益生菌(probiotics)通過(guò)改善宿主微生態(tài)平衡而發(fā)揮益生作用，達(dá)到提高宿主健康水平和健康狀態(tài)的活菌制劑及其代謝產(chǎn)物。存在于動(dòng)物和人體內(nèi)的有益微生物主要有乳酸菌、芽孢桿菌、酵母菌等，其中，丁酸梭菌作為益生菌的一種，對(duì)于減少當(dāng)前飼料中抗生素產(chǎn)品的濫用、減少藥物在肉品中的殘留、降低動(dòng)物細(xì)菌的耐藥性和保障動(dòng)物健康有著重要的意義。因丁酸梭菌具有耐熱、耐酸及耐受多種抗生素等的特點(diǎn)，是一種較理想的具有廣泛開(kāi)發(fā)前景的益生菌制劑。

　　目前對(duì)丁酸梭菌的作用機(jī)制、培養(yǎng)條件和在畜禽生產(chǎn)中的應(yīng)用研究的已非常廣泛，但幾乎都采用液體培養(yǎng)的方法。與液態(tài)培養(yǎng)相比，固態(tài)培養(yǎng)具有成本低、操作簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)。同時(shí)液態(tài)培養(yǎng)時(shí)生長(zhǎng)量總是不能滿(mǎn)足生產(chǎn)需要，且畜禽腸道菌所生存的環(huán)境本身為固態(tài)或半固態(tài)環(huán)境，因此本試驗(yàn)選用價(jià)格較為低廉的農(nóng)副產(chǎn)品豆粕、麩皮等為原料，對(duì)丁酸梭菌進(jìn)行固態(tài)培養(yǎng)研究。

　　1 材料與方法

　　1.1 菌種與培養(yǎng)基

　　菌種：丁酸梭菌(Clostridium butyricum)為山東寶來(lái)利來(lái)生物菌種保藏中心保存。

　　丁酸梭菌液體種子培養(yǎng)基：各物質(zhì)按質(zhì)量分?jǐn)?shù)計(jì)為葡萄糖2%、牛肉膏1.5%、蛋白胨2%、碳酸鈣1%、七水硫酸鎂0.02%、一水硫酸錳0.02%。調(diào)整pH為7.0，37 ℃靜止培養(yǎng)24小時(shí)，芽孢率95%以上。固體培養(yǎng)基加瓊脂粉1.5%。

　　1.2 方法

　　1.2.1 丁酸梭菌的固體發(fā)酵培養(yǎng)

　　從丁酸梭菌斜面中挑取一環(huán)接種于種子培養(yǎng)液中，靜置培養(yǎng)24小時(shí)后鏡檢芽孢率95% 以上，接種到含固體培養(yǎng)基的三角瓶中培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度37 ℃。按體積分?jǐn)?shù)5%接種到固體發(fā)酵培養(yǎng)基中，靜置培養(yǎng)。以上操作均在無(wú)菌操作條件下進(jìn)行。

　　1.2.2 活菌數(shù)測(cè)定

　　固體發(fā)酵培養(yǎng)基中活菌數(shù)測(cè)定：取發(fā)酵好的固體培養(yǎng)基5 g，加入裝有100 mL含玻璃珠的無(wú)菌水的三角瓶中，280 r/min振蕩30 min搖勻，取1 ml梯度稀釋?zhuān)蛊桨?，丁酸梭菌固體種子培養(yǎng)基進(jìn)行計(jì)數(shù)(以每克樣品中的菌落數(shù)進(jìn)行計(jì)數(shù)CFU/g表示)。

　　1.2.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

　　首先選用豆粕、麩皮和玉米面3種固態(tài)基質(zhì)作為培養(yǎng)基，葡萄糖和氯化鈣均以0.5%和0.2%添加，121 ℃，30分鐘滅菌，5%接種量接種，37 ℃恒溫培養(yǎng)72小時(shí)，取樣鏡檢，芽孢率75%以上，分別取5 g濕料進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)。然后根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果再設(shè)計(jì)正交試驗(yàn)，評(píng)價(jià)各個(gè)組方的活菌數(shù)多少，確定各組分的最適添加量。我們分別進(jìn)行了5次重復(fù)試驗(yàn)，結(jié)果基本一致。