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sanofi 2018Q1，top1lantus甘精胰島素，銷售額663m，長(zhǎng)效胰島素，適應(yīng)癥I型糖尿病，能持續(xù)釋放18-26小時(shí)，預(yù)灌封包裝形式，每天皮下注射一次，300單位約180元/支，國(guó)內(nèi)主要是甘李藥業(yè)和珠海億邦制藥，150元/支，醫(yī)保目產(chǎn)品，胰島素可以說(shuō)是甘李藥業(yè)的唯一產(chǎn)品，能做出來(lái)甘精胰島素并打入賽諾菲的市場(chǎng)還是不錯(cuò)的，但是一枝獨(dú)秀肯定是不行的，如果有更新?lián)Q代的產(chǎn)品馬上就會(huì)受到巨大的沖擊，用胰島素賺的錢(qián)抓緊在胰島素方向縱深研發(fā)或者拓寬產(chǎn)品線才能持續(xù)發(fā)展。 科普一下甘精胰島素的生產(chǎn)工藝。 在胰島β細(xì)胞的細(xì)胞核中，第11對(duì)染色體段上胰島素基因區(qū)DNA向mRNA轉(zhuǎn)錄，mRNA從細(xì)胞核轉(zhuǎn)移向細(xì)胞漿的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，轉(zhuǎn)譯成由105個(gè)氨基酸殘基構(gòu)成的前胰島素原。前胰島素原經(jīng)過(guò)蛋白水解作用除其前肽，生成86個(gè)氨基酸組成的長(zhǎng)肽鏈-胰島素原（proinsulin PI）。胰島素原進(jìn)入高爾基體，經(jīng)蛋白水解酶的作用，切去31/32/60三個(gè)精氨酸連接的鏈，斷鏈生成C肽，同時(shí)生成胰島素，分泌到B細(xì)胞外，進(jìn)入血液循環(huán)中。胰島素A鏈21個(gè)氨基酸，B鏈30個(gè)氨基酸，A鏈6位和11位的半胱氨酸間形成一個(gè)二硫鍵，A鏈7位和B鏈7位的半胱氨酸間形成一個(gè)二硫鍵，A鏈20位于B鏈19位的半胱氨酸間形成一個(gè)二硫鍵。 大腸桿菌屬原核生物系統(tǒng)，不會(huì)對(duì)肽鏈進(jìn)行修飾，但是可以生成簡(jiǎn)單的二硫鍵，酵母屬簡(jiǎn)單的真核系統(tǒng)，常用表達(dá)抗體的哺乳細(xì)胞則屬于高等的真核系統(tǒng)，真核系統(tǒng)會(huì)對(duì)蛋白進(jìn)行簡(jiǎn)單的修飾，更接近人體蛋白形式，同時(shí)伴隨著生產(chǎn)效率越來(lái)越低，生產(chǎn)條件越來(lái)越苛刻。胰島素具有兩個(gè)利于通過(guò)大腸桿菌生產(chǎn)的特點(diǎn)，第一是翻譯以后不需要糖基化修飾，第二是是一個(gè)相對(duì)小的分子，由于C鏈的存在，使胰島素原在體外能形成天然的空間構(gòu)象，使得正確折疊率達(dá)80%。重組蛋白在宿主系統(tǒng)中高水平表達(dá)時(shí)，無(wú)論是用原核表達(dá)體系或酵母表達(dá)體系甚至高等真核表達(dá)體系，都可形成包涵體。事實(shí)上，內(nèi)源性的蛋白質(zhì)，如果表達(dá)水平過(guò)高，也會(huì)聚集形成包涵體。因此包涵體形成的原因主要是高水平表達(dá)的結(jié)果。其中大部分是克隆外源蛋白的表達(dá)產(chǎn)物，具有正確的氨基酸組成，但空間構(gòu)象大多是錯(cuò)誤的，因此沒(méi)有生物活性。 甘精胰島素的A鏈21位由天冬氨酸（Asn）變?yōu)楦拾彼幔℅ly），B鏈的30位后加兩個(gè)精氨酸，賽諾菲，物質(zhì)專利US5656722，2014年到期。表達(dá)甘精胰島素的菌種是Escherichia coli(K12)，根據(jù)修改后的甘精胰島素的氨基酸序列加上合適的酶切位點(diǎn)后按大腸桿菌密碼子偏愛(ài)性設(shè)計(jì)DNA序列，找專業(yè)的廠家合成核苷酸序列，設(shè)計(jì)引物，進(jìn)行pcr擴(kuò)增，pcr產(chǎn)物通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)分離。擴(kuò)增后的母的基因加到質(zhì)粒上轉(zhuǎn)入大腸桿菌進(jìn)行表達(dá)，先用大腸桿菌表達(dá)含A、B、C肽的胰島素原，含二硫鍵的胰島素原形成包涵體，包涵體結(jié)構(gòu)致密，采用破碎或者高濃度的變性劑處理收集蛋白。再經(jīng)過(guò)酶切處理切去C肽，得到終產(chǎn)物甘精胰島素。中間需要經(jīng)過(guò)復(fù)雜的上游基因工程技術(shù)，和下游分離提取技術(shù)，都是常規(guī)的生產(chǎn)技術(shù)，多次試驗(yàn)就可以得到優(yōu)化的參數(shù)。 甘精胰島素在中性pH條件下水溶性差，在pH4條件下完全溶解，皮下注射后酸性溶液中性化，甘精胰島素析出形成微晶形態(tài)并持續(xù)緩慢釋放使血藥濃度在24小時(shí)內(nèi)呈現(xiàn)平穩(wěn)的濃度，每ml甘精胰島素注射液含有甘精胰島素100單位（3.6378mg），10mg注射液規(guī)格含輔料30ug鋅，2.7mg間甲苯酚， 20mg85%的甘油 ，20ug聚山梨酯20，用鹽酸或氫氧化鈉調(diào)pH至4.0。3ml預(yù)灌封筆芯注射液規(guī)格輔料30ug鋅，2.7mg間甲苯酚， 20mg85%的甘油，用鹽酸或氫氧化鈉調(diào)pH至4.0。 |
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