近年來，為了提高對(duì)腫瘤的早期檢測(cè)、鑒別診斷、療效觀察以及預(yù)后判斷，人們從腫瘤細(xì)胞的化學(xué)特性、細(xì)胞病理、免疫反應(yīng)和基因表達(dá)產(chǎn)物等諸多方面尋找各種特異性強(qiáng)、靈敏度高的腫瘤標(biāo)志物。

染色體核型分析是以體細(xì)胞分裂中期染色體為研究對(duì)象，分析生物體細(xì)胞內(nèi)染色體的長(zhǎng)度、著絲點(diǎn)位置、臂比、隨體大小等特征。正常人的體細(xì)胞染色體數(shù)目為46條，并有一定的形態(tài)和結(jié)構(gòu)。染色體在形態(tài)結(jié)構(gòu)或數(shù)量上的異常被稱為染色體異常，由染色體異常引起的疾病為染色體病。經(jīng)核型分析后?？梢愿鶕?jù)染色體結(jié)構(gòu)和數(shù)目的變異來判斷生物的病因?，F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)的染色體病有100余種，染色體病在臨床上?？稍斐闪鳟a(chǎn)、先天愚型、先天性多發(fā)性畸形，以及癌腫等。臨床上染色體檢查的目的就是為了發(fā)現(xiàn)染色體異常和診斷由染色體異常引起的疾病。在常用染色體顯帶技術(shù)和分子遺傳學(xué)技術(shù)的運(yùn)用下，可以清晰地觀察到與腫瘤有關(guān)的染色體畸變，如染色體數(shù)目異常，染色體易位、缺失，染色體上腫瘤相關(guān)斷裂點(diǎn)、脆性位點(diǎn)、癌基因位點(diǎn)。在腫瘤的診斷上，染色體核型分析是一個(gè)必不可少而有益的診斷依據(jù)，可以發(fā)現(xiàn)那些由于染色體畸變而引起的腫瘤。

腫瘤相關(guān)斷裂點(diǎn)、脆性位點(diǎn)和癌基因位點(diǎn)或一致，或重疊，或相鄰，其中癌基因位點(diǎn)c-myc、c-mos、Ha-ras-1、c-ets、bel-1、akt-1、bcl-2、yes-1及L-myc與相應(yīng)的腫瘤相關(guān)斷裂點(diǎn)和脆性位點(diǎn)共處同一染色體部位，具有位點(diǎn)的一致性。三類染色體位點(diǎn)一致可能構(gòu)成一個(gè)潛在的腫瘤啟動(dòng)部位，因?yàn)樵谀承┤祟悙盒阅[瘤中三類染色體位點(diǎn)的一致性是常見的特征。例如，腫瘤相關(guān)斷裂點(diǎn)8q24染色體區(qū)是構(gòu)成惡性淋巴瘤、Burkitt淋巴瘤、急性淋巴細(xì)胞白血病L3、急性非淋巴細(xì)胞白血病M2等惡性腫瘤多種染色體重排的一個(gè)重要的斷裂點(diǎn)，它不僅是脆性位點(diǎn)Fra8c的所在部位，也是癌基因c-myc的位點(diǎn)。腫瘤細(xì)胞染色體除了以上腫瘤相關(guān)斷裂點(diǎn)、脆性位點(diǎn)、癌基因位點(diǎn)外，還表現(xiàn)為染色體數(shù)目和結(jié)構(gòu)的異常，在95%以上的不同類型腫瘤細(xì)胞的中期染色體存在數(shù)目異常和結(jié)構(gòu)異常。三類位點(diǎn)的存在是染色體結(jié)構(gòu)異常的因素，而染色體數(shù)目的異常是由于染色體的分離失調(diào)導(dǎo)致的三倍體性或多倍體性，復(fù)制特殊染色體的區(qū)域節(jié)段也可引起基因產(chǎn)物的不平衡。

染色體數(shù)目、結(jié)構(gòu)異常的觀察除了傳統(tǒng)的染色體顯帶技術(shù)外，還可采用分子遺傳學(xué)技術(shù)。熒光原位雜交（FISH）是目前廣泛應(yīng)用的一種非放射性核素原位雜交技術(shù)，在基因定位、標(biāo)記染色體和識(shí)別染色休結(jié)構(gòu)和數(shù)目異常的分析研究中具有重要意義。以DNA特異探針與染色體雜交的方法稱為染色體描繪技術(shù)。由于其具有靈敏、快速、準(zhǔn)確、同時(shí)顯示多種顏色及易于觀察等特點(diǎn)，在染色體分析研究中具有重要的應(yīng)用價(jià)值，特別是在染色體分散程度較差或異常標(biāo)記染色體來源，普通顯帶無法辨別的情況下進(jìn)行核型分析，染色體描繪技術(shù)有它獨(dú)特的優(yōu)越性

目前對(duì)癌基因的分子診斷方法很多，以經(jīng)典的癌基因--ras基因?yàn)槔?，可以利用PCR-SSCP、DGGE、PCR-ASO和測(cè)序技術(shù)、Southern印跡法、Northern印跡法及Western印跡等方法進(jìn)行檢測(cè)。迄今為止，雖然已發(fā)現(xiàn)了近100種癌基因和腫瘤發(fā)生、發(fā)展有關(guān)，但僅有少數(shù)幾種癌基因及其編碼的癌蛋自可在血清中檢出。

（一）ras基因

ras族基因編碼酪氨酸激酶，位于人類1號(hào)染色體短臂，它的表達(dá)產(chǎn)物為p21蛋白，由K-ras、H-ras和N-ras組成，在DNA水平上三者高度同源，均有4個(gè)外顯子，相互間同源性達(dá)85%。當(dāng)ras基因的第12位、第13位、第61位堿基發(fā)生點(diǎn)突變，編碼產(chǎn)物發(fā)生變化，這是癌癥形成的關(guān)鍵一步，又稱啟動(dòng)基因。臨床上，ras基因突變多見于神經(jīng)母細(xì)胞瘤、膀胱癌、急性白血病、消化道腫瘤、乳腺癌，在上述疾病時(shí)ras基因突變后的表達(dá)產(chǎn)物p21蛋白增加，并且和腫瘤的浸潤(rùn)度、轉(zhuǎn)移相關(guān)，在腫瘤患者ras基因的突變率約在15%~20%。也有研究指出p21在良惡性之間無鑒別價(jià)值。如胃良性病變-腸化和異型增生上皮中ras的陽性率與胃癌組織陽性率無顯著差異。

（二）myc基因

myc基因是從白血病病毒中發(fā)現(xiàn)的，它和轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)有關(guān)，其表達(dá)蛋白是的磷酸蛋白p42，myc基因和DNA合成、細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)錄、細(xì)胞分化相關(guān)，尤其在G1期和S期myc表達(dá)最強(qiáng)。最早人們?cè)贐、T淋巴細(xì)胞瘤、肉瘤、內(nèi)皮瘤病發(fā)現(xiàn)。myc基因的激活，以后又發(fā)現(xiàn)小細(xì)胞肺癌、幼兒神經(jīng)母細(xì)胞瘤的臨床進(jìn)展和myc基因表達(dá)擴(kuò)增有關(guān)，而且多見于轉(zhuǎn)移的腫瘤組織，目前myc基因蛋白標(biāo)志物主要用于判斷腫瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。

（三）erbB2基因

erbB3-2基因又稱HER-2/neu基因，屬于src癌基因家族，和表皮生長(zhǎng)因子受體（EGFR）同源，在結(jié)構(gòu)和功能上都和EGFR相似，能激活酪氨酸激酶。表達(dá)蛋白為p185。erbB-2基因通過基因擴(kuò)增而激活，它多見于乳腺癌（Paget病）、卵巢癌和胃腸道腫瘤。雖然erbB-2基因蛋白在診斷乳腺癌中陽性率不高，僅25%~30%，但它在乳腺癌診斷中特別有價(jià)值，它和腫瘤的大小、雌激素受休、孕酮受體一樣可判斷患者的預(yù)后，其準(zhǔn)確性只比轉(zhuǎn)移導(dǎo)致的淋巴結(jié)數(shù)目略差，在乳腺癌診斷中被看做一個(gè)獨(dú)立的指標(biāo)。erbB-2基因蛋白增加患者預(yù)后較差，極易復(fù)發(fā)，存活期短。

（四）bcl基因蛋白

bcl基因是在造血系統(tǒng)腫瘤中首先發(fā)現(xiàn)的一個(gè)癌基因，位于18號(hào)染色體長(zhǎng)臂，通過抑制細(xì)胞死亡而參與腫瘤的發(fā)生。除正常造血組織外，bcl基因主要分布在腺上皮、外分泌腺體的導(dǎo)管細(xì)胞和增殖細(xì)胞上。bcl基因在各類淋巴瘤、腎臟腫瘤、急慢性白血病、霍奇金淋巴瘤、乳腺癌和甲狀腺髓樣癌等病中均可呈陽性。

抑癌基因的缺失或者點(diǎn)突變也見于大多數(shù)人類腫瘤，如肺癌、胃癌、乳腺癌、結(jié)腸癌、肝癌等。抑癌基因的檢測(cè)方法與癌基因分子診斷方法類似。

p53基因是一種抑癌基因，通過控制細(xì)胞進(jìn)入S期，控制細(xì)胞分化，監(jiān)視細(xì)胞基因組的完整性，阻止具有癌變傾向的基因突變的發(fā)生。野生型的p53基因突變使這一控制作用消失，誘發(fā)腫瘤。許多腫瘤與p53抑癌基因異常有關(guān)，p53基因的點(diǎn)突變常見第175、248、273位的堿基對(duì)變異，而在肝癌細(xì)胞中p53基因第249位的堿基對(duì)由鳥嘌呤變成胸腺嘧啶。突變的p53蛋白半壽期較長(zhǎng)，因而在大部分腫瘤患者中都可測(cè)到突變的p53蛋白，尤其是乳腺癌、胃腸道腫瘤、肝細(xì)胞癌及呼吸道腫瘤，陽性率為15%~50%。

除了癌基因和抑癌基因，腫瘤相關(guān)基因中還有兩類關(guān)系密切的基因，即腫瘤轉(zhuǎn)移基因和腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基囚，它們也可以用于腫瘤的分子診斷，尤其是判斷腫瘤有無轉(zhuǎn)移，對(duì)臨床治療很有幫助。目前研究較多的一種腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因是nm23，到目前為止，nm23已經(jīng)在胃癌、骨肉瘤、膀胱癌、乳腺癌、腸癌等具有轉(zhuǎn)移潛能的腫瘤中呈現(xiàn)低表達(dá)，在大腸癌中nm23低表達(dá)與腫瘤狀態(tài)和遠(yuǎn)距轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，因此，可以依據(jù)nm23的表達(dá)程度判斷腫瘤有無轉(zhuǎn)移，1991年國(guó)外已經(jīng)將其列為腫瘤分子診斷的常規(guī)檢測(cè)項(xiàng)目。

流行病學(xué)調(diào)查和分子生物學(xué)研究表明，病毒與人類腫瘤之間確實(shí)存在著密切的關(guān)系，如肝炎病毒（HBV、HCV）與肝細(xì)胞癌，EB病毒與鼻咽癌。人乳頭瘤病毒與子宮頸癌，人類T細(xì)胞白血病/淋巴瘤病毒Ⅰ型（ HTLV-Ⅰ）與成人T細(xì)胞白血病/淋巴瘤有直接關(guān)聯(lián)。因此，如果利用分子診斷的方法，如雜交、PCR等方法檢測(cè)這些腫瘤相關(guān)病毒的基因，就可以為某些腫瘤的診斷提供參考依據(jù)。如用PCR方法擴(kuò)增HPV病毒基因E6和E7開放讀框上特異的230~270bp基因片段，可早期診斷HPV-16、HPV-18的感染，對(duì)早期預(yù)防和診斷子宮頸癌有重大意義。

鑒于化學(xué)致癌物存在的廣泛性以及預(yù)防腫瘤發(fā)生的可能性，各國(guó)采取一定的法規(guī)來控制化學(xué)致癌物散播，因而產(chǎn)生了化學(xué)致癌物的體外檢測(cè)。早年，為了證實(shí)某一物質(zhì)的致癌性，常需要進(jìn)行“三致”試驗(yàn)，即致突變、致畸變、致癌試驗(yàn)。致突變?cè)囼?yàn)花費(fèi)少、需時(shí)短；而慢性動(dòng)物致畸變?cè)囼?yàn)、致癌試驗(yàn)結(jié)果可靠，但費(fèi)時(shí)、費(fèi)力、費(fèi)錢，不宜用于初篩。后來發(fā)現(xiàn)，致癌物大多是致突變物，故對(duì)化學(xué)致癌物的體外檢測(cè)先做致突變?cè)囼?yàn)用于初篩，亦可用一組試驗(yàn)相互引證。初篩試驗(yàn)陰性者可以不必進(jìn)行致畸變、致癌試驗(yàn)；陽性者再進(jìn)行致畸變、致癌試驗(yàn)。國(guó)家規(guī)定對(duì)新藥、食品添加劑、化妝品、飲料等需要進(jìn)行“三致”試驗(yàn)，以確保使用的安全性。常用的致突變?cè)囼?yàn)有3種：

（一）艾姆斯試驗(yàn)

艾姆斯試驗(yàn)（Ames test）。又稱鼠傷寒沙門菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)。常用幾個(gè)組氨酸缺陷型突變鼠傷寒沙門菌株，在檢測(cè)系統(tǒng)中還包括大鼠的肝臟微粒體活化系統(tǒng)，其中的微粒體酶S9能使一些前誘變劑轉(zhuǎn)變?yōu)檎T變劑。雖然在這里測(cè)試對(duì)象是細(xì)菌而不是哺乳動(dòng)物，但是由于這一檢測(cè)系統(tǒng)簡(jiǎn)便易行、靈敏度較高，所以常用來作為誘變物質(zhì)檢測(cè)初步篩選的短期測(cè)試系統(tǒng)，用這種方法已經(jīng)對(duì)幾百種物質(zhì)進(jìn)行了測(cè)試，發(fā)現(xiàn)大約90%的致癌物質(zhì)具有誘變作用。Ames試驗(yàn)的特點(diǎn)為：①均有組氨酸基因缺陷，不能產(chǎn)生組氨酸為其本身的營(yíng)養(yǎng)，因而在培養(yǎng)基中需加入組氨酸，該菌才能生長(zhǎng)，這是該細(xì)菌突變的結(jié)果；②亦有切除修復(fù)基因的缺失菌，因而突變后不易修復(fù)；③有堿基置換型突變株（TA97，TA100）與移碼型突變株（TA98，TA102），可觀察突變的類型；④若在試驗(yàn)中這些突變株在無組氨酸的培養(yǎng)基中培養(yǎng)時(shí)有大量菌落生成，說明致突變物使細(xì)菌發(fā)生了回復(fù)突變，亦即表明待測(cè)物為致突變物。

Ames試驗(yàn)的檢測(cè)方法：將待測(cè)物，經(jīng)或不經(jīng)肝微粒體酶S9處理，加在缺組氨酸的培養(yǎng)基上，觀察組氨酸缺陷型突變鼠傷寒沙門菌菌落生長(zhǎng)的結(jié)果，可以測(cè)出：①被測(cè)物有無致突作用；②若有，是直接致突變物，還是間接致突變物；③觀察致突變作用的強(qiáng)弱。

（二）哺乳動(dòng)物培養(yǎng)細(xì)胞染色體畸變?cè)囼?yàn)

染色體畸變?cè)囼?yàn)是取哺乳動(dòng)物原代細(xì)胞（人血淋巴細(xì)胞）或傳代細(xì)胞（中國(guó)倉(cāng)鼠細(xì)胞，CHO），培養(yǎng)中加入已經(jīng)或未經(jīng)S9處理的被檢物，兩者共孵育24小時(shí)，加秋水仙堿進(jìn)行染色體分析。觀察染色體數(shù)目（非整倍體、多倍體、內(nèi)復(fù)制）與結(jié)構(gòu)的變化（各種染色體畸變）。若出現(xiàn)染色體畸變，說明該物具有致突變性。

（三）微核試驗(yàn)

微核試驗(yàn)是哺乳動(dòng)物骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核試驗(yàn)的簡(jiǎn)稱，它是一種體內(nèi)試驗(yàn)。將被檢物以一定濃度注入小鼠，在1天、2天、3天后殺死小鼠，取其股骨骨髓進(jìn)行涂片，吉姆薩染色，觀察并計(jì)數(shù)1000個(gè)嗜多染紅細(xì)胞內(nèi)微核的百分?jǐn)?shù)。微核的出現(xiàn)或增多常意味著染色體的損傷，說明有致突性。

應(yīng)該指出，致突變?cè)囼?yàn)僅是一種初步探查，雖然約有84%的致癌物為致突變物，有一定的指導(dǎo)意義，但亦不可忘記有相當(dāng)部分非致癌物有致突變作用，所以若致突變?cè)囼?yàn)陽性，應(yīng)采用多種方法反復(fù)驗(yàn)證，或進(jìn)行致畸變、致癌試驗(yàn)。在確定了某一化學(xué)物質(zhì)的致突性，甚至動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)其致癌性以后，要確切了解其對(duì)人體的致癌性及其機(jī)制，目前常用分子流行病學(xué)的方法檢測(cè)人體內(nèi)致癌物的衍生物。肝癌是世界上最常見的惡性腫瘤之一，其主要病因與當(dāng)?shù)豀BV感染、食用被黃曲霉毒素污染的玉米有關(guān)。例如在中國(guó)江蘇啟東，檢測(cè)當(dāng)?shù)攸S曲霉毒素B1（AFB1），確認(rèn)它是Ames試驗(yàn)陽性，能使培養(yǎng)細(xì)胞發(fā)生染色體畸變、微核試驗(yàn)亦為陽性、在多種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中能誘發(fā)肝癌，但為了確定其對(duì)人體肝癌的引瘤作用及其與暴露劑量的關(guān)系，研究了該地區(qū)人群尿中AFB1-鳥嘌呤加合物的濃度，發(fā)現(xiàn)尿中AFB1-鳥嘌呤加合物的水平隨地區(qū)不同而不同。與當(dāng)?shù)仫嬍持袑?duì)AFB1的暴露量相一致，且與肝癌的發(fā)現(xiàn)率密切相關(guān)。這些研究對(duì)化學(xué)致癌的機(jī)制具有重要的意義。在體外試驗(yàn)、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和人體研究中，AFB1引起的突變譜亦是一致的。AFB1誘發(fā)的特異性堿基改變使這種轉(zhuǎn)換可在暴露于AFB1的人肝細(xì)胞培養(yǎng)的p53中檢測(cè)到，常見的是第249位密碼子的突變。在同一地區(qū)人類肝癌中一突變多見p53的第249位密碼子的G∶C→T∶A轉(zhuǎn)換。居住在該AFB1污染區(qū)的人群非癌患者正常肝臟的這一突變數(shù)亦增加。

1.循環(huán)腫瘤細(xì)胞

腫瘤的分子診斷包括腫瘤標(biāo)志物基因的檢測(cè)，mRNA、miRNA的檢測(cè)和蛋白質(zhì)的檢測(cè)。對(duì)于腫瘤標(biāo)志物基因，可以針對(duì)其保守序列，利用核酸探針雜交、PCR-SSCP、DGGE、PCR-ASO、DNA序列測(cè)定和基因芯片技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)；對(duì)于mRNA和miRNA的檢測(cè)可以利RT-PCR、熒光定量PCR、斑點(diǎn)雜交等方法進(jìn)行檢測(cè)；對(duì)于蛋白質(zhì)的檢測(cè)，可以利用Western印跡、流式細(xì)胞術(shù)、免疫組織化學(xué)和蛋白質(zhì)芯片技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)。腫瘤的分子診斷標(biāo)本包括體液和腫瘤組織等，其中血液中的循環(huán)腫瘤細(xì)胞（CTC）檢測(cè)可用于腫瘤的體外早期診斷、化療藥物的快速評(píng)估，個(gè)體化治療的臨床篩藥、耐藥性檢測(cè)，腫瘤復(fù)發(fā)的監(jiān)測(cè)以及腫瘤新藥的開發(fā)等，另外通過檢測(cè)循環(huán)腫瘤細(xì)胞的數(shù)量，可以診斷腫瘤，評(píng)估疾病的進(jìn)程、轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)、治療效果。

通常把進(jìn)入人體外周血的腫瘤細(xì)胞稱為CTC。由于CTC同其他血細(xì)胞相比并沒有顯著的特異性，而且不同組織學(xué)類型和分子表型的腫瘤分別表達(dá)不同的標(biāo)志物，再者CTC在外周血中數(shù)量稀少，一般在106~107個(gè)白細(xì)胞中僅含有1個(gè)CTC；因此對(duì)于CTC的檢測(cè)和分析通常都包括富集和檢測(cè)兩個(gè)步驟。富集的方法之一是根據(jù)形態(tài)學(xué)標(biāo)準(zhǔn)，如細(xì)胞的大小、密度等不同將其分離，如采用密度梯度離心法；而另一種方法則是根據(jù)目的細(xì)胞上帶有可用于免疫學(xué)分離的特異性標(biāo)志物將其分離，常用的是免疫磁珠法。細(xì)胞富集結(jié)束后?；诩?xì)胞計(jì)數(shù)的方法或基于核酸的技術(shù)通過公認(rèn)的腫瘤特異性標(biāo)志物對(duì)CTC進(jìn)行檢測(cè)和分析?；诩?xì)胞計(jì)數(shù)檢測(cè)CTC的方法是根據(jù)細(xì)胞的抗原表達(dá)分離和計(jì)數(shù)CTC，使用諸如抗上皮特異性抗原的抗體；它相對(duì)于核酸分析的方法，優(yōu)勢(shì)在于目的細(xì)胞未被破壞，能進(jìn)一步分析其細(xì)胞形態(tài)學(xué)和分子學(xué)特性；不足之處是缺乏腫瘤特異性抗體。目前比較常用的細(xì)胞角蛋白（CK）抗體能與巨噬細(xì)胞、漿細(xì)胞以及有核造血細(xì)胞前體特異或非特異結(jié)合。多種標(biāo)志物聯(lián)合使用能有效提高檢測(cè)的敏感性和特異性。在對(duì)結(jié)直腸癌的研究中，采用流式細(xì)胞術(shù)（FCM）可從每7.5ml外周血中檢出2個(gè)CTC，并發(fā)現(xiàn)CTC的數(shù)量與腫瘤分期相關(guān)。光導(dǎo)纖維陣列掃描技術(shù)（FAST）能從大量免疫熒光染色的單核細(xì)胞中找出CTC，與常規(guī)顯微鏡相比，避免了純化和富集步驟造成的CTC丟失。這一技術(shù)在結(jié)直腸癌以及乳腺癌的細(xì)胞系摻加試驗(yàn)中平均的敏感性達(dá)到了98%。雷射掃描細(xì)胞計(jì)數(shù)器（LSC）提高了掃描熒光染色細(xì)胞的有效率。自動(dòng)細(xì)胞顯像系統(tǒng)（ACIS）是一種能更快檢測(cè)載玻片的自動(dòng)掃描顯微鏡，多種其他的自動(dòng)掃描系統(tǒng)在這一免疫細(xì)胞化學(xué)的檢測(cè)中被聯(lián)合應(yīng)用并被證實(shí)具有非常好的協(xié)同性?；诤怂釞z測(cè)CTC的方法是通過檢測(cè)腫瘤細(xì)胞特異的遺傳學(xué)改變來加以確認(rèn)。DNA的改變，如原癌基因、腫瘤抑制基因的突變，微衛(wèi)星不穩(wěn)定性以及致瘤病毒序列均可被用于檢測(cè)。CTC與腫瘤轉(zhuǎn)移關(guān)系密切，隨著腫瘤特異性標(biāo)志物的發(fā)現(xiàn)以及檢測(cè)手段敏感性與特異性的提高，CTC的檢測(cè)將具有巨大的潛在臨床應(yīng)用價(jià)值。

應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)。

2.血漿腫瘤游離DNA

健康人外周血游離DNA大多來源于血細(xì)胞，而腫瘤患者外周血游離DNA主要來源于腫瘤細(xì)胞。許多研究人員也證實(shí)了在腫瘤患者血漿中游離DNA含量較正常人群增高的現(xiàn)象。盡管關(guān)于腫瘤患者外周血游離DNA的來源還未完全了解，但其增加可能與腫瘤細(xì)胞壞死或凋亡、循環(huán)腫瘤細(xì)胞及微轉(zhuǎn)移灶有關(guān)。

腫瘤患者血漿中游離DNA的改變包括了DNA含量改變、基因突變、表觀遺傳學(xué)改變、雜合性缺失、DNA完整性改變及病毒DNA出現(xiàn)等。目前主要采用的檢測(cè)方法有熒光定量PCR、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)、DNA測(cè)序技術(shù)等。但由于檢測(cè)方法的原理及敏感性不同，各報(bào)道結(jié)果差異較大。尋找特異性、敏感性更高的檢測(cè)方法對(duì)腫瘤循環(huán)游離DNA的研究有重要的意義。

3.微RNA

微RNA （miRNA）是一類普遍存在于細(xì)胞中的長(zhǎng)度為18~25nt核苷酸的非編碼單鏈小分子RNA。miRNA在基因轉(zhuǎn)錄后水平上通過與靶mRNA互補(bǔ)結(jié)合，抑制mRNA的翻譯或降解mRNA，發(fā)揮對(duì)約30%人類蛋白的表達(dá)調(diào)節(jié)作用。在腫瘤發(fā)生和發(fā)展中，miRNA表達(dá)蛋白質(zhì)譜發(fā)生改變，抑制腫瘤的miRNA （TSmiRs）表達(dá)減少，而促進(jìn)腫瘤的miRNA（oncomiRs）表達(dá)增加。miRNA既可能發(fā)揮致癌基因的作用，也可能發(fā)揮抑癌基因的作用，miRNA的變化是腫瘤發(fā)生的早期事件，為此認(rèn)為，miRNA在多種疾病，特別是腫瘤疾病的診斷中可作為一類生物標(biāo)志物。目前研究報(bào)道，促進(jìn)腫瘤的miRNA，即發(fā)揮癌基因作用的miRNA，如結(jié)直腸癌中miR-17-92家族成員.具有促進(jìn)細(xì)胞增殖、抑制凋亡、導(dǎo)致腫瘤發(fā)生并惡化的作用；肝癌組織中miR-21、miR-18、miR-9等呈現(xiàn)高表達(dá)；發(fā)揮抑癌基因作用的miRNA，如結(jié)直腸癌中miR-143、miR-145，呈低表達(dá)；肝癌組織中抑制腫瘤的miRNA有miR-16、miR-122、miR-195等，分析和檢測(cè)這些miRNA表達(dá)譜的差異，對(duì)腫瘤的分子診斷、分期、轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)和預(yù)測(cè)具有重要臨床意義。

miRNA的檢測(cè)多采用miRNA芯片和熒光定量PCR法。標(biāo)本可用新鮮組織、石蠟包埋組織或于血清或血漿標(biāo)本中提取。