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一種治療急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的藥物的制作方法 【專利摘要】本發(fā)明屬于藥品及其制備【技術(shù)領(lǐng)域】，涉及一種治療急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的藥物，藥物組份的重量百分比為：白藜蘆醇90～95%；藻酸鈉3～5%；淀粉2～3%；將上述三種原料混合均勻按常規(guī)的公知工藝方法制成片狀或粉狀產(chǎn)品，再加工成形即可；其組份簡(jiǎn)單，加工成本低，療效明顯，安全可靠。 【專利說明】一種治療急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的藥物 【技術(shù)領(lǐng)域】: [0001]本發(fā)明屬于藥品及其制備【技術(shù)領(lǐng)域】，涉及一種以白藜蘆醇為主要原料治療急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的藥物 。 【背景技術(shù)】: [0002]痛風(fēng)(GOUT)是一種與遺傳有關(guān)的長(zhǎng)期嘌呤代謝障礙或尿酸排泄障礙，導(dǎo)致血尿酸持續(xù)增高和尿酸鹽結(jié)晶沉積，引起組織損傷的一組臨床綜合征。痛風(fēng)病臨床特點(diǎn)是高尿酸血癥，以及由此引起的痛風(fēng)性急性關(guān)節(jié)炎反復(fù)發(fā)作、痛風(fēng)石沉積、痛風(fēng)石慢性關(guān)節(jié)炎和關(guān)節(jié)畸形，常累及腎臟引起慢性間質(zhì)性腎炎和尿酸腎結(jié)石形成。隨著人們生活方式的改變，痛風(fēng)患病率有明顯上升趨勢(shì)，痛風(fēng)在我國(guó)發(fā)病率不斷上升，南方和沿海經(jīng)濟(jì)發(fā)達(dá)地區(qū)發(fā)病率尤高，因此越來越受到醫(yī)學(xué)界的重視。痛風(fēng)不僅能引起關(guān)節(jié)腫脹，而且可誘發(fā)和加重脂代謝紊亂、糖尿病及心血管疾病等，增加心腦血管疾病、代謝綜合征及腎臟疾病病人的病死率。因此，痛風(fēng)已成為嚴(yán)重威脅人類健康的常見病、多發(fā)病。目前，秋水仙堿是臨床常用治療痛風(fēng)的藥物，但其副作用(如惡心、嘔吐、水樣腹瀉、肝細(xì)胞損傷、骨髓抑制、脫發(fā)和腎衰竭等)使臨床應(yīng)用受到一定限制。非甾體抗炎藥、腎上腺糖皮質(zhì)激素及別嘌呤醇等的副反應(yīng)也較為明顯，如可引起發(fā)熱、過敏性皮疹、腹痛、腹瀉、白細(xì)胞及血小板減少，甚而肝腎功能損害等。而對(duì)高尿酸血癥和痛風(fēng)采取中西醫(yī)結(jié)合治療可使我國(guó)傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)和西方先進(jìn)醫(yī)療技術(shù)互為補(bǔ)充，達(dá)到標(biāo)本兼治的目的越來越受到人們的重視。現(xiàn)有技術(shù)的中藥治療痛風(fēng)主要分為內(nèi)服和外敷，內(nèi)服藥物大多以虎杖、牛膝、防風(fēng)、土茯苓、蒼術(shù)、羌活等為主要通過祛風(fēng)除濕治療痛風(fēng)；外敷藥物大多以黃柏、生大黃、生半夏、乳香、沒藥等為主組方通過清熱解毒、活血化瘀達(dá)到治療痛風(fēng)的目的。但大多研究集中在抗炎、鎮(zhèn)痛、對(duì)急性痛風(fēng)動(dòng)物模型的治療作用等方面，深入的分子學(xué)和機(jī)制研究較少，故急需療效確切、作用機(jī)制明確、安全性高的藥物應(yīng)用于臨床。在已公開的文獻(xiàn)中有記載，已研究發(fā)現(xiàn)白藜蘆醇具有抗氧化、抗菌消炎、抗血小板聚集，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡、抗腫瘤等活性，但其在急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎中的應(yīng)用還未見報(bào)道。 【發(fā)明內(nèi)容】 : [0003]本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)存在的缺點(diǎn)，尋求設(shè)計(jì)提供一種治療急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的新藥物，該組合藥物以白藜蘆醇為核心原料，輔助其他成份組合混合藥物，具有治療痛風(fēng)的作用，可抑制局部滑膜組織炎癥浸潤(rùn)和增生，抑制關(guān)節(jié)液及血清中IL-1 β、CCR5、CXCLlO的分泌，減少關(guān)節(jié)滑膜中NF-κ B ρ65的表達(dá)，從而達(dá)到治療急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的效 果O [0004]為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明涉及的藥物組份的重量百分比為:白藜蘆醇90~95% ；藻酸鈉3~5% ;淀粉2~3% ;將上述三種原料混合均勻按常規(guī)的公知工藝方法制成片狀或粉狀產(chǎn)品，再加工成形即可。 [0005]本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，選用白藜蘆醇為主要原料，輔料可減少副作用，制成治療痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的藥物，其組份簡(jiǎn)單，加工成本低，療效明顯，安全可靠。 【專利附圖】 【附圖說明】: [0006]圖1為本發(fā)明對(duì)各組大鼠關(guān)節(jié)滑膜HE染色圖片，其中，A為空白對(duì)照組，B為陰性對(duì)照組，C為秋水仙堿組，D為白藜蘆醇低劑量組，E為白藜蘆醇中劑量組，F(xiàn)為白藜蘆醇高劑量組。 [0007]圖2為本發(fā)明對(duì)各組大鼠血清中IL-1 β水平示意圖。 [0008]圖3為本發(fā)明對(duì)各組大鼠血清中CCR5水平示意圖。 [0009]圖4為本發(fā)明對(duì)各組大鼠血清中CXCLlO水平示意圖。 [0010]圖5為本發(fā)明對(duì)各組大鼠關(guān)節(jié)液中IL-1 β、CCR5水平示意圖。 [0011]圖6為本發(fā)明對(duì)各組大鼠關(guān)節(jié)液中CXCLlO水平示意圖。 [0012]圖7為本發(fā)明對(duì)各組大鼠關(guān)節(jié)腫脹度變化趨勢(shì)示意圖。 [0013]圖8為本發(fā)明對(duì)各組大鼠關(guān)節(jié)滑膜NF-K B p65的表達(dá)示意圖。 【具體實(shí)施方式】: [0014]下面通過實(shí)施例并結(jié)合附圖作進(jìn)一步說明。 [0015]實(shí)施例1: [0016]本實(shí)施例涉及的藥物組份及各組份的重量百分比為:白藜蘆醇90~95% ;藻酸鈉3~5% ;淀粉2~3% ;將上述三種原料混合均勻按常規(guī)的工藝技術(shù)制成片狀或粉狀產(chǎn)品，再加工成形即可。 [0017]本實(shí)施例為急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的治療提供了一種新藥物，并證實(shí)白藜蘆醇的一種新用途，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中白藜蘆醇低劑量組的劑量為250mg/kg，白藜蘆醇中劑量組的劑量為500mg/kg,白藜蘆醇高劑量組的劑量為1000mg/kg [0018]實(shí)施例2: [0019]本實(shí)施例使用實(shí)施例1的藥物對(duì)治療痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎進(jìn)行實(shí)驗(yàn): [0020](I)、實(shí)驗(yàn)分組與給藥:60只大鼠隨機(jī)分為6組，每組10只，常規(guī)飼養(yǎng)一周，灌胃前稱取體質(zhì)量，按體質(zhì)量確定給藥劑量空白對(duì)照組、陰性對(duì)照組生理鹽水灌胃，秋水仙堿組秋水仙堿Img.kg—1.cT1，白藜蘆醇高、中、低劑量組分別為白藜蘆醇1000、500、250mg.kg-1.cf1 ； [0021](2)、尿酸鈉溶液的制備:取194ml蒸餾水加6mlNa0H(lN)，煮沸后加Ig尿酸，用IN HCL調(diào)pH至7.2，攪拌冷卻，儲(chǔ)存于4°C冰箱中24h，去上清液，用濾紙過濾沉淀物，將沉淀物自然干燥即可得到尿酸鈉結(jié)晶，用孔徑250um的金屬網(wǎng)篩過篩；實(shí)驗(yàn)前尿酸鈉結(jié)晶180°C 3h，然后用體積分?jǐn)?shù)95%乙醇洗滌，2000r/min離心15min3次，室溫自然干燥，取250mg尿酸鈉晶體加9ml生理鹽水，Iml吐溫80,加熱攪拌,配成10ml25mg/ml尿酸鈉溶液； [0022](3)、造模方法:灌胃第4天(造模前)再次稱取體質(zhì)量，灌胃后Ih用縛線法測(cè)取右側(cè)踝關(guān)節(jié)周徑(取均值)，然后制備急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎模型。陰性對(duì)照組、秋水仙堿組和白藜蘆醇低、中、高劑量組大鼠均用75%酒精消毒右側(cè)踝關(guān)節(jié)，麻醉后用6號(hào)注射針在受試大鼠右側(cè)踝關(guān)節(jié)背側(cè)從45度方向插入脛骨肌腱內(nèi)側(cè)，將質(zhì)量濃度為25mg/ml (0.05ml)的尿酸鈉溶液注入踝關(guān)節(jié)腔，伸曲、旋轉(zhuǎn)運(yùn)動(dòng)lOmin，空白對(duì)照組大鼠關(guān)節(jié)腔注射0.05ml生理鹽水； [0023](4)、觀察指標(biāo)及檢測(cè)指標(biāo):先觀察大鼠活動(dòng)、進(jìn)食、精神情況，其關(guān)節(jié)腫脹度:用縛線法測(cè)定造模前及造模后0、l、2、3、4、5、6、24、48、72h右側(cè)踝關(guān)節(jié)同一部位周徑(取均值)，計(jì)算關(guān)節(jié)腫脹度，關(guān)節(jié)腫脹度=(測(cè)試時(shí)間點(diǎn)周徑一初始周徑)/初始周徑；再檢測(cè)指標(biāo)，血清中IL-β、CCR5、CXC L10水平:造模后2、9、24、48、72h內(nèi)眥取血，靜置4h后，3000r/min離心15min離心后，取上清液雙夾心酶免法檢測(cè)IL-β、CCR5、CXCLlO ;關(guān)節(jié)液中IL-1 β、CCR5、CXCLlO水平:造模72h后，麻醉狀態(tài)下，用500ul的無菌生理鹽水沖洗大鼠右側(cè)踝關(guān)節(jié)腔，收集沖洗液，3000r/min離心15min離心后，取上清液雙夾心酶免法檢測(cè)IL-β、CCR5、CXCLlO ；NF- κ B p65表達(dá):冰浴中勻漿關(guān)節(jié)滑膜組織，提取蛋白，并以BCA法測(cè)定白蛋白濃度。進(jìn)行12%SDS-PAGE電泳后轉(zhuǎn)至PVDF膜上，用5%脫脂奶粉封閉2h，然后與相應(yīng)抗體NF-kB p65和β -actin孵育，4°C過夜，次日PBST、PBS洗膜后與相應(yīng)二抗孵育Ih，電化學(xué)發(fā)光試劑(ECL)顯影,應(yīng)用Quantity One軟件分析目標(biāo)蛋白與內(nèi)參β-actin蛋白灰度值，計(jì)算相對(duì)灰度值，進(jìn)行組間比較；然后進(jìn)行病理切片，踝關(guān)節(jié)滑膜病理切片:造模72h后，麻醉大鼠，取右側(cè)踝關(guān)節(jié)滑膜，置于10%中性福爾馬林溶液固定，5%的硝酸脫鈣，常規(guī)脫水，透明、包埋、切片和蘇木素-伊紅染色，光鏡下觀察局部病理組織學(xué)變化。 [0024]實(shí)施例3: [0025]本實(shí)施例對(duì)藥物治療痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的結(jié)果進(jìn)行分析: [0026](I)、大鼠一般情況，60只大鼠均進(jìn)入結(jié)果分析，無脫失，造模后，大鼠右側(cè)踝關(guān)節(jié)明顯腫脹伴隨紅、熱表現(xiàn)，有的甚至將腫脹的關(guān)節(jié)抬離地面，大鼠煩躁不安，進(jìn)食進(jìn)水次數(shù)減少，在48、72h時(shí)上述癥狀逐漸減輕，造模后大鼠體重有所下降，但各組之間差異比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義， [0027](2)、各組大鼠關(guān)節(jié)腫脹度變化見表1和圖7，造模后2h造模關(guān)節(jié)出現(xiàn)紅、腫、熱等表現(xiàn)，大鼠活動(dòng)減少，有的大鼠右足不敢接觸地面，造模后腫脹度隨時(shí)間逐漸增長(zhǎng)，以陰性對(duì)照組最明顯，空白對(duì)照組腫脹度變化較緩慢，且恢復(fù)較快，造模24h后，秋水仙堿組、白藜蘆醇低、中、高劑量組關(guān)節(jié)腫脹度明顯低于陰性對(duì)照組(P < 0.05)，造模72h后，各組關(guān)節(jié)腫脹度明顯降低，且各組間的差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義； [0028](3)、各組大鼠血清IL-1 β、CCR5、CXCLlO水平見表2、3、4和圖2、3、4，與陰性對(duì)照組比較，秋水仙堿組、白藜蘆醇低、中、高劑量組2h、9h血清IL-Ιβ的含量明顯下降(P <0.05)，在秋水仙堿組、白藜蘆醇高劑量組24h、48h血清中CCR5的含量顯著低于陰性對(duì)照組(P<0.05)，72h后各組無明顯差異，與陰性對(duì)照組比較，秋水仙堿組、白藜蘆醇中、高劑量組24h、48h、72h血清CXCLlO水平明顯降低； [0029](4)、各組大鼠關(guān)節(jié)液IL-1 β、CCR5、CXCLlO水平見表5、6和圖5、6，與陰性對(duì)照組相比，秋水仙堿組、白藜蘆醇中、高劑量組關(guān)節(jié)液中IL-1 β、CCR5、CXCLlO水平明顯下降(P <0.05)； [0030](5)、ffestern-blot檢測(cè)結(jié)果見表7和圖8,實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎發(fā)病過程中關(guān)節(jié)滑膜NF- κ B p65蛋白表達(dá)明顯增加，白藜蘆醇可抑制關(guān)節(jié)滑膜NF- κ B ρ65的表達(dá)且抑制作用具有劑量依賴性； [0031](6)、白藜蘆醇對(duì)急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎大鼠關(guān)節(jié)滑膜組織病理學(xué)的改變(HE染色，200倍鏡下，見圖1)，陰性對(duì)照組關(guān)節(jié)滑膜病理切片顯示大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，秋水仙堿組、白藜蘆醇低、中、高劑量組炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)減少，其中以白藜蘆醇高劑量組最顯著。 [0032]表1:各組大鼠關(guān)節(jié)腫脹度變化(X土s，n=6) [0033] [0034] 【權(quán)利要求】 1.一種治療急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的藥物，其特征在于藥物組份的重量百分比為:白藜蘆醇90~95% ;藻酸鈉3~5% ;淀粉2~3% ;將上述三種原料混合均勻按常規(guī)的公知工藝方法制成片狀或粉狀產(chǎn)品， 再加工成形即可。 【文檔編號(hào)】A61P19/02GK103536584SQ201310483325 【公開日】2014年1月29日 申請(qǐng)日期:2013年10月16日 優(yōu)先權(quán)日:2013年10月16日 【發(fā)明者】王顏剛, 王鵬 申請(qǐng)人:青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院 |
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