來源：IVD銷售實戰(zhàn)課堂

作者：體外診斷學院

◆  ◆  ◆

60年代，使用的是放射免疫檢測，優(yōu)點：成本低、靈敏度高，但缺點很明顯，存在放射性污染、有效期短、操作復雜。

70年代，出現(xiàn)膠體金技術，雖然操作簡單快速，然而，靈敏度低這一問題，始終無法解決，這也是技術本身決定的

80年代，出現(xiàn)了酶聯(lián)免疫法和時間分辨法，比如以上?？迫A為代表的。國產企業(yè)研發(fā)的，酶聯(lián)免疫技術檢測產品，成本低且性質穩(wěn)定，這也是為什么到目前為止，該方法學一直沿用至今，而其靈敏度和精確度問題，也決定了他從此不能擔當大任。而時間分辨法雖然一定程度上解決了靈敏度問題，而更多的缺點也暴露出來了，操作復雜，成本高，反應時間長，然而在化學發(fā)光還沒有問世之前，比如以上海新波為代表的，時間分辨方法學為主的國產企業(yè)慢慢發(fā)展了起來。如今上海新波也早就被PE完成了戰(zhàn)略收購。

90年代，化學發(fā)光開始問世，雖然在國內的推廣經歷了很長的過程，隨著21世紀的到來，在國外技術的影響下，化學發(fā)光開始不斷發(fā)展，尤其是2010年以后，化學發(fā)光逐步開始了大面積的，時間分辨方法學替換進程，如今在免疫檢測市場，無疑化學發(fā)光是獨樹一幟，引領免疫檢測市場，成為免疫診斷主流技術。

◆  ◆  ◆

關于化學發(fā)光檢測原理，化學發(fā)光標記免疫分析又稱化學發(fā)光免疫分析,是用化學發(fā)光劑直接標記抗原或抗體的免疫分析儀器。化學發(fā)光免疫分析儀包含兩個部分，即免疫反應系統(tǒng)和化學發(fā)光分析系統(tǒng)。化學發(fā)光分析系統(tǒng)是利用化學發(fā)光物質經催化劑的催化和氧化劑的氧化，形成一個激發(fā)態(tài)的中間體，當這種激發(fā)態(tài)中間體，回到穩(wěn)定的基態(tài)時，同時發(fā)射出光子,我們可以聯(lián)想以下螢火蟲，一閃一閃的，就是生物化學反應后發(fā)出的的光信號，而化學發(fā)光的原理也是類似的，無非是原理不同，但道理是一樣的

當光子發(fā)出后，化學發(fā)光免疫分析儀器中核心探測器件也就是光電倍增管，由單光子檢測并傳輸至放大器，并加高壓電流放大，放大器將模擬電流轉化為數字電流，數字電流將發(fā)光信號由R232數據線傳輸給電腦并加以計算，得出臨床結果。

而免疫反應系統(tǒng)是將發(fā)光物質直接標記在抗原（化學發(fā)光免疫分析） 或抗體（免疫化學發(fā)光分析）上或酶作用于發(fā)光底物。

而關于免疫反應體系這里必須講清楚，抗原抗體反應，這個里面是有未知和已知的關系，如果待測物是測抗原，則抗體是已經知道的，如果待測物是測抗體那抗原是已知的。而前面已經講了化學發(fā)光現(xiàn)象，簡單的講就是光信號的強度和待測物濃度是成一定正比關系的，或者是可以通過，相關關系式換算出來的。

◆  ◆  ◆

技術分類是根據發(fā)光體系也就是發(fā)光劑的不同進行分類，可分為：間接化學發(fā)光、電化學發(fā)光、直接化學發(fā)光、光激化學發(fā)光。今天我們主要講講前三類目前主流的發(fā)光技術。

1、間接化學發(fā)光 

他是用參與催化某一化學發(fā)光反應的酶如辣根過氧化物酶（HRP)或堿性磷酸酶（ALP)來標記抗原或抗體，在與待測標本中相應的抗原（或抗體）發(fā)生免疫反應后，形成固相包被抗體-待測抗原-酶標記抗體復合物，經洗滌后，加入底物（也就是發(fā)光劑）,酶催化和分解底物發(fā)光，由光量子閱讀系統(tǒng)接收，光電倍增管將光信號轉變?yōu)殡娦盘柌⒓右苑糯?，再把它們傳送至計算機數據處理系統(tǒng)，計算出測定物的濃度。

優(yōu)勢：發(fā)光過程中作為標記物的酶基本不被消耗，發(fā)光信號強而穩(wěn)定，且發(fā)光時間較長；檢測方式簡單、成本較低。

關于間接化學發(fā)光，我們要明白以下三點：

1、是用酶進行標記抗原或抗體；

2、標記復合物反應過程中加入底物也就是發(fā)光劑后，經催化和分解產生發(fā)光；

3、光信號轉化為電信號，并由計算機進行處理和換算得到實驗結果。代表廠家：貝克曼、邁瑞、西門子、安圖等。

2、直接化學發(fā)光 

它是用吖碇酯等直接標記抗體（或抗原）,與待測標本中相應的抗原（或抗體）發(fā)生免疫反應后，形成固相包被抗體-待測抗原-吖碇酯標記抗體復合物，這時只需加入氧化劑過氧化氫和氫氧化鈉形成堿性環(huán)境，吖碇酯在不需要催化劑的情況下分解、發(fā)光。

優(yōu)勢：試劑穩(wěn)定性好，易于保存；標記物為小分子，對標記的抗原/抗體的空間位點幾乎不造成影響；本底低，靈敏度好，結果穩(wěn)定。代表廠家：雅培、新產業(yè)、索靈等。

關于直接化學發(fā)光，我們需要明白以下三點：

1、用壓吖啶酯等標記物標記抗原或抗體；

2標記復合物反應過程中加入氧化劑過氧化氫和氫氧化鈉形成堿性環(huán)境進行分解和發(fā)光。；

3、光信號轉化為電信號，并由計算機進行處理和換算得到實驗結果。

3、電化學發(fā)光

是以電化學發(fā)光劑三聯(lián)砒錠釕標記抗體(或抗原),以三丙胺(TPA)為電子供體,在電場中因電子轉移而發(fā)生特異性化學發(fā)光反應,它包括電化學和化學發(fā)光兩個過程。

優(yōu)勢:可控的反應體系快速檢測時間高精密度和高靈敏度寬廣的檢測范圍。

關于以羅氏為代表的電化學發(fā)光，我們需要明白以下三點：

1、用電化學發(fā)光劑標記抗原或抗體；

2、電化學反應過程中因電子產生轉移而出現(xiàn)化學發(fā)光；

3、光信號轉化為電信號，并由計算機進行處理和換算得到實驗結果。

以上就是我們化學發(fā)光的三種主流化學發(fā)光反應方法學介紹

◆  ◆  ◆