細(xì)胞劃痕是一種簡單易行的檢測細(xì)胞遷移的方法,實(shí)驗(yàn)成本低,操作方便,在一定程度上模擬了體內(nèi)細(xì)胞遷移的過程,是研究細(xì)胞遷移的體外實(shí)驗(yàn)中最簡單的方法。 當(dāng)細(xì)胞長到融合成單層狀態(tài)時(shí),在融合的單層細(xì)胞上人為制造一個(gè)空白區(qū)域,稱為“劃痕”。劃痕邊緣的細(xì)胞會(huì)逐漸進(jìn)入空白區(qū)域使“劃痕”愈合。想必這些大家都很清楚,就不過多闡述,但是作為有多年經(jīng)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)者,在這里也有一些小小的經(jīng)驗(yàn),望與大家分享: 1)劃痕實(shí)驗(yàn)很重要的一個(gè)因素就是鋪板量,不同細(xì)胞的大小不一樣,鋪板量不一樣。就像786-O細(xì)胞比較大,96孔板一般鋪2-3萬細(xì)胞/每孔,第二天細(xì)胞融合度達(dá)到90%以上;而RKO細(xì)胞比較小,96孔板一般需要鋪7-8萬/每孔,第二天細(xì)胞融合度差不多達(dá)到90%左右。所以具體要根據(jù)細(xì)胞大小適當(dāng)調(diào)整,細(xì)胞劃痕鋪板密度一般為70-90%之間。密度過低,增殖因素可能會(huì)影響遷移能力,反之,對(duì)于細(xì)胞狀態(tài)會(huì)有影響,以至于不能保證實(shí)驗(yàn)的客觀真實(shí)性。 2)細(xì)胞的貼壁能力也很重要。有的細(xì)胞貼的不牢,劃痕之后不易清洗,只需輕輕換液即可;而有的細(xì)胞貼壁比較牢固,可以選擇輕輕拍一下,洗去劃掉的細(xì)胞再換液。 3)最后就是時(shí)間點(diǎn)。細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)基本從8h,16h,24h,36h,48h這幾個(gè)時(shí)間點(diǎn)間進(jìn)行選擇,但是具體進(jìn)行的時(shí)間點(diǎn)需要根據(jù)細(xì)胞的遷移能力進(jìn)行調(diào)整; 對(duì)于細(xì)胞的遷移而言,為了保證實(shí)驗(yàn)的客觀真實(shí)性,需要我們對(duì)細(xì)胞的生長特性特別熟悉,可以先安排預(yù)實(shí)驗(yàn),來確定正式實(shí)驗(yàn)的條件,以保證正式實(shí)驗(yàn)順利的進(jìn)行。 |
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