因此,在日常實驗中,我們應該讀懂小鼠,站在小鼠的角度理解她,在不使她產(chǎn)生痛苦、符合生理特性、減少應激的基礎上操作,就會避免很多不必要的麻煩。下面咱們就從最基礎也最重要的小鼠抓取與固定說起,給大家介紹一下在小鼠實驗中最常接觸到的幾種實用技能(小鼠的抓取與固定;給藥方式),助你以后的實驗得心應手起來! 一、抓取與固定 很多實驗如小鼠給藥,采血等,均需要將小鼠固定住才可進行操作,因此規(guī)范準確地抓取動物是實驗的前提,既能避免動物咬人,也更便于我們實驗操作。對于一般簡單實驗,雙手就是最好的固定的工具。 1. 抓取步驟 ① 右手提起小鼠尾巴,將其放在鼠籠蓋或其他粗糙表面上 ② 小鼠向前掙扎爬行時,再用左手拇指和食指抓住鼠耳和頸部皮膚(如下圖) ③ 小鼠于左手心中后,用左手的無名指和小指夾其背部皮膚和尾部(如下圖) 應用:一些簡單的操作如小鼠灌胃、皮下注射、腹腔注射、肌內(nèi)注射、剪毛等 注意 ①小鼠體型雖小但非常靈活,抓取時避免咬傷一定要又穩(wěn)又準 ② 抓尾巴時,應抓取小鼠尾巴的中部或根部,捏住尾端可能損傷小鼠 ③ 由于小鼠一直在活動,一次沒抓好時要放開重新抓,不要急于下一步操作 2. 固定 進行解剖、手術(shù)、心臟采血和尾靜脈注射等操作時(必要時先行麻醉),需做一定形式的固定。如尾靜脈注射或采血時:如下圖為小鼠固定器和尾靜脈注射。 第一步:打開尾蓋,手提起小鼠尾巴,讓動物頭對準鼠筒口并使其本能的爬入固定器內(nèi); 第二步:調(diào)節(jié)小鼠固定器的長短,留出尾巴即可進行操作。
如果需要解剖或者心臟注射時: ① 麻醉小鼠 ② 處于背臥式后再用大頭針(或者固定膠布)將鼠前后肢依次固定在蠟板上再進行操作。 應用: 對小鼠的解剖、手術(shù)和心臟采血等操作 二、小鼠常用給藥方法 進行藥物治療時,為了達到安全合理用藥,必須根據(jù)治療目的選擇適當?shù)慕o藥途徑。接下來介紹一下常用到的小鼠給藥途徑的操作方式及各自特點。 因藥物性質(zhì)和給藥目的不同,動物實驗中大概分為以下三種給藥方式: 1. 小鼠自動攝入 2. 灌胃 3. 注射給藥(皮內(nèi)注射、皮下注射、肌肉注射、腹腔注射、靜脈注射、腦內(nèi)注射等) 1. 小鼠自動攝入 一般是將藥物摻入飼料或者飲水中,使動物自動攝入 優(yōu)點:操作簡單方便 缺點:劑量不能準確掌握,且動物個體間服藥量差異較大 2. 灌胃 藥物經(jīng)口腔、食管直接送入胃中,要經(jīng)過消化過程才能進入體循環(huán),再到血液發(fā)揮作用。多用于急性試驗中的經(jīng)口給藥法 操作方法 ①抓取小鼠,頭部向上,頭向后仰使口腔和食管呈直線 ②右手持注射器(一般用1ml的注射器配灌胃針頭),從一側(cè)口角進針,沿著上顎推至后頭,以針頭輕壓舌根 ③灌胃針前端順利進入食管后,緩慢推進,插入針時應無阻力; 若感到阻力或動物掙扎時,應立即停止進針或?qū)⑨槹纬?/p> 參考給藥量:小鼠0.1ml/10g體重,最大不超過0.5ml/10g體重 優(yōu)點:劑量準確,是常用,比較安全、方便經(jīng)濟的給藥方法, 缺點:吸收不恒定,誤差較大。如某些藥物因本身的被物理性質(zhì)而不能吸收; 有些藥物對胃粘膜有刺激作用可引起嘔吐;藥物與食物同時存在時,吸收會有影響 3. 注射給藥(通過注射的方式,使藥物吸收) 優(yōu)點:劑量準確,作用快,是動物實驗中常用的給藥方法 缺點:操作比較復雜,安全性較低、風險較大 根據(jù)注射位置分為多種注射方式。為了便于理解,首先了解一下皮膚構(gòu)造, 如下圖:依次是表皮、真皮、皮下組織和肌肉層。 注射給藥中,根據(jù)實驗目的,主要分為以下幾種: 1. 皮內(nèi)注射 將藥物注射于表皮與真皮之間(結(jié)合上圖),緊貼皮膚表層刺入皮內(nèi),針頭與皮膚呈10-15°角先刺入皮下,針頭向上挑起進入皮內(nèi)再稍刺入,推出藥夜,見皮膚表面鼓起小皮丘,若皮丘不很快消失,證明藥液在皮內(nèi)。一般選擇小鼠背部脊柱兩側(cè)皮膚進行注射 特點:適用于皮膚過敏試驗,觀察皮膚反應 參考給藥量:小鼠每次每點不超過0.05ml,兩點間隔1cm以上 2. 皮下注射 將藥物注射于皮下,提起注射部位皮膚使皮下形成空隙,將注射針沿皮膚推進5-10mm,若針頭可輕松左右擺動,表明針頭在皮下,輕輕抽吸無回流物,則可注入藥物,拔出針后應按壓針刺部位,防止藥液外漏和促進藥物吸收,一般選擇小鼠的背部 特點:皮下注射的吸收速率通常均勻而緩慢,因而作用持久;僅適用于對組織無刺激性的藥物,否則可引起劇烈疼痛和組織壞死 參考給藥量:小鼠0.1~0.3ml/10g體重 3. 肌肉注射 將針頭刺入大腿外側(cè)肌肉,注射時垂直迅速刺入肌肉,回抽針栓如無回血,將藥物注入。一般選肌肉發(fā)達,無大血管通過的部位,多選臀部 特點:藥物水溶液肌肉注射時吸收十分迅速,適用于油溶液和某些刺激性物質(zhì) 參考給藥量:小鼠給藥量每次小于0.05-0.1ml 4. 腹腔注射 抓取小鼠,使其腹部朝上頭部略向下垂,抓緊背部皮膚使使腹部皮膚緊繃,于腹中線一側(cè)刺入皮下,在皮下平行腹中線推進針頭3-5mm,再以45°角向腹腔內(nèi)刺入,當針尖通過腹肌后,抵抗力消失,回抽無回流物,緩慢推入藥物。 特點:是很常見的給藥方式,注射劑量大,注射后腹膜能力吸收強;尤其是在麻醉時,最常見的麻醉方法就是麻醉藥物腹腔注射 參考給藥量:每次給藥量小鼠0.2-0.8ml 5. 靜脈注射 小鼠一般采取尾靜脈注射方式,鼠尾靜脈有三根,左右兩側(cè)及背側(cè)各一根,一般選擇左右兩側(cè)尾靜脈,先距尾尖1/3處先緩注少量藥液,如無阻力,表示針頭已進入靜脈,可繼續(xù)注入。 特點:將藥物直接輸入血液,沒有消化過程,藥物直接到達循環(huán)系統(tǒng),藥效迅速可靠。但由于高濃度的藥物迅速到達血漿和組織,增加了發(fā)生不良反應的危險性。反復注射還有賴于持續(xù)保持靜脈通暢。不適用于油溶液或不溶性物質(zhì)。 參考給藥量:0.05ml - 0.1ml/10g 6. 腦內(nèi)注射 一手拇指和食指抓住動物兩耳后的頭皮固定頭部,使注射針頭和額頂顱骨呈45°角,在中線外側(cè)2mm處刺入,注射速度一定要慢,避免引起顱內(nèi)壓急遽升高 特點:多在微生物學動物實驗 參考給藥量:每次低于0.03ml 7. 其他注射 除了上述常見的幾種注射給藥方式外,根據(jù)你的實驗目的,還有其他注射方式,如心室注射等,這里就不在贅述了。 小鼠的固定不僅僅是為了避免我們被咬傷,更是很多實驗操作成功的前提,所以我們一定要熟練掌握。另外,在小鼠的各種給藥方式中尾靜脈注射難度是最大的,相信困擾了很多人,下一期我們將為大家詳細介紹尾靜脈注射秘訣,并附上最全面最專業(yè)的視頻教材,一定不要錯過哦! 模式動物系列(—)小鼠基本信息 1.6 常見小鼠實驗操作技能(小鼠的抓取與固定、給藥方式等) 2. 模式動物系列(二)基因編輯鼠 2.3 sgRNA表達載體構(gòu)建 3. 模式動物系列(三)疾病動物模型 3.5 腫瘤模型之生長、轉(zhuǎn)移及復發(fā)模型 4. 實踐中的實驗動物福利和倫理 4.1 Nature論文險被撤稿,你的動物實驗合乎動物福利和倫理嗎? 5. 小鼠命名規(guī)則 5.3 基因工程鼠命名規(guī)則(下)——轉(zhuǎn)基因小鼠 6. 代謝綜合征動物模型 |
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