近年來，雙特異性抗體有一個(gè)明顯的井噴趨勢(shì)，實(shí)質(zhì)上是靶點(diǎn)協(xié)同設(shè)計(jì)伴隨著腫瘤免疫而興起。國內(nèi)的雙特異性抗體更多地是一種Fast Follow的競爭環(huán)境，本文主要梳理雙抗的研發(fā)格局。理解雙抗的邏輯有兩個(gè)層面：技術(shù)平臺(tái)、靶點(diǎn)組合。其中技術(shù)平臺(tái)一度是重要的一環(huán)，然而隨著技術(shù)的進(jìn)步靶點(diǎn)組合背后的機(jī)制探索才是更重要的因素。

關(guān)于雙抗技術(shù)，已經(jīng)有許多綜述文章進(jìn)行羅列。最早的雙抗設(shè)計(jì)思路很直接，因?yàn)榭贵w是二對(duì)稱的，將兩個(gè)半抗體組合即可形成雙特異性抗體。由此，早期的雙抗設(shè)計(jì)集中在促進(jìn)異源重鏈的形成。從理化性質(zhì)上，大概可以歸類為基于空間位阻的KiH等和基于電荷ART-Ig等雙抗技術(shù)平臺(tái)。至于輕鏈的匹配問題，可以采用共同輕鏈或者另一層匹配設(shè)計(jì)。這些工程化的改造構(gòu)成了非對(duì)稱雙抗技術(shù)的核心，也是各生物技術(shù)公司專利保護(hù)的核心。

基于電荷的設(shè)計(jì)靈活性更強(qiáng)，因此很多生物技術(shù)公司根據(jù)類似原理開發(fā)了雙特異性抗體技術(shù)。不過考慮到兩條鏈相互作用的氨基酸總歸是比較保守，因此不同技術(shù)平臺(tái)在改造專利中氨基酸突變保護(hù)的覆蓋范圍上會(huì)有一些overlap。

另外一個(gè)獨(dú)特設(shè)計(jì)的非對(duì)稱雙抗包括再生元的雙抗技術(shù)思路稍顯不同，基于改造后的重鏈不再結(jié)合Protein A，從而通過Protein A的pH梯度純化來得到雙抗。

韓美的Pentambody是在CH3引入突變，促進(jìn)異源二聚體之間形成氫鍵。凡恩世2019年9月與韓美達(dá)成合作，開發(fā)雙抗和多抗。

國內(nèi)的雙抗技術(shù)平臺(tái)總體上與前述相符，如康寧杰瑞CRIB、愛思邁的Exmab雙抗技術(shù)（下圖）均基于電荷來促進(jìn)異源二聚體重鏈的形成，與ART-Ig等基于電荷的雙抗技術(shù)類似。

很多雙抗實(shí)際上應(yīng)用了類似的設(shè)計(jì)。如翰思生物的PD-1/CD47雙抗（PD-1抗體與SIRPα融合）、比洋生物PD-1抗體-CD80融合蛋白、信達(dá)生物OX40抗體-PD-L1納米抗體融合蛋白、普米斯生物基于納米抗體的PD-L1/TGF-β雙抗等。

如果兩個(gè)抗體部分都采用單鏈的納米抗體或scFv，雙抗的形式更為簡單。典型的如安進(jìn)的BiTE（2個(gè)scFv串聯(lián)）、Numab的兔雙抗MATCH技術(shù)、Ablynx的納米雙抗、Harpoon的TriTAC技術(shù)（一個(gè)scFv和一個(gè)納米抗體串聯(lián)）。在半衰期方面，安進(jìn)二代BiTE技術(shù)在2個(gè)scFv基礎(chǔ)上再串聯(lián)一個(gè)Fc且其兩條鏈也采取首尾相連（整體仍是單鏈），Numab串聯(lián)一個(gè)抗HSA的兔scFv、Ablynx再串聯(lián)一個(gè)抗HSA的納米抗體，Harpoon再串聯(lián)一個(gè)抗HSA的納米抗體。其中Numab、Ablynx、Harpoon由于都采用抗白蛋白的單鏈抗體結(jié)構(gòu)域，因此整體分子量都很小且無糖基化，表達(dá)上也可以采用微生物表達(dá)。如Ablynx采用畢赤酵母表達(dá)。

類似的，康寧杰瑞PD-L1/CTLA-4雙抗KN046即抗PD-L1和抗CTLA-4的兩個(gè)納米抗體串聯(lián)至Fc。和安進(jìn)二代BiTE區(qū)別在于Fc為雙鏈，每條重鏈串聯(lián)PD-L1納米抗體和CTLA-4納米抗體，為二對(duì)稱四價(jià)抗體。

協(xié)同效應(yīng)

HER2雙表位的協(xié)同效應(yīng)已經(jīng)被羅氏Herceptin、Perjeta聯(lián)用所證實(shí)，康寧杰瑞、天廣實(shí)等開發(fā)了HER2雙表位的雙抗，百濟(jì)神州則引進(jìn)了Zymeworks的HER2雙表位雙抗ZW25和ADC雙抗ZW49。

AMD等眼病繼VEGF之后阻斷多條血管增生通路的多特異性治療（抗體或融合蛋白）成為新的熱點(diǎn)，PDGF靶點(diǎn)失敗之后，羅氏正在開發(fā)VEGF/Ang2雙抗Faricimab（下圖），信達(dá)生物開發(fā)VEGF/CFD融合蛋白等。再如自身免疫病中，百時(shí)美施貴寶開發(fā)IL-17A/IL-23，禮來開發(fā)IL-17/TNFα雙抗等，設(shè)計(jì)思路都是希望通過阻斷不同的炎癥通路可以達(dá)到協(xié)同效應(yīng)的目的。

不論是PD-1抗體為代表的免疫檢驗(yàn)點(diǎn)抑制劑、還是CAR-T等，T細(xì)胞都是一個(gè)治療的核心。但CD3雙抗一個(gè)很重要的問題是正常組織過度激活T細(xì)胞有很強(qiáng)的毒性，因而CD3雙抗的發(fā)展經(jīng)歷了一些波折。不同的生物技術(shù)公司在CD3抗體的選擇和具體設(shè)計(jì)上都形成了獨(dú)有的技術(shù)平臺(tái)，盡量平衡有效性與安全性。如紀(jì)念斯隆凱瑟琳中心發(fā)現(xiàn)抗CD3的scFv镕和達(dá)輕鏈C端的抗腫瘤活性更強(qiáng)。

安進(jìn)二代BiTE將Fc兩條鏈?zhǔn)孜蚕噙B串聯(lián)到2個(gè)scFv上，可以更好的保證CD3抗體依賴于另外一個(gè)腫瘤靶點(diǎn)的結(jié)合再激活T細(xì)胞。

共刺激雙抗：CD28雙抗和4-1BB雙抗

去年以來，賽諾菲CD38/CD3/CD28三特異性抗體，再生元CD28共刺激雙抗，中外制藥4-1BB共刺激雙抗增強(qiáng)CD3雙抗療效相繼進(jìn)入視野。這些雙抗或多特性抗體的原理類似于CAR-T，即通過選用低親和力的CD3抗體保證安全性，同時(shí)通過CD28抗體或4-1BB抗體增強(qiáng)腫瘤微環(huán)境中腫瘤細(xì)胞靶點(diǎn)結(jié)合后T細(xì)胞的激活。也就是同時(shí)解決安全性和有效性的問題。

PD-L1/4-1BB雙抗也有類似的問題，因?yàn)?-1BB抗體本身有毒性問題，因此雙抗設(shè)計(jì)上強(qiáng)調(diào)PD-L1結(jié)合以來的4-1BB激活。基石藥業(yè)（引進(jìn)Numab的ND021，如下圖）、科望生物（引進(jìn)Inhibrx的Inbrx-105）、維立志博、洛啟生物（納米雙抗）等都強(qiáng)調(diào)類似的作用機(jī)制。此次AACR披露F-Star的PD-L1/4-1BB雙抗強(qiáng)調(diào)4-1BB的激活依賴于PD-L1介導(dǎo)的cross-linking。當(dāng)然，艾伯維今年2月Molecular Cancer Therapeutics期刊上發(fā)表的文章，已經(jīng)證實(shí)FcγR依賴的Cross-linking和結(jié)合表位是降低4-1BB單抗肝毒性和提高抗腫瘤活性的關(guān)鍵。也就是說通過單抗結(jié)合表位/Cross-linking的優(yōu)化，或者雙抗的第二靶點(diǎn)（PD-L1介導(dǎo)）的設(shè)計(jì)，都有可能改善4-1BB靶點(diǎn)的安全性并提高抗腫瘤活性。

圍繞NK細(xì)胞的三特異性抗體

類似于賽諾菲基于T細(xì)胞的TAA/CD28/CD3三特異性抗體，Innate Pharma開發(fā)了基于NK細(xì)胞的TAA/CD 16/NKp46三特異性抗體NKCE技術(shù)，以更好的募集和激活NK細(xì)胞，殺傷腫瘤細(xì)胞。

類似的技術(shù)還有Dragonfly Therapeutics開發(fā)的TriNKET技術(shù)，為TAA/CD16/NKG2D三特異性抗體。也就是說，在TAA/CD16傳統(tǒng)雙抗基礎(chǔ)上，Dragonfly引入了NKG2D、Innate Pharma引入了NKp46來更好的激活NK細(xì)胞。Innate Pharma背靠阿斯利康開展多項(xiàng)合作，Dragonfly則背靠新基（如今是百時(shí)美施貴寶）開展多項(xiàng)合作。

此外，有國內(nèi)企業(yè)如百利藥業(yè)開發(fā)了四特異性抗體技術(shù)GNC，架構(gòu)為scFv串聯(lián)的TAA/CD3/4-1BB/PD-L1。細(xì)節(jié)可見參考文章，此處不做評(píng)論。

抗體-細(xì)胞因子融合蛋白

PD-1等免疫檢驗(yàn)點(diǎn)之后，腫瘤免疫目前的競爭焦點(diǎn)在于更好的激活免疫系統(tǒng)，以提高PD-1抗體等的響應(yīng)率。簡單說，就是多機(jī)制變冷腫瘤為熱腫瘤，提高治療效果。

在這之中，細(xì)胞因子IL-2、IL-7、IL-10、IL-15、TGF-β等被廣泛嘗試用于提高PD-1抗體等的響應(yīng)率和療效。除了聯(lián)合治療，抗體-細(xì)胞因子融合蛋白成為一種重要的方式。

PD-L1/TGF-β融合蛋白M7824大火之后，恒瑞醫(yī)藥SHR-1701、普米斯生物PM8001、創(chuàng)勝集團(tuán)等都在跟蹤開發(fā)。除此之外，IL-2、IL-7、IL-15、SIRPα也有國內(nèi)生物技術(shù)公司用于構(gòu)建抗體-細(xì)胞因子融合蛋白。

此外，TLR8抑制劑近年來也被初步證實(shí)可以提高免疫檢驗(yàn)點(diǎn)抗體藥物的療效。Silverback即致力于開發(fā)抗體-TLR8抑制劑的ImmunoTAC技術(shù)平臺(tái)，由于TLR8抑制劑為小分子，因此整個(gè)分子形式上類似于ADC，但作用機(jī)制上類似于抗體融合蛋白或雙抗。