第一問(wèn)：RIN值是什么？
RIN全稱(chēng)RNA integrity number，是安捷倫公司開(kāi)發(fā)的應(yīng)用于自動(dòng)化電泳系統(tǒng)2100生物分析儀中用來(lái)評(píng)價(jià)RNA完整性的一個(gè)指標(biāo)。

第二問(wèn)：為什么要測(cè)RNA完整性？
評(píng)價(jià)RNA完整性是核酸質(zhì)控的一種，對(duì)后續(xù)實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性很重大意義?？梢员豢醋鍪谦@得有意義基因表達(dá)數(shù)據(jù)的第一個(gè)關(guān)鍵步驟。采用完整的RNA是下游做基因定量，測(cè)等實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵要素。

第三問(wèn)：RIN值是如何開(kāi)發(fā)的？
RIN值是針對(duì)使用安捷倫2100生物分析儀檢測(cè)真核生物總RNA系統(tǒng)來(lái)開(kāi)發(fā)的。安捷倫用科學(xué)家采集了來(lái)自于人，大鼠，小鼠的不同組織約1300份樣本的總RNA數(shù)據(jù)，并對(duì)其進(jìn)行分析。所有的樣本RNA完整程度都不相同?？茖W(xué)家們預(yù)設(shè)了1-10的編號(hào)，并將這些樣本手動(dòng)分類(lèi)至對(duì)應(yīng)的編號(hào)（數(shù)字越大，完整性越好）。

IN算法是基于神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)等自適應(yīng)學(xué)習(xí)工具開(kāi)發(fā)而成。這些學(xué)習(xí)工具可以從電泳圖中提取的關(guān)鍵特征，例如信號(hào)面積，強(qiáng)度和比值。以圖1舉個(gè)列子，電泳圖被分為不同區(qū)域（前區(qū)、5S區(qū)、快速區(qū)、中區(qū)、前體區(qū)、后區(qū)）和峰（標(biāo)準(zhǔn)品、18s、28s）。安捷倫2100生物分析儀配套分析軟件可以根據(jù)檢測(cè)結(jié)果生成RIN值。
 

圖 1 電泳圖分區(qū)

第四問(wèn)：RIN值怎么看？
RIN值可以設(shè)置為整數(shù)，見(jiàn)圖2。 數(shù)字越大，代表RNA完整性越高，數(shù)字越小，表示RNA降解的越厲害。一般在測(cè)序應(yīng)用中，一般推薦RIN值要大于7；若RIN＜6，會(huì)建議重新送樣；RIN在6-7之間，存在測(cè)序風(fēng)險(xiǎn)。
 

圖 2 不同RIN值代表的RNA完整性

第五問(wèn)：RIN值如何應(yīng)用？
用安捷倫2100生物分析儀測(cè)量RIN值是檢測(cè)RNA完整性的有力工具。在提取樣本RNA之后檢測(cè)RIN值，同時(shí)需要和下游實(shí)驗(yàn)例如qPCR等建立關(guān)聯(lián)，設(shè)定一個(gè)下游實(shí)驗(yàn)成功與否的RIN閾值。該閾值可作用于標(biāo)準(zhǔn)RNA質(zhì)量控制。檢測(cè)的RIN值大于閾值的樣本通過(guò)質(zhì)控QC檢驗(yàn)，而低于閾值的樣本則要被去除。
 

第六問(wèn)：為什么選擇檢測(cè)RIN值？

更加快捷，省時(shí)
相比較于傳統(tǒng)人工電泳實(shí)驗(yàn)，采用安捷倫2100生物分析儀，一次可以同時(shí)檢測(cè)5-12樣本，節(jié)省時(shí)間。

減少實(shí)驗(yàn)步驟，省力
安捷倫2100生物分析儀搭配檢測(cè)芯片，無(wú)需配膠，無(wú)需手動(dòng)跑膠，大大減少了繁瑣的實(shí)驗(yàn)流程，相應(yīng)的也減少了人為誤差。

準(zhǔn)確度高，省心
經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)論證，采用RIN值計(jì)算RNA完整性的變異系數(shù)是為1.4%，遠(yuǎn)低于采用核糖體比率計(jì)算的結(jié)果。在不同濃度的樣品中，RIN評(píng)估的結(jié)果也高于核糖體比率。使用RIN值完全可以作為評(píng)估RNA完整性的靠譜標(biāo)準(zhǔn)！