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【舊帖整理】miRNA、siRNA、RNA干擾原理,步驟及相關(guān)問(wèn)題總結(jié)

 ypgao 2018-09-25
RNA干擾(RNAi):近年來(lái)的研究表明,將與mRNA對(duì)應(yīng)的正義RNA和反義RNA組成的雙鏈RNA(dsRNA)導(dǎo)入細(xì)胞,可以使mRNA發(fā)生特異性的降解,導(dǎo)致其相應(yīng)的基因沉默。這種轉(zhuǎn)錄后基因沉默機(jī)制(post-transcriptional gene silencing, PTGS)被稱(chēng)為RNA干擾(RNAi)。

MicroRNA(miRNA,微RNA):即為長(zhǎng)度為22nt左右的5′端帶磷酸基團(tuán)、3′端帶羥基的非蛋白編碼的調(diào)控小RNA家族。

小的干涉RNA(siRNA):是在RNA干涉過(guò)程中人工體外合成的小片段RNA,由約20個(gè)堿基對(duì)組成,包括5個(gè)磷酸鹽,2個(gè)核苷和3個(gè)懸臂。

miRNA與siRNA之間有許多相同之處:1.二者的長(zhǎng)度都約在22nt左右。2.二者都依賴(lài)Dicer酶的加工,是Dicer的產(chǎn)物,所以具有Dicer產(chǎn)物的特點(diǎn)。3.二者生成都需要Argonaute家族蛋白存在。4.二者都是RISC組分,所以其功能界限變得不清晰,如二者在介導(dǎo)沉默機(jī)制上有重疊。5.miRNA和siRNA合成都是由雙鏈的RNA或RNA前體形成的。

miRNA與siRNA的不同點(diǎn):1.根本區(qū)別是miRNA是內(nèi)源的,是生物體的固有因素;而siRNA是人工體外合成的,通過(guò)轉(zhuǎn)染進(jìn)入人體內(nèi),是RNA干涉的中間產(chǎn)物。2.結(jié)構(gòu)上,miRNA是單鏈RNA,而siRNA是雙鏈RNA。3.Dicer酶對(duì)二者的加工過(guò)程不同,miRNA是不對(duì)稱(chēng)加工,miRNA僅是剪切pre-miRNA的一個(gè)側(cè)臂,其他部分降解;而siRNA對(duì)稱(chēng)地來(lái)源于雙鏈RNA的前體的兩側(cè)臂。4.在作用位置上,miRNA主要作用于靶標(biāo)基因3′-UTR區(qū),而siRNA可作用于mRNA的任何部位。5.在作用方式上,miRNA可抑制靶標(biāo)基因的翻譯,也可以導(dǎo)致靶標(biāo)基因降解,即在轉(zhuǎn)錄水平后和翻譯水平起作用,而siRNA只能導(dǎo)致靶標(biāo)基因的降解,即為轉(zhuǎn)錄水平后調(diào)控。6.miRNA主要在發(fā)育過(guò)程中起作用,調(diào)節(jié)內(nèi)源基因表達(dá),而siRNA不參與生物生長(zhǎng),是RNAi的產(chǎn)物,原始作用是抑制轉(zhuǎn)座子活性和病毒感染。

miRNA分離\純化\測(cè)序
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siRNA轉(zhuǎn)染陰性對(duì)照http://www.....cn/bbs/post/view?bid=64&id=7151795&sty=1&tpg=1&age=0
供參閱!

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