢呋辛耐藥?；魜y弧菌檢測
藥物包括氨芐西林、阿奇霉素、氯霉素、磺胺類、四環(huán)素或多西環(huán)素和甲氧芐啶/磺胺甲噁唑。其他弧
菌屬檢測抗菌藥物包括頭孢噻肟、頭孢他啶、氟喹諾酮類和四環(huán)素或多西環(huán)素。氣單胞菌屬和弧菌屬的藥敏試驗(yàn)常限于腸道外分離的菌株。藥敏試驗(yàn)折點(diǎn)詳見附錄B表B.6。
5.3.10 諾卡菌屬和其他需氧放線菌
諾卡菌屬和其他需氧放線菌（馬紅球菌及其他紅球菌屬細(xì)菌、戈登菌屬和鏈霉菌屬等）屬于專性需
氧菌，繁殖速度緩慢。諾卡菌屬檢測的藥物及其折點(diǎn)見附錄B表B.7。萬古霉素和利福平是治療馬紅球菌
引起臨床感染的重要藥物，因此馬紅球菌藥敏需包括這兩個(gè)藥物。其他需氧放線菌如馬紅球菌、馬杜拉
放線菌屬和戈登菌屬僅報(bào)告MIC值，尚無藥敏折點(diǎn)。
6 質(zhì)量控制（Quality control, QC）
實(shí)驗(yàn)室宜遵照行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)建立本實(shí)驗(yàn)室藥敏試驗(yàn)的質(zhì)量管理體系，包括質(zhì)控菌株、質(zhì)控頻率和質(zhì)控范
圍等，同時(shí)定期參加實(shí)驗(yàn)室室間比對項(xiàng)目。6.1 質(zhì)控菌株質(zhì)控菌株可從ATCC或參考實(shí)驗(yàn)室以及商業(yè)機(jī)構(gòu)獲得。保存其來源和傳代等記錄，并有證據(jù)表明質(zhì)控
菌株性能滿足要求。6.2.1 日質(zhì)控
可按 20 天或 30 天重復(fù)方案和 15-重復(fù)方案中任意一種執(zhí)行日質(zhì)控。6.2.1.1 20 天或 30 天重復(fù)方案（見表 6）
a) 連續(xù)檢測 20 天或 30 天，記錄藥物的 MIC 值或抑菌圈直徑。 b) 根據(jù)檢測結(jié)果是否在控，決定是否轉(zhuǎn)周質(zhì)控；若實(shí)驗(yàn)室常規(guī)每天檢測質(zhì)控菌株，期望將日質(zhì)控轉(zhuǎn)
為周質(zhì)控，可回顧性分析過去兩年連續(xù)檢測的質(zhì)控結(jié)果，前提是檢測系統(tǒng)一致。 6.2.1.2 15-重復(fù)方案（見表 7） a) 每天重復(fù)測定 3 次，每次單獨(dú)制備接種物，連續(xù)測定 5 天，記錄藥物的 MIC 值或抑菌圈直徑。 b) 根據(jù)檢測結(jié)果是否在控，決定是否轉(zhuǎn)周質(zhì)控。
6.2.2 周質(zhì)控：即每周檢測 1 次。當(dāng)使用同一廠商新批號的培養(yǎng)基時(shí)，應(yīng)執(zhí)行周質(zhì)控。若周質(zhì)控失控，應(yīng)采取適當(dāng)糾正措施。對于某
些不穩(wěn)定易降解的抗菌藥物，質(zhì)控頻率可增加，不局限于一周一次。
6.3 質(zhì)控結(jié)果失控原因分析和糾正措施失控原因可分為隨機(jī)誤差、可確認(rèn)的誤差和系統(tǒng)誤差。隨機(jī)誤差和可確認(rèn)的誤差可通過簡單重復(fù)進(jìn)
行質(zhì)控予以糾正；而系統(tǒng)誤差不可通過簡單重復(fù)進(jìn)行質(zhì)控予以糾正。
6.3.1 失控原因是可確認(rèn)的誤差（即誤差原因易發(fā)現(xiàn)和誤差易于糾正）
若在失控當(dāng)天通過重復(fù)檢測相同質(zhì)控菌株/抗菌藥物組合，其結(jié)果在控，可不必進(jìn)一步糾錯(cuò)?？纱_
認(rèn)的誤差產(chǎn)生的失控原因包括但不局限于以下幾方面： a) 質(zhì)控菌株： ①使用誤差的質(zhì)控菌株； ②不當(dāng)?shù)膬?chǔ)存方式； ③維護(hù)不足（如相同的傳代產(chǎn)物超過
1 個(gè)月）； ④污染，菌株失活；⑤菌株性能改變（如突變或質(zhì)粒丟失等）。 b) 檢測試劑： ①不當(dāng)?shù)膬?chǔ)存和運(yùn)輸環(huán)境； ②污染； ③試管或微孔內(nèi)肉湯量不足； ④板條、瓊脂平
皿或藥敏卡等損壞（如破裂或泄露等）； ⑤試劑失效。 c) 檢測過程： ①接種物菌懸液配制方法不當(dāng)或濁度調(diào)節(jié)方法不當(dāng)； ②配制接種物使用的細(xì)菌孵育
時(shí)長不當(dāng)； ③配制接種物使用的細(xì)菌來源于選擇性培養(yǎng)基、含抗菌藥物或細(xì)菌生長抑制復(fù)合物
的平皿； ④孵育溫度或孵育條件不當(dāng)； ⑤使用誤差的試劑及配套設(shè)備； ⑥藥敏結(jié)果讀取方法或
結(jié)果解釋不當(dāng)； ⑦書寫誤差。 d) 儀器：儀器故障或定標(biāo)不通過（如微量分液器）。 6.3.2 日質(zhì)控檢測，失控為不可確認(rèn)的誤差
執(zhí)行糾正措施：失控當(dāng)天采用相同的質(zhì)控菌株/抗菌藥物組合重復(fù)進(jìn)行檢測，若在控，繼續(xù)執(zhí)行日
質(zhì)控；若不在控，執(zhí)行糾正措施，見6.3.4所述。 6.3.3 周質(zhì)控檢測，失控為不可確認(rèn)的誤差執(zhí)行糾正措施：失控當(dāng)天重復(fù)檢測相同的質(zhì)控菌株/抗菌藥物組合，若重復(fù)檢測的結(jié)果在控，且已
找到失控的原因，連續(xù)五天重復(fù)使用同一批號的試劑檢測所有抗菌藥物/質(zhì)控菌株組合的質(zhì)控結(jié)果，若： ①5次檢測結(jié)果均可控，可繼續(xù)執(zhí)行周質(zhì)控； ②3次檢測結(jié)果在控，繼續(xù)執(zhí)行連續(xù)2天重復(fù)檢測直至5次結(jié)
果在控。 6.3.4 糾正措施，包括： a) 若重復(fù)檢測仍不在控，執(zhí)行糾正措施。 b) 繼續(xù)執(zhí)行日質(zhì)控直至找到失控原因。 c) 選用新的質(zhì)控菌株或新的試劑批號或新的品牌。 d) 在尋找失控原因過程中，可采用替代性檢測試驗(yàn)。 7 商品化藥敏試驗(yàn)檢測系統(tǒng)的性能驗(yàn)證 7.1 受試菌株的選擇選擇適用于待驗(yàn)證系統(tǒng)中藥物檢測的臨床菌株，且兼顧藥敏板的類型（如驗(yàn)證葡萄球菌專用藥敏板
時(shí)選擇葡萄球菌）、每種藥物的抗菌譜（如驗(yàn)證糖肽類時(shí)只選革蘭陽性菌）、檢測的范圍（如尿液分離
株）。敏感和耐藥菌株的數(shù)量宜均衡。如可能，宜使用已知耐藥表型的菌株，或所在地區(qū)具有特殊臨床
意義的耐藥菌株（如碳青霉烯耐藥腸桿菌科）。產(chǎn)品說明書中未列出的菌種不列入驗(yàn)證范圍，可不驗(yàn)證
罕見耐藥菌（如萬古霉素耐藥的金黃色葡萄球菌），但實(shí)驗(yàn)室應(yīng)審閱制造商的數(shù)據(jù)或相關(guān)文獻(xiàn)。推薦使用非凍存的、新鮮的臨床分離株。為增加菌種的多樣性和耐藥表型的數(shù)量，也可使用凍存菌
株、室間質(zhì)評或其他來源的菌株。檢測前，凍存菌株傳代2次，且傳代后 24 h 內(nèi)使用。 7.2 受試菌株的數(shù)量每種藥敏板至少需要測試30株菌，這樣每個(gè)藥會(huì)產(chǎn)生30個(gè)藥敏結(jié)果。對于未達(dá)到30個(gè)結(jié)果的藥物，
需檢測其他菌株或使用質(zhì)控株的結(jié)果以保證每種藥物至少有30個(gè)藥敏結(jié)果，但質(zhì)控株的結(jié)果不能超過
50%。盡可能選擇大量的臨床菌株，包括特殊或少見耐藥表型菌株。 7.3 對照方法的選擇引入新的藥敏檢測系統(tǒng)時(shí)，需與現(xiàn)有的且驗(yàn)證過的藥敏系統(tǒng)進(jìn)行比較。如果實(shí)驗(yàn)室目前無藥敏系統(tǒng)，
可在新的藥敏系統(tǒng)上使用已知藥敏結(jié)果的貯存菌株進(jìn)行驗(yàn)證；或與通過權(quán)威機(jī)構(gòu)認(rèn)可的實(shí)驗(yàn)室聯(lián)系，將
檢測結(jié)果與該實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)證過的藥敏系統(tǒng)進(jìn)行比對；實(shí)驗(yàn)室也可通過與參考方法（如微量肉湯稀釋法）的
比較，驗(yàn)證新的藥敏系統(tǒng)（表8）。
7.4 性能驗(yàn)證期間的質(zhì)量控制 7.4.1 新藥敏檢測系統(tǒng)
藥敏系統(tǒng)驗(yàn)證期間的每一天，應(yīng)在新系統(tǒng)內(nèi)進(jìn)行質(zhì)量控制。使用合適的針對藥敏板的質(zhì)控菌株。實(shí)驗(yàn)室如希望將質(zhì)控頻率從日變到周，需實(shí)施質(zhì)量控制計(jì)劃，評審質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)是否支持這種轉(zhuǎn)變。 7.4.2 改良的藥敏檢測系統(tǒng)
當(dāng)實(shí)驗(yàn)室改良已有的藥敏檢測系統(tǒng)或采用個(gè)性化藥敏檢測系統(tǒng)時(shí)，需對變更項(xiàng)目實(shí)施個(gè)性化質(zhì)量控
制，質(zhì)量控制方案詳見表9。
7.5 精密度指采用相同分析方法對同一菌株連續(xù)檢測結(jié)果的一致性。藥敏檢測系統(tǒng)精密度評估應(yīng)考慮正常變
異，如抗細(xì)菌藥物結(jié)果差異為±1個(gè)倍比稀釋度，抗真菌藥物結(jié)果差異為±2個(gè)倍比稀釋度時(shí)，認(rèn)為結(jié)果
相同。 評估時(shí)，至少使用5個(gè)代表性的質(zhì)控和臨床菌株，每株檢測三次。檢測可以在一天或多天內(nèi)進(jìn)行?，F(xiàn)有系統(tǒng)通常不需進(jìn)行精密度分析，但是當(dāng)某一臨床菌株在新系統(tǒng)中的結(jié)果不可重復(fù)時(shí)，需在現(xiàn)有檢測
系統(tǒng)中重新檢測。如果現(xiàn)有檢測系統(tǒng)的結(jié)果仍然不可重復(fù)，換一菌株。評估精密度，至少95%的結(jié)果符合EA。此外，至少95%質(zhì)控菌株的結(jié)果在控。 7.6 準(zhǔn)確度指待評估藥敏檢測系統(tǒng)的結(jié)果和對照方法之間結(jié)果的一致性。使用相同菌株同時(shí)在新系統(tǒng)和對照系
統(tǒng)中檢測。推薦使用臨床菌株。評估準(zhǔn)確度包括在不同檢測系統(tǒng)中評估CA和EA，可接受標(biāo)準(zhǔn)為：CA≥90%和EA≥90%。 7.7 藥敏試驗(yàn)的數(shù)據(jù)分析分析驗(yàn)證數(shù)據(jù)時(shí)，應(yīng)當(dāng)只包括抗菌藥物適用的臨床菌株的結(jié)果。如頭孢菌素類不用于腸球菌藥敏的
分析。分析藥敏檢測系統(tǒng)的結(jié)果至少包括CA。如果CA可接受，不需評估EA。如果檢測的倍比稀釋度有限
（如2-3個(gè)），不需評估EA；如果倍比稀釋度大于4個(gè)，且報(bào)告的MIC值可用于指導(dǎo)治療時(shí)，評估EA。為
及早發(fā)現(xiàn)問題，應(yīng)在評估中而不是評估后分析數(shù)據(jù)。分類錯(cuò)誤或MIC差異超過一個(gè)倍比稀釋度時(shí)，保存
菌株并補(bǔ)充可能的附加試驗(yàn)。 7.8 矛盾結(jié)果的解決商品化藥敏檢測系統(tǒng)之間不一致的結(jié)果稱為“差異”（discrepancies），而商品化藥敏檢測系統(tǒng)
與參考方法的差異稱為“誤差”（errors）。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)重新檢測具有主要分類差異的菌株（如在一個(gè)系
統(tǒng)中為耐藥，但在另一個(gè)系統(tǒng)為敏感）。如可能，重復(fù)試驗(yàn)最好使用相同的接種物同時(shí)在兩個(gè)系統(tǒng)上檢
測，并重復(fù)三次。如重復(fù)試驗(yàn)結(jié)果仍不一致，使用第三種方法，優(yōu)選是參考方法。此參考方法為該產(chǎn)品
開發(fā)時(shí)所用的方法（見產(chǎn)品說明書上）。實(shí)驗(yàn)室記錄參考方法檢測的結(jié)果，比較新系統(tǒng)與參考方法結(jié)果間的相關(guān)性。如結(jié)果一致，不需要附
加檢測；如不一致，實(shí)驗(yàn)室宜向制造商咨詢。制造商可能要求提供這些菌株用于附加試驗(yàn)。檢測結(jié)果不
一致的菌株，應(yīng)在故障排除后和/或完成制造商建議的糾正措施后重新檢測。 7.9 可接受標(biāo)準(zhǔn)雖然商品化檢測系統(tǒng)在獲批前已建立了嚴(yán)格標(biāo)準(zhǔn)（包括EA和生長不足等），但是實(shí)驗(yàn)室仍有必要分
析自己的數(shù)據(jù)以確保檢測系統(tǒng)正常運(yùn)行?！安町悺保壑卮蟛町悾╩ajor discrepancy， MD） 和 極重大
差異（very major discrepancy，VMD）］指不同藥敏試驗(yàn)檢測系統(tǒng)之間結(jié)果的差別，“誤差”（ME和
VME）指藥敏試驗(yàn)檢測系統(tǒng)與參考方法（如微量肉湯稀釋法和瓊脂稀釋法）結(jié)果的不同。不是所有的藥
敏檢測系統(tǒng)都使用相同的參考方法。當(dāng)符合以下條件時(shí)，針對特定藥物／臨床菌株組合的藥敏檢測系統(tǒng)，認(rèn)為通過驗(yàn)證： a) 與現(xiàn)有系統(tǒng)相比較，CA≥90%和 EA≥90% （如果報(bào)告 MIC）。 b) 所有耐藥菌株的 VMD 或 VME＜3%。 c) 所有敏感菌株的 MD 或 ME＜3%。如果任一條標(biāo)準(zhǔn)沒有滿足，宜采取附加措施，包括重復(fù)檢測結(jié)果不一致的菌株，或檢測額外的菌株，
或與參考方法進(jìn)行比較。
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