隨著人口增長(zhǎng)和老齡化程度加劇，我國(guó)腫瘤患者發(fā)病率和死亡率持續(xù)走高。腫瘤已然成為嚴(yán)重威脅人們健康的主要問(wèn)題之一。

據(jù)中國(guó)癌癥中心數(shù)據(jù)顯示，惡性腫瘤死亡占居民全部死因的23.91％，且近十幾年來(lái)惡性腫瘤的發(fā)病死亡均呈持續(xù)上升態(tài)勢(shì)，近10多年來(lái)，惡性腫瘤發(fā)病率每年保持約3.9％的增幅，死亡率每年保持2.5％的增幅，估計(jì)目前每年新增腫瘤患病人數(shù)已突破400萬(wàn)人。

腫瘤具有高死亡率、高轉(zhuǎn)移率和高復(fù)發(fā)率，是危害人類健康的重大疾病！

懼怕嗎？恐懼嗎？但是我們不能因此就被它嚇倒！要去面對(duì)！

怎么面對(duì)呢？

找到一種能夠反映和監(jiān)測(cè)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展，判斷腫瘤的預(yù)后和復(fù)發(fā)的方法。

一、腫瘤標(biāo)志物——解決之法

腫瘤標(biāo)志物由腫瘤組織或宿主對(duì)腫瘤的反應(yīng)產(chǎn)生的，常見(jiàn)的有癌 胚蛋白、腫瘤抗原、酶類標(biāo)志物、激素、糖類、抗原等，對(duì)早期檢出腫瘤具有重要意義。監(jiān)測(cè)腫瘤標(biāo)志物水平變化是評(píng)估腫瘤治療效果的重要方法。在腫瘤早期階段開(kāi)展快速、有效的檢測(cè)是十分必要，不僅可以達(dá)到早發(fā)現(xiàn)、早治療的目的，還以改善患者就醫(yī)體驗(yàn)。

由于不同的腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)方法具有各自不同的要求與特征，今天就由我來(lái)對(duì)目前臨床上常用的幾種腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)方法的最新研究進(jìn)行分析與總結(jié)。

二、常見(jiàn)的腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)方法：

①免疫學(xué)方法

②生物傳感器

③蛋白組學(xué)技術(shù)

④分子生物學(xué)方法

⑤液體活檢等。

三、腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)方法分析與總結(jié)

1、放射免疫分析

放射免疫分析是一種傳統(tǒng)的檢測(cè)腫瘤標(biāo)志物的方法，是將放射性核素檢測(cè)技術(shù)與抗原抗體結(jié) 合特異性的特點(diǎn)相結(jié)合，來(lái)定量微量物質(zhì)。目前已逐漸被其他檢測(cè)方法取代。

目前放射免疫分析多使用放射性核素¹²⁵I，替代了3H和14C而被廣泛使用。

◆優(yōu)點(diǎn)：具有高靈敏度、易于商品化等優(yōu)勢(shì)。

◆缺點(diǎn)：試劑盒使用壽命短、有放射性污染風(fēng)險(xiǎn)等。

2、化學(xué)發(fā)光免疫分析

化學(xué)發(fā)光免疫分析是目前常用和較為成熟的腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)技術(shù)。

自1928年德國(guó)化學(xué)家Albrecht發(fā)現(xiàn)魯米諾的化學(xué)發(fā)光特性后，后來(lái)又將化學(xué)發(fā)光技術(shù)與微芯片電泳化學(xué)發(fā)光（microchip-electrophoresis chemiluminescence，MCE-CL）等技術(shù)聯(lián)合使用，到最近又基于金屬及金屬?gòu)?fù)合物、磁性納米顆粒、量子點(diǎn)等催化發(fā)光底物的無(wú)酶免疫系統(tǒng)不斷發(fā)展，將電化學(xué)技術(shù)和化學(xué)發(fā)光相結(jié)合檢測(cè)腫瘤標(biāo)志物，兼具了化學(xué)發(fā)光的高靈敏度和電化學(xué)的時(shí)間、空間可控性的優(yōu)點(diǎn)。

◆優(yōu)點(diǎn)：效率高、靈敏度高、快速、線性范圍廣、儀器結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、自動(dòng)化程度高、適合小型化、無(wú)放射性危害等

◆最新研究：有研究人員以CuS納米粒子作為過(guò)氧化物酶模擬物，設(shè)計(jì)了一種新型的無(wú)標(biāo)記化學(xué)發(fā)光 （chemiluminescence，CL）免疫方法測(cè)定甲胎蛋白，與基于酶標(biāo)的CL免疫測(cè)定法相比，提出的無(wú)標(biāo)記測(cè)定模式更簡(jiǎn)單、價(jià)廉、快速。采用無(wú)標(biāo)記的CL免疫測(cè)定法測(cè)定甲胎蛋白的線性范圍為0.1~60 ng / mL，檢出限為0.07 ng / mL，且此CL免疫測(cè)定系統(tǒng)顯示出良好的特異性、可接受的重復(fù)性和良好的準(zhǔn)確性。

3、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)是一項(xiàng)臨床上已普及的檢測(cè)技術(shù)，通過(guò)底物使酶顯色來(lái)達(dá)到檢測(cè)目的。通過(guò)采用不同的酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)策略，來(lái)開(kāi)發(fā)腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)試劑盒。

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)被開(kāi)發(fā)后其檢測(cè)系統(tǒng)得到不同的優(yōu)化，

凝集素及生物素-親和素系統(tǒng)：在酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)中的應(yīng)用大大增強(qiáng)了其檢測(cè)的敏感性，熒光素酶夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)系統(tǒng)：使檢測(cè)的敏感性不斷增強(qiáng)。

◆優(yōu)點(diǎn)：不僅適用于對(duì)單一分析物的測(cè)定，在多個(gè)分析物同時(shí)存在時(shí)，同樣具有良好的適用性。

◆最新研究：越來(lái)越多的研究 集中于開(kāi)發(fā)具有酶樣活性的模擬酶。部分研究人員以Cu²⁺作為助催化劑，利用Cu²⁺/Ag-AgI復(fù)合物作為催化劑具有在可見(jiàn)光下使3,3′,5,5′-四甲基聯(lián)苯胺（3,3′,5,5′-tetramethylbenzidine，TMB）顏色產(chǎn)生變化的特性，構(gòu)建了夾心型比色法，通過(guò)監(jiān)測(cè)TMB溶液的顏色變化以定量癌胚抗原的水平。

4、免疫傳感器

將特異性免疫反應(yīng)與生物傳感技術(shù)相結(jié)合形成的生物傳感器，其生物識(shí)別部分來(lái)自抗原與抗體的特異性識(shí)別和結(jié)合作用，通過(guò)理化換能器和信號(hào)放大裝置將生物信號(hào)轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘?hào)用于檢測(cè)。

目前，免疫傳感器大部分處于試驗(yàn)階段，正向高通量、商品化發(fā)展，以滿足臨床大樣本檢測(cè)的要求，隨著技術(shù)的不斷成熟，有望成為腫瘤標(biāo)志物的新型檢測(cè)手段。

◆優(yōu)點(diǎn)：靈敏度高、操作方便、設(shè)備簡(jiǎn)單、成本低、可實(shí)現(xiàn)實(shí)時(shí)動(dòng)態(tài)檢測(cè)等優(yōu)勢(shì)。

◆最新研究：主要集中在利用金屬納米材料、納米合金、碳納米材料、聚合物復(fù)合材料等特殊性能來(lái)構(gòu)建免疫傳感器。下面簡(jiǎn)單做一下介紹。

①利用金屬納米材料來(lái)構(gòu)建免疫傳感器。

利用特性：獨(dú)特的光學(xué)、電子和催化特性。例如：多孔鉑納米顆粒較大的表面積和較強(qiáng)的導(dǎo)電性；PdPt 納米籠優(yōu)異的催化性能及高負(fù)載能力

研究人員使用多孔鉑納米顆粒和PdPt納米籠同時(shí)測(cè)定腫瘤標(biāo)志物癌胚抗原和甲胎蛋白，通過(guò)對(duì)其增強(qiáng)和放大響應(yīng)信號(hào)，實(shí)現(xiàn)了對(duì)雙重分析物的靈敏測(cè)定。

②使用納米合金材料來(lái)構(gòu)建免疫傳感器。

利用特性：具有更好的生物相容性、具有更強(qiáng)的協(xié)同作用。

優(yōu)點(diǎn)：放大傳感器催化性能、可以提供更豐富的催化反應(yīng)活性位點(diǎn)。

研究人員以石墨烯片和多壁碳納米管作為傳感平臺(tái)，組成納米復(fù)合物修飾電極，來(lái)測(cè)定腫瘤標(biāo)志物潛伏膜蛋白-1。

③使用碳納米材料來(lái)構(gòu)建免疫傳感器。

利用特性：良好的力學(xué)性能、較高的化學(xué)穩(wěn)定性、特殊的電學(xué)性質(zhì)、優(yōu)異的機(jī)械性能和良好的導(dǎo)熱性。

優(yōu)點(diǎn)：響應(yīng)速度快、電子傳遞速率高、負(fù)載量大、吸附性好、催化活性等優(yōu)點(diǎn)。

研究人員研制了以雙層酶修飾碳納米管作為標(biāo)記的夾心型免疫傳感器，利用層層自組裝技術(shù)將辣根過(guò)氧化物酶裝配到多壁碳納米管上，實(shí)現(xiàn)了信號(hào)放大，為臨床分析的超靈敏檢測(cè)提供了有力的支持。

④使用聚合物復(fù)合材料來(lái)構(gòu)建免疫傳感器。

利用特性：良好的氧化還原性能，

優(yōu)點(diǎn)：因聚合物復(fù)合材料摻雜帶來(lái)的半導(dǎo)體或?qū)w性質(zhì)，其活性可被調(diào)節(jié)，摻雜/去摻雜的可逆過(guò)程使其可檢測(cè)不同的分析對(duì)象，擴(kuò)大了檢測(cè)范圍。

研究人員用聚多巴胺-PB2+（PDA-Pb2 +）納米復(fù)合材料作為氧化還原體系，用殼聚糖-金納米復(fù)合材料涂覆電極，對(duì)癌胚抗原進(jìn)行敏感性的電流分析。

5、蛋白組學(xué)

以蛋白質(zhì)為核心，對(duì)蛋白質(zhì)的表達(dá)模式和功能模式進(jìn)行研究。

目前被廣泛用于臨床腫 瘤學(xué)研究，為腫瘤標(biāo)志物的研究提供了良好的平 臺(tái)，但同時(shí)具有檢測(cè)成本昂貴、對(duì)技術(shù)人員操作 要求高等缺點(diǎn)。

◆優(yōu)點(diǎn)：蛋白組學(xué)技術(shù)具有高通量、 微型化、自動(dòng)化的優(yōu)勢(shì)，

◆最新研究：

蛋白質(zhì)芯片是近十年來(lái)新興的分析技術(shù)，即在支持物表面排列蛋白質(zhì)探針以捕獲目標(biāo)蛋白，再通過(guò)檢測(cè)器進(jìn)行定性或定量分析。臨床上常用利用蛋白質(zhì)芯片來(lái)研究蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)之間的相互作用以及最重要的篩選和尋找腫瘤標(biāo)志物。

研究人員設(shè)計(jì)了一種蛋白質(zhì)芯片，使用膠體納米金標(biāo)記葡萄球菌屬蛋白A作為指標(biāo)，應(yīng)用免疫金銀染色增強(qiáng)技術(shù)擴(kuò)增檢測(cè)信號(hào)，此蛋白質(zhì)芯片可在不存在交叉反應(yīng)的情況下檢測(cè)乙型肝炎病毒抗體和丙型肝炎病毒抗體，并可在40 min內(nèi)提供結(jié)果，速度相對(duì)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)等方法更快。

6、分子生物學(xué)方法

檢測(cè)腫瘤標(biāo)志物的分子生物學(xué)方法包括聚合酶鏈反應(yīng)（polymerase chain reaction，PCR）、熒光原位雜交技術(shù)（fluorescence in situ hybridization，FISH）、逆轉(zhuǎn)錄PCR、單鏈構(gòu)象多態(tài)性 （single-strand conformation polymorphism，SSCP）、多種測(cè)序技術(shù)等。

目前PCR是被廣泛使用的一種簡(jiǎn)單、敏感、高效、特異和快速的，能在體外擴(kuò)增DNA的技術(shù)。如逆轉(zhuǎn)錄PCR被用于口咽癌、結(jié)直腸癌、前列腺癌、肺癌等多種腫瘤的檢測(cè)；甲基化特異性PCR是一種檢測(cè)特異位點(diǎn)甲基化的技術(shù)，研究發(fā)現(xiàn)甲基化特異性PCR對(duì)于胃癌標(biāo)志物的檢出率高于逆轉(zhuǎn)錄PCR。

◆優(yōu)點(diǎn)：具有高通量，特異性強(qiáng)、敏感性高等優(yōu)勢(shì)，

◆缺點(diǎn)：價(jià)格昂貴、檢測(cè)周期長(zhǎng)等缺點(diǎn)。

◆最新研究：研究人員以標(biāo)記的特異寡聚核苷酸片段作為探針，根據(jù)核酸堿基配對(duì)原理，將標(biāo)記的探針與單鏈核酸片段配對(duì)，在熒光顯微鏡下觀察目標(biāo)序列的分布，在腫瘤生物標(biāo)志物檢測(cè)和個(gè)體化醫(yī)療方面具有重要意義。

7、液體活檢

液體活檢指通過(guò)對(duì)血液樣品等非固體生物組織的采集，檢測(cè)生物標(biāo)志物，對(duì)全身進(jìn)行腫瘤分析。以實(shí)現(xiàn)疾病的分子鑒定，協(xié)助臨床早期診斷、準(zhǔn)確預(yù)后、個(gè)性化治療以及疾病監(jiān)測(cè)的方法。

◆優(yōu)點(diǎn)：采樣簡(jiǎn)單、成本低廉、早期篩查、克服了腫瘤的時(shí)空異質(zhì)性、靈敏度高、結(jié)果更具代表性、操作簡(jiǎn)便、可實(shí)時(shí)監(jiān)控等

◆缺點(diǎn)：價(jià)格昂貴、檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)不統(tǒng)一、缺乏對(duì)結(jié)果的臨床解讀、技術(shù)還存在一定的局限性、下游技術(shù)不完整等。

◆最新研究：CTC檢測(cè)目前主要使用的是免疫細(xì)胞化學(xué)方法，但CTC 極低的豐度及其異質(zhì)性使其面臨著技術(shù)挑戰(zhàn)。ctDNA檢測(cè)主要采用分子生物學(xué)方法，但ct DNA 具有易降解、含量低等缺點(diǎn)，為精準(zhǔn)檢測(cè)帶來(lái)困難。外泌體檢測(cè)在腫瘤診斷方面顯示出良好的應(yīng)用前景，是具有發(fā)展?jié)摿Φ脑\斷方法，但其提取及操作尚無(wú)統(tǒng)一流程，檢測(cè)系統(tǒng)有待進(jìn)一步完善。

8 總結(jié) 腫瘤標(biāo)志物作為臨床上腫瘤輔助診斷、治療 參考以及預(yù)后判斷的重要指標(biāo)，目前在應(yīng)用上愈 發(fā)廣泛，臨床對(duì)檢測(cè)技術(shù)的要求也不斷發(fā)展。不 僅有大量靈敏度或特異性更高的標(biāo)志物被發(fā)現(xiàn)， 而且在檢測(cè)方法上也緊跟臨床工作需求而不斷發(fā) 展。不同檢測(cè)方法均有其優(yōu)勢(shì)與不足，如何對(duì)不 同方法進(jìn)行整合，提高腫瘤標(biāo)志物的檢出能力， 是研究者們需關(guān)注和探索的問(wèn)題。能夠在腫瘤早 期檢出低含量腫瘤標(biāo)志物，永遠(yuǎn)是臨床腫瘤診斷 的主要需求。不管使用何種材料，使用何種方 法，提高檢測(cè)的敏感性和特異性及穩(wěn)定性永遠(yuǎn)是 腫瘤標(biāo)志物研發(fā)所追求的目標(biāo)。

四、總結(jié)——腫瘤標(biāo)志物的意義

腫瘤標(biāo)志物的檢測(cè)對(duì)于腫瘤的預(yù)防、早期診斷與鑒別診斷、輔助腫瘤分類、疾病監(jiān)測(cè)、指導(dǎo)治療和預(yù)后判斷有重要作用，可有效彌補(bǔ)其他醫(yī)學(xué)技術(shù)對(duì)腫瘤診斷、治療及預(yù)后判斷的不足。

與傳統(tǒng)診斷腫瘤的方法（病理組織活檢、MRI、CT、B超、X線胸片、內(nèi)鏡檢查）腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)具有操作便捷、標(biāo)本易獲取、非侵入性、價(jià)格低廉、易于動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)疾病等優(yōu)點(diǎn)。對(duì)腫瘤早期檢測(cè)具有重要意義。

通過(guò)對(duì)不同的腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)方法的整合，相信大家已經(jīng)對(duì)其發(fā)展有了更深的認(rèn)識(shí)！如何更好的貼合臨床的發(fā)展與需求、如何更早檢測(cè)出腫瘤、如何更精確的診斷出腫瘤是腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)方法的初衷與追求。