今年的ASCO除了大火的KRAS小分子外，最大的贏家莫過于Iovance Biotherapeutics的TIL（腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞）療法LN-145。前幾日FDA已經(jīng)承認(rèn)，正在進(jìn)行的innova TIL-04研究可能足以支持晚期宮頸癌患者的治療登記。這就意味著，治療實(shí)體瘤的細(xì)胞療法將在TIL療法中誕生！

然而與如日中天的CAR-T療法相比，TIL療法依舊顯的默默無聞，參與的玩家和資本都非常之少，雖然兩項(xiàng)技術(shù)都是出自NCI的Steven A. Rosenberg老先生之手。

一、TIL療法的研究發(fā)現(xiàn)階段

1986年Rosenberg等從小鼠腫瘤中分離出了浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞，將它在體外用IL-2擴(kuò)增到一定數(shù)量后，重新輸回到長(zhǎng)瘤的小鼠體內(nèi)，能夠有效地控制肝、肺轉(zhuǎn)移灶的生長(zhǎng)，甚至可使有些小鼠的轉(zhuǎn)移灶和原發(fā)灶的腫瘤完全消退。

Rosenberg認(rèn)為在手術(shù)切除的腫瘤組織中，雖然大部分是腫瘤細(xì)胞，也有少部分淋巴細(xì)胞。這些淋巴細(xì)胞中有部分是針對(duì)腫瘤特異性突變抗原的T細(xì)胞，是深入到敵軍內(nèi)部打擊能力最強(qiáng)的免疫細(xì)胞，但是由于一些原因(比如腫瘤微環(huán)境)，他們的功能受到了抑制，不能在腫瘤組織中有效的殺傷腫瘤細(xì)胞。

接下來Rosenberg采用該療法治療了黑色素瘤患者，并于1988年在新英格蘭醫(yī)學(xué)雜志發(fā)表了試驗(yàn)結(jié)果。15名轉(zhuǎn)移性黑色素瘤患者在使用TIL細(xì)胞聯(lián)合IL-2以及環(huán)磷酰胺治療后，9位產(chǎn)生了客觀應(yīng)答，緩解時(shí)間為2-13個(gè)月。該臨床試驗(yàn)首次證實(shí)了TIL治療轉(zhuǎn)移黑色素瘤的療效。

雖然TIL療法在發(fā)現(xiàn)之初確實(shí)驚艷過大家，但自發(fā)現(xiàn)的這這些年以來確實(shí)很少人獲益，主要有以下幾個(gè)原因：

1.TIL針對(duì)黑色素瘤患者僅部分有效，TIL里面也有Treg細(xì)胞，早期的擴(kuò)增后回輸,大部分是Treg還有其它免疫抑制環(huán)境，導(dǎo)致效果并不好

2.最初的TIL療法無法保證回輸?shù)腡細(xì)胞在體內(nèi)能存足夠的時(shí)間，通常輸入后的很短時(shí)間里，就消失的無影無蹤，因此不能產(chǎn)生足夠的療效

3.早期的TIL體外擴(kuò)增技術(shù)不成熟，養(yǎng)出的TIL細(xì)胞數(shù)還遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足于臨床應(yīng)用，而且早期的擴(kuò)增技術(shù)不能保證每個(gè)患者的TIL都可以進(jìn)行擴(kuò)增。但隨著Topalian等提出一種快速擴(kuò)增法REP(rapid expansion protocol)，才可以使以使TIL細(xì)胞在短期內(nèi)達(dá)到109~1010數(shù)量級(jí)

4.TIL療法通常伴隨著使用高劑量的IL-2，具有顯著的不良反應(yīng)

5.從腫瘤組織切除，到T細(xì)胞快速擴(kuò)展至回輸需要的數(shù)量，通常需要5~6周的時(shí)間，排除了一部分疾病快速進(jìn)展的患者試用這種療法。

6.針對(duì)其他實(shí)體瘤效果并不好，之前僅局限在黑色素瘤患者 

總的來說：TIL在實(shí)驗(yàn)室較長(zhǎng)的生產(chǎn)過程、TIL療法涉及的多種系統(tǒng)用藥、回輸后副反應(yīng)的管理，都在一定程度上將這個(gè)療法長(zhǎng)時(shí)間限制在研究機(jī)構(gòu)的院墻內(nèi)。 

二、 TIL療法的產(chǎn)業(yè)化——Iovance Biotherapeutics

Iovance Biotherapeutics，于2011年從NCI的Rosenberg團(tuán)隊(duì)引進(jìn)了經(jīng)典的TIL技術(shù)，在與NCI的合作研發(fā)協(xié)議下，集中精力通過對(duì)TIL的生產(chǎn)工藝進(jìn)行簡(jiǎn)化、規(guī)?；繕?biāo)是開發(fā)出可以商業(yè)化的TIL細(xì)胞治療產(chǎn)品。 

★ TIL.1.0版本

Iovance Biotherapeutics療法lifileucel產(chǎn)品基本操作：

1.患者在醫(yī)院里接受手術(shù)，切下來的腫瘤組織立刻運(yùn)送到Iovance Biotherapeutics在各大城市建立的GMP實(shí)驗(yàn)室，提取T細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)的處理和培養(yǎng)；3周之后，TIL細(xì)胞培養(yǎng)成熟，再運(yùn)回醫(yī)院，回輸給病人；

2.在接受TIL回輸前一周，患者要接受大劑量化療的預(yù)處理，用的化療藥是環(huán)磷酰胺 氟達(dá)拉濱；（消除免疫耐受環(huán)境）

3.在TIL回輸后，再接受6個(gè)療程的白介素2靜脈注射，每次60萬個(gè)單位/kg。

讀到這，其實(shí)聰明的讀者應(yīng)該了解到按照Rosenberg的TIL.1.0細(xì)胞的治療流程，回輸?shù)腡IL細(xì)胞其實(shí)是很多細(xì)胞的混合體，并沒有經(jīng)過很特異的篩選。有些TIL細(xì)胞是對(duì)腫瘤特異的，有些并不是特異的。

為了提高有效率，Rosenberg接下來研究了一下這些混合的細(xì)胞里到底哪種特定類型的細(xì)胞才是腫瘤特異的，于是就做了更加精準(zhǔn)的TIL.2.0 版技術(shù)。

★  TIL.2.0版本

和上篇我們的《新生抗原：新生曙光？》中的做法類似：

1.預(yù)測(cè)新生抗原：NCI先利用患者正常細(xì)胞的基因組作為對(duì)照，通過全外顯子測(cè)序（WES）和RNA測(cè)序發(fā)現(xiàn)了患者的癌細(xì)胞存在的體細(xì)胞突變，然后用MHC分子-抗原表位親和力算法進(jìn)行模擬預(yù)測(cè)出新生抗原

2.制作新生抗原的mRNA或者多肽

3.將來自患者的腫瘤組織被切分為多個(gè)小塊，高劑量的IL-2培養(yǎng)11天

4.篩選TIL細(xì)胞：用抗原呈遞細(xì)胞（APC）把這些人工編錄的腫瘤特征（多肽或者mRNA）展現(xiàn)給各個(gè)TIL組分，以供它們識(shí)別

5.特異性篩選：被激活的T細(xì)胞組分會(huì)釋放大量的IFN-γ，并在表面表達(dá)4-1BB

6.快速擴(kuò)增（REP(rapid expansion protocol)）：使用OKT3(anti-CD3)抗體、IL-2以及經(jīng)過輻照滅活后的健康供者的單個(gè)核細(xì)胞作為飼養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行刺激

當(dāng)然除了直接從腫瘤切片組織獲取TIL之外，為了解決一些患者新鮮腫瘤樣本的有限可用性，Rosenberg在15年首次從患者的外周血單核細(xì)胞中成功分離出與突變表位反應(yīng)的T細(xì)胞（雖然這類細(xì)胞在所有外周CD8 T中可能占比不過0.5%）

通過上面方法這樣篩選出來的TIL細(xì)胞就是能夠針對(duì)特異性識(shí)別腫瘤的“精英部隊(duì)”，舉個(gè)例子來說，

大約有三個(gè)來自腫瘤組織的TIL組在APC共培養(yǎng)后因高反應(yīng)活性被篩選出來。TCR分析顯示，這些來自腫瘤組織的T細(xì)胞組分包含有8種TCR類型，他們可以識(shí)別患者的2種腫瘤新生抗原。

雖然費(fèi)盡周折收獲的TCR多樣性只有8種，看起來不算非常多，但在接受TIL治療前的外周血血樣中，這位患者只有這些TCR類型中的2種，而且對(duì)腫瘤新生抗原的反應(yīng)性則僅限于1種抗原。

有意思的是：患者在回輸后6周甚至17個(gè)月時(shí)，外周血仍可檢測(cè)到全部8種TCR類型。而回輸后隨訪過程中，患者的外周血中又檢測(cè)出了另外3種對(duì)腫瘤新抗原具反應(yīng)活性的TCR類型，從而使得可以識(shí)別的腫瘤新抗原增加到4種TCR。這可能是表位擴(kuò)展（epitope spreading）現(xiàn)象，腫瘤細(xì)胞死亡破碎后，被APC細(xì)胞識(shí)別了更多的腫瘤新抗原。

三、TIL對(duì)戰(zhàn)實(shí)體瘤，鋒芒初露？

根據(jù)Nature Reviews Drug Discovery上的一篇文章，雖然全球約90％的癌癥病例是實(shí)體腫瘤，但自1993年以來已開始的細(xì)胞治療試驗(yàn)中只有約一半(1,203項(xiàng)試驗(yàn)中的596項(xiàng))針對(duì)實(shí)體腫瘤，并且大多數(shù)針對(duì)實(shí)體瘤的細(xì)胞治療試驗(yàn)集中在少數(shù)腫瘤類型 - 如黑色素瘤(79項(xiàng)試驗(yàn))、大腦和中樞神經(jīng)系統(tǒng)癌癥(75項(xiàng)試驗(yàn))和肝癌(57項(xiàng)試驗(yàn))，許多實(shí)體瘤類型沒有進(jìn)行任何專門的細(xì)胞治療試驗(yàn)。

與CAR-T的“百家爭(zhēng)鳴”不同的是,TIL療法的推動(dòng)幾乎全靠NCI的Rosenberg課題組，沒有其他的科學(xué)大牛或者大藥企在這個(gè)領(lǐng)域下重注，這也許算是CAR-T“彎道超車”的因素之一。

但這絲毫不影響Iovance的LN-145近期的光芒：

★ 宮頸癌II期臨床：這項(xiàng)臨床試驗(yàn)入組的是至少一線治療失敗的晚期宮頸癌患者，一共27名患者療效可評(píng)價(jià)，這些病人在入組前中位接受過2.6種方案的治療后疾病依然進(jìn)展。中位隨訪了3.5個(gè)月后，結(jié)果顯示：TIL治療的有效率為44%，疾病控制率為89%，其中1名患者腫瘤完全消失，9名患者腫瘤明顯縮小，2名患者腫瘤明顯縮小但療效有待進(jìn)一步證實(shí)。

★ 復(fù)發(fā)難治性黑色素瘤：55名極端難治的晚期惡性黑色瘤患者入組了臨床試驗(yàn)，接受了TIL治療，結(jié)果顯示：有效率為38%，其中包括1名患者腫瘤完全緩解、19名患者腫瘤明顯縮小，疾病控制率為76%。其中包括不少是PD-L1陰性、PD-1抗體治療剛剛失敗的患者。

與CAR-T在實(shí)體瘤里艱難掙扎不同的是，TIL細(xì)胞療法已經(jīng)在乳腺癌、黑色素瘤、宮頸癌、頭頸部鱗癌等多種實(shí)體瘤中取得了成功的案例。腫瘤的異質(zhì)性問題注定會(huì)讓CAR-T療法在實(shí)體瘤中艱難前行，而似乎更恰當(dāng)?shù)姆绞骄褪嵌喾N抗原共同發(fā)力，而腫瘤新生抗原似乎是老天恩賜的寶貝，既高效，又安全。

但TCR-T或者TIL療法也有個(gè)潛在的問題就是這兩種療法都需要癌細(xì)胞保留呈遞該抗原的MHC分子，不巧的是，腫瘤通過這種丟失MHC基因座逃逸免疫系統(tǒng)的可能性也很高。

如果說CAR-T療法拉起了細(xì)胞治療序幕，在血液瘤里大放光彩，那么到如今，不得不承認(rèn)TIL療法在實(shí)體瘤里嶄露頭角，開始接力。

參考文獻(xiàn)：

1.Stevanovi?, Sanja, et al. 'A Phase II Study of Tumor-infiltrating Lymphocyte Therapy for Human Papillomavirus–associated Epithelial Cancers.' Clinical Cancer Research 25.5 (2019): 1486-1493.

2.Zacharakis, Nikolaos, et al. 'Immune recognition of somatic mutations leading to complete durable regression in metastatic breast cancer.' Nature medicine 24.6 (2018): 724.

3.Cohen, Cyrille J., et al. 'Isolation of neoantigen-specific T cells from tumor and peripheral lymphocytes.' The Journal of clinical investigation 125.10 (2015): 3981-3991.

4.Cohen, Cyrille J., et al. 'Isolation of neoantigen-specific T cells from tumor and peripheral lymphocytes.' The Journal of clinical investigation 125.10 (2015): 3981-3991.

5.腫瘤浸潤(rùn)T細(xì)胞療法（二） | 邊研，研發(fā)客

（完）