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發(fā)酵過程中如何減少包涵體的形成

 生物_醫(yī)藥_科研 2019-07-16
如何減少包涵體的形成

? ? ? ?重組蛋白表達過程中,包涵體的形成使后續(xù)活性蛋白的收率降低,并且包涵體的復性及純化過程復雜,難度大。那么如何避免或減少重組蛋白發(fā)酵表達過程中包涵體的形成呢?

表達調控

? ? ? 包涵體的形成,主要原因是表達速率過快,過量表達導致蛋白堆積而成。那么通過降低重組蛋白的表達速率來減少或抑制包涵體的形成,可以嘗試低溫誘導等方式減少包涵體的形成。

優(yōu)化序列

? ? ? ?蛋白序列中含硫氨基酸增多及脯氨酸的數(shù)量增多,更容易形成包涵體,含硫氨基酸數(shù)量多,二硫鍵若不能正確配對極易形成包涵體,而脯氨酸是D型氨基酸,常需要異構酶輔助折疊。所以可以通過定點突變等方式來降低含硫氨基酸和脯氨酸的數(shù)量從而減少包涵體的形成。

共表達

? ? ? ?在蛋白序列上連接一段可溶性表達的序列,來改變蛋白的氨基酸組成及各種氨基酸占的比例,也可以有效避免或減少包涵體的形成,比如加GST標簽有一定的促溶作用。

環(huán)境調控

? ? ? ? ?蛋白所處環(huán)境也會影響其形成包涵體,比如細胞內的環(huán)境pH接近蛋白的pI時也容易形成包涵體,還有滲透壓也會影響細胞內的疏水作用力,也會對蛋白的折疊積累形成影響,那么減少或避免包涵體的形成可以嘗試改變發(fā)酵過程中的pH和培養(yǎng)基中鹽的種類及濃度,來避免或減少包涵體的形成。

生物制藥合伙人

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