1.Minigene技術(shù)簡(jiǎn)介

可變剪接是調(diào)節(jié)基因表達(dá)和產(chǎn)生蛋白質(zhì)多樣性的重要機(jī)制，是導(dǎo)致真核生物基因和蛋白質(zhì)數(shù)量較大差異的重要原因，Pre-mRNA剪接是真核生物基因表達(dá)的關(guān)鍵步驟，其剪接異常直接影響蛋白的結(jié)構(gòu)和功能。隨著新一代測(cè)序技術(shù)的發(fā)展，大量的潛在致病變異被發(fā)現(xiàn)，根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，大約1/3的致病變異會(huì)導(dǎo)致pre-mRNA剪接異常，且大部分致病變異的臨床意義是未知的。

Minigene技術(shù)是一種研究基因變異對(duì)可變剪接影響的體外功能驗(yàn)證技術(shù)。該技術(shù)通過(guò)將帶有變異基因的外顯子片段的質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)染細(xì)胞后，利用RT-PCR及Sanger測(cè)序檢測(cè)異常mRNA產(chǎn)物，進(jìn)而分析基因變異對(duì)pre-mRNA可變剪接的影響（如內(nèi)含子保留和外顯子切除）。

2.Minigene技術(shù)原理

3.Minigene技術(shù)應(yīng)用案例1

案例1：Minigene技術(shù)驗(yàn)證成人原發(fā)性肌張力障礙THAP1基因突變導(dǎo)致剪切異常

Vemula S R, Xiao J, Zhao Y, et al. A raresequence variant in intron 1 of THAP1 is associated with primary dystonia[J].Molecular Genetics & Genomic Medicine, 2014, 2(3):261-272.

THAP1： c.71 + 9 C>A變異（內(nèi)含子上點(diǎn)突變），造成剪切異常，導(dǎo)致2號(hào)外顯子不完全剪切，3號(hào)外顯子增加，從而影響細(xì)胞生長(zhǎng)周期。

3.Minigene技術(shù)應(yīng)用案例2

案例2：Minigene技術(shù)驗(yàn)證瓜氨酸血癥ASS1基因變異導(dǎo)致可變剪接異常

KimaniJ K, Wei T, Chol K,et al. Functional analysis of novel splicing and missense mutations identifiedin the ASS1,gene in classical citrullinemiapatients[J]. ClinicaChimicaActa,2015, 438:323-329

家族1：ASS1c.174+1G變異（內(nèi)含子上點(diǎn)突變），造成剪切異常，4號(hào)Exon跳躍，生成截短蛋白； c.422T>G變異（外顯子上點(diǎn)突變），造成兩種剪接異常，7號(hào)Exon跳躍和7號(hào)Exon不完全剪切。

3.Minigene技術(shù)應(yīng)用案例3

家族2：ASS1c.773+1G>A變異，造成兩種剪接異常，即11號(hào)Exon跳躍和11號(hào)內(nèi)含子保留，c.793C>T變異未引起異常剪接。

項(xiàng)目周期：6-8周

客戶提供：攜帶檢測(cè)突變的DNA樣本，正常DNA樣本

結(jié)果交付：

（1）構(gòu)建的載體；

（2）實(shí)驗(yàn)報(bào)告：包括實(shí)驗(yàn)步驟，引物序列，測(cè)序峰圖，結(jié)果圖片和分析結(jié)果