師姐，上次你給我講的RNA提取小訣竅太有用了，之后提取RNA一直很順利，走咱倆看電影去唄~

不用謝，應(yīng)該的嘛~，看電影沒問題。師姐實驗很順利，有的是時間~

師姐你怎么這么神？說到實驗我又遇到了新問題

，RNA檢測報告我看不明白，求教師姐~

沒問題，不過電影是不是還得再看一次啊

~

好啊，沒問題~

繼上次小編幫助學(xué)弟解答RNA提取相關(guān)問題后，（感興趣的小伙伴可戳RNA提取又不合格？那你一定需要了解這些~），又要為小師弟解答RNA檢測相關(guān)的問題~你若是也存在同樣的疑惑，請認(rèn)真聽小編的講解~

檢測方法

1）1％的瓊脂糖電泳檢測RNA樣品是否有降解以及雜質(zhì)。

2）NanoPhotometer? 分光光度計檢測樣品純度。

3）Qubit? 3.0 Flurometer檢測RNA樣品濃度。

4）安捷倫2100 RNA Nano 6000 Assay Kit檢測RNA樣品的完整性。

涉及指標(biāo)

RNA樣本總量及完整性是評判樣品質(zhì)量的關(guān)鍵點，其中RNA完整性評估依靠RIN值、28S/18S（或者23S/16S）以及Agilent 2100 檢測峰圖基線是否平整來綜合評判。對于降解樣本難以獲取完整的轉(zhuǎn)錄本信息，影響數(shù)據(jù)質(zhì)量及完整性。當(dāng)RNA總量較低時，會導(dǎo)致建庫成功率低，或數(shù)據(jù)dup率高等問題。下面小編就來詳細(xì)介紹每個指標(biāo)代表的意義。

RNA電泳膠圖

RNA 電泳膠圖主要需查看以下幾方面：

1）看目的條帶是否明亮清晰

2）看泳道內(nèi)是否有降解彌散區(qū)

3）看膠孔處有無蛋白污染

4）看有無DNA污染

5）看有無外源物種核酸污染

目的條帶明亮清晰，泳道無彌散區(qū)，無蛋白和DNA污染的樣品質(zhì)量較好。

動物樣品膠圖上可見目的條帶為28S、18S、5S，植物樣品為25S、18S、5S，昆蟲或者軟體動物18S、5S，原核樣品23S、16S、5S。下面是兩組不同質(zhì)量的RNA電泳圖示例。

RNA質(zhì)量較好的示例

外源污染和降解示例

RIN值

RNA Integrity Number（RIN）數(shù)值大小即反應(yīng)樣品完整性情況，數(shù)值越接近10表明樣品完整性越高，反之RIN值越小完整性越差。特殊樣品需結(jié)合2100峰圖一起評估。Agilent 2100 Bioanalyzer檢測不僅可以得到樣品RIN，還可以得到樣品的濃度和28S/18S（原核生物為23S/16S）。

Agilent 2100 Bioanalyzer

28S/18S

28S和18S比值（28S/18S）是評估樣品完整性的另一項指標(biāo)，真核生物的比值大于等于1.5 表示RNA完整性較好，如比值逆轉(zhuǎn)，則表明RNA降解。

原核生物23S/16S數(shù)值大于等于1.2 表明RNA完整性較好。

節(jié)肢動物的RNA在2100檢測前熱變性的過程會使28S拆成兩個片段，所以節(jié)肢動物無28S/18S判定指標(biāo)。

2100峰圖

如下是兩個RNA樣品2100檢測結(jié)果示例。

真核生物樣品完整性較好2100檢測峰圖

真核生物樣品完整性較差2100檢測峰圖

可知2100檢測會提供2100峰圖、樣品濃度、28S/18S、RIN值、峰面積、模擬膠圖等信息。峰圖中需重點查看基線是否平整，有無降解雜峰，28S與18S峰形及比值。

OD260/OD280 OD260/OD230

OD260/OD230與OD260/OD280均用于判斷RNA純度，分別表示RNA樣品中有無碳水化合物和蛋白質(zhì)污染。

A230nm 是碳水化合物最高吸收峰的吸收波長，如酚，糖類等；A260nm是核酸最高吸收峰的吸收波長，如 RNA，DNA，引物等；A280nm 是蛋白質(zhì)最高吸收峰的吸收波長。

純RNA：1.7 ＜OD260/280＜2.0（＜1.7時表明有蛋白質(zhì)或酚污染；＞2.0時表明可能有異硫氰酸殘存）。純 RNA的OD260/230比值為2.5，若比值小于2.0標(biāo)明樣品被碳水化合物（糖類），鹽類或有機溶劑污染。

NanoDrop 2000微量分光光度計

了解以上信息，看懂RNA檢測報告就是小case了~

各位小伙伴是不是也希望有我這么一個貼心且博學(xué)的學(xué)姐啊~那就請關(guān)注我們的微信號，多多后臺留言吧~小編會密切關(guān)注、熱情解答留言中的每一個問題，并且還不會要求請我看電影哦~

安諾基因擁有專業(yè)的RNA提取檢測團隊，一流的質(zhì)檢平臺，保證樣品檢測結(jié)果準(zhǔn)確可靠。RNA樣品質(zhì)檢合格后，歡迎隨時與我們聯(lián)系~

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文案：RNA產(chǎn)品經(jīng)理 范如婷