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企盒銀花多梧的研究制 李玉平，張利，黎曉敏* (西南大學(xué)動物科技學(xué)院，重慶400715 ) Research Situation on Flos lonicerae Polysaccharide LI Yuping, ZHANG Li, LI Xiaomin* (Department of Animal Science, Southwest University, Chongqi鳴400715 ， China) Abstract: Honeysuckle was antibacterial, antiviral and anticoagulant, antioxidant and so on, which is main chemical composition of honeysuckle polysaccharide. This paper summaried the honeysuckle polysaccharide extraction, isolation, purification, structure and biological activity and so on. Key words: flos lonicerae; polysaccharide; extraction method; separation and purification; biological activity 金銀花為忍冬科植物忍冬、紅腺忍冬、山銀花 或毛花枝忍冬的干燥花蕾，在神農(nóng)本草經(jīng)中被列為 上品，其性寒，味甘，有清熱解毒、涼散風(fēng)熱之功 效[1]。用于治療溫病發(fā)熱、風(fēng)熱感冒、痛腫師毒、熱 毒血病、房漏便血等[ 2]。金銀花富含揮發(fā)油類、有 機(jī)酸類化合物及黃自同類、三菇類、環(huán)烯釀菇類、醇 類、微量元素等活性成分，且具有廣譜抗菌、抗病 毒、抗腫瘤、增強(qiáng)免疫及解熱抗炎、利膽、保肝、 降脂、抗生育、止血、抗?jié)┑榷喾N藥理作用[ 3]。 植物多糖是一類重要的生物活性物質(zhì)，具有免 疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、抗病毒、抗輻射、延緩衰老及抗 感染等多種作用，且對機(jī)體的毒副作用小[4 )。近年 來研究較多的活性多糖有銀杏多糖、黃茂多糖、桑 校皮多糖、香菇多糖、雪茶多糖、拘把多糖、靈芝 多糖等[5-11 )。以往對金銀花的研究主要集中在綠原 收稿日期2010-12-06 基金項曰:重慶市獸藥工程技術(shù)研究中心項目(CSTC 2009CB lOlO)。 酸、黃自同類等小分子物質(zhì)上，對于金銀花大分子物 質(zhì)多糖的研究較少。 近年來，許多學(xué)者從金銀花中提取了多糖，并 對金銀花多糖的結(jié)構(gòu)及其生物活性進(jìn)行了一系列的 研究。本文針對近年來金銀花多糖的提取方法、分 離純化、結(jié)構(gòu)分析以及生物學(xué)活性的研究成果加以 概述，為金銀花資源的進(jìn)一步開發(fā)及其藥理作用提 供理論依據(jù)。 1 金銀花多糖的提取 多糖提取采用的方法主要有熱水提取法、酸提 取法、堿提取法、超聲波提取法、微波提取法和酶 提取法等，近年來研究最多的提取方法是熱水提取 法和超聲波提取法。 1.1 熱水提取法 熱水提取法是傳統(tǒng)提取多糖的一種方法，也是 作者簡介:李玉平(1 986-) ，女，河南林州人，碩士研究生，研究方向為中藥質(zhì)量研究。 *通訊作者:教授，碩士生導(dǎo)師， Email: lixiaomin662@sina.com 。 2011 年第2期飼料博覽2 唱 目前最常用的一種方法。該方法的基本原理是相 似相溶原則，根據(jù)大多數(shù)多糖在熱水中洛解度較 大的性質(zhì)進(jìn)行提取。該法具有設(shè)備簡單、操作方 便、適用面廣等優(yōu)點，但存在操作時間長、收率 低、需多次反復(fù)操作、能耗較高等缺點。通過對 金銀花多糖的提取工藝進(jìn)行優(yōu)化后，可使金銀花 多糖的提取率有所提高。 張玉等采用熱水提取金銀花粗多糖，氯仿、 石油酷等除去脂溶性雜質(zhì)， Sevag 法除蛋白，最后 用乙醇將其從水提物中沉淀析出，分離、干燥得 出金銀花多糖，試驗中以金銀花多糖的提取率和 含量為指標(biāo)，對浸提時間、浸提溫度、氯仿萃取 次數(shù)和所用乙醇濃度等因素進(jìn)行單因素試驗，采 用正交試驗法篩選出了最佳的提取條件，即50 g 金銀花中加入水1.5 L ，提取3 次，浸提時間2 h , 浸提溫度90 OC , 50 mL 氯仿萃取3 次，乙醇濃度 為80% ，結(jié)果多糖提取率為4.789毛，金銀花多糖相 對百分含量為78.10%[1飛鄧慶華用正交試驗法優(yōu) 化金銀花多糖水提醇沉法的提取工藝，通過對浸 提溫度、時間、料液比和浸提次數(shù)4 個因素進(jìn)行單 因素試驗，用苯盼-硫酸法測定多糖含量，考察了 這些因素對金銀花多糖提取率的影響。結(jié)果顯 示，最佳提取條件溫度為90 OC 、料液比1: 10 、浸 提2 次、每次60 min ，得出金銀花粗多糖樣品中糖 的含量為249毛[l 3)。劉光海等對金銀花1 kg采用熱水 法提取， 4 倍量的元水乙醇沉淀來制備金銀花粗多 糖，用Sevag 試劑法除去蛋白來獲得相對純的精制 多糖，苯盼-硫酸法測定多糖含量，結(jié)果為提取粗 多糖25 1.4 g ，獲得精制粗多糖39 .4 g ，而且精制后 金銀花粗多糖純度大大提高，多糖的含量由 6 1. 27%升至80.54%(14) 。 1.2 超聲波提取法 超聲波提取法是目前應(yīng)用較多的方法。超聲 波是一種高頻機(jī)械波，頻率為15-60 kHZ ，超聲波 能產(chǎn)生空化作用、熱效應(yīng)、機(jī)械作用等，這些作 用促進(jìn)了有效成分的溶解，加快了有效成分進(jìn)人 介質(zhì)，并與介質(zhì)充分混合，可加速提取過程，提 高提取率。研究表明，超聲法具有快速安全、簡 單、成本低、不被破壞等優(yōu)點，與傳統(tǒng)的熱水浸 提法相比，多糖提取率高，提取時間短，從而提 高了產(chǎn)品數(shù)量和質(zhì)量。 楊凡等采用傳統(tǒng)水煎煮法和超聲波法提取金 22 飼料悔覽2011 年第2 期 銀花多糖，試驗中分別對兩種提取方法的提取工藝 進(jìn)行優(yōu)化，同時也將超聲波預(yù)處理與傳統(tǒng)水煎煮法 結(jié)合起來提取多糖，進(jìn)而比較各種方法的多糖提取 率，試驗結(jié)果表明，出水提取法在溫度為90 OC , 料液比為1:15 ，蒸f留水提取4 次，提取時間為2.5 h 時可以獲得最佳提取效果，而超聲波法在料液比為 1: 15 ，超聲時間為120 min 時，多糖提取率為 16.8% ，超聲波預(yù)處理與傳統(tǒng)水煎煮法相結(jié)合最佳 試驗條件為超聲預(yù)處理時間9 min ，料液比1: 1.5 , 溫度90 OC ，提取時間45 mino 試驗結(jié)果表明，將 超聲預(yù)處理與傳統(tǒng)水煎煮法相結(jié)合可以將金銀花多 糖提取率提高43.9% ，并縮短提取時間50%[15)。趙 鵬等采用響應(yīng)面法優(yōu)化金銀花多糖超聲提取工藝， 研究了超聲時間、液料比、提取次數(shù)和提取溫度對 多糖產(chǎn)出率的影響，最終確定金銀花多糖提取工藝 的最佳條件為溫度75 OC 、時間43 日lln 、液料比為 23:1 、提取2 次，得出多糖提取率達(dá)到3.2639毛，進(jìn) 而表明超聲法與傳統(tǒng)水提取法相比，最大的特點是 提取時間縮短約2/3，所得金銀花多糖提取率也有 了一定程度的提高[1飛 2 金銀花多糖的分離純化 多糖的純化就是指去除粗多糖中的雜質(zhì)而獲得 單一多糖組分。一般將獲得的粗多糖除去共存雜 質(zhì)、蛋白質(zhì)等非多糖組分，再對多糖組分進(jìn)行分 級。多糖分離純化的方法很多，常用有分步沉淀 法、陰離子交換柱層析法、凝膠色譜法等。對于金 銀花多糖的分離純化、組成分析的研究報道比較 少。 李爾春對提取的金銀花粗多糖去蛋白、經(jīng)DEAE- 52 離子交換纖維素柱色譜和SePhedexG-I00 凝膠柱色譜分離出FL-Cl ， FL-D1, FL-D23 種 組分，采用SePhadexG -200 凝膠柱色譜和高效凝膠 滲透色譜法對所分離組分純度進(jìn)行純度鑒定，表明 FL-Cl , FL-D1兩種組分均為單一組分問。殷洪 梅等采用Sev噸法、酶法和酶-Sevag 法對金銀花多 糖提取物進(jìn)行脫蛋白處理，進(jìn)行脫蛋白方法的研 究，結(jié)果顯示Sevag 法、酶法、酶-Sevag 法的蛋白 脫除率分別為85.72% 、73.28% 、84.50% ，而多糖 的損失率是56.579毛、3 1. 229毛、29.35% ，結(jié)論是酶Sevag 法去蛋白效果最好[l飛 3 金銀花多糖的組成和結(jié)構(gòu)分析 鄧慶華在用正交試驗法優(yōu)化金銀花多糖水提取 沉淀的提取工藝的過程中，通過氣相色譜法測定了 樣品中的單糖組成，結(jié)果表明，金銀花待測樣含有 鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖、半乳糖及葡萄糖等單 糖。對待測樣品進(jìn)行了分子量分布的觀察，顯示分 子量分布范圍比較寬[13]。李爾春對金銀花多糖分離 純化后，采用氣相色譜分析和紅外光譜分析對所分 離組分進(jìn)行單糖組成分析，結(jié)果表明FL-C1 由葡 萄糖(Glu) 、半乳糖(Gal)、核糖(Rib) 、阿拉伯糖 (Ara) 、木糖(Xyl)、果糖(Fru) 組成。FL一D1由葡 萄糖(Glu) 、半乳糖(Gal)、木糖(Xyl)、阿拉伯糖 (Ara) 、鼠李糖(Rha) 組成。FL-D2 由葡萄糖 (Glu) 、半乳糖(Gal)、甘露糖(Man) 、核糖(Rib) 、 阿拉伯糖(Ara) 、木糖(xyl)、果糖(Fru) 組成問。 4 金銀花多糖的生物學(xué)活性 多糖是生物體內(nèi)一類重要的信息分子，具有增 強(qiáng)免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、抗突變、降血脂、降血糖、 抗病毒、抗凝血、抗攢殤、抗氧化等多種生物活 性。雖然金銀花多糖研究較少，但作為多糖類物 質(zhì)，具有與其他多糖相似的生物活性。 林雄平等利用水提法從金銀花和苦T茶中提取 水溶性多糖，用圓形紙片法對7 種常見的食品腐敗 菌(即枯草芽抱桿菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿 菌、普通變形桿菌、啤酒酵母、桔青霉、黑曲霉) 進(jìn)行抑菌活性研究，并測定其最小抑菌濃度。結(jié)果 顯示，金銀花多糖提取物對金黃色葡萄球菌和啤酒 酵母的抑菌圈直徑分別達(dá)18.2 和16.0 mm ，最小抑 菌濃度(MIC) 都在5-30 mgomL飛表明金銀花和苦 丁茶多糖提取物具有一定程度的抗細(xì)菌與抗真菌活 性，且抗細(xì)菌活性比抗真菌活性強(qiáng)[1飛李爾春通過 金銀花多糖在體外和體內(nèi)抗氧化作用來研究其抗氧 化的生物活性，結(jié)果顯示，金銀花粗多糖的總還原 力隨著濃度的增加逐步升高，并與多糖濃度有很好 的相關(guān)性，同時金銀花多糖對PMS-NADH-NBT 系統(tǒng)產(chǎn)生的超氧自由基有顯著的抑制作用。對小鼠 體內(nèi)抗氧化作用的研究則通過測定血清或組織中的 超氧化物歧化酶(SOD) 活性、過氧化氫酶(CAT) 活 性、丙二醒(MDA) 含量、谷脫甘膚過氧化物酶 (GSH-Px) 活性等指標(biāo)來評價多糖的抗氧化活'性， 結(jié)果表明，金銀花多糖提取物可以顯著提高受試小 鼠血清、肝臟及腦組織中SOD 、CAT 、GSH-Px 的活 性，顯著降低血清、肝臟、腦組織內(nèi)MDA含量，說 明金銀花多糖提取物有顯著的抗氧化活性[17]。殷洪 梅等采用正交試驗設(shè)計方法優(yōu)選金銀花多糖的最佳 提取工藝，利用Sevag-酶法除去蛋白，并將得到的 多糖對小鼠進(jìn)行遲發(fā)型超敏反應(yīng)，對環(huán)磷酸腺膠 致免疫低下組進(jìn)行血清溶血素試驗和臟器指數(shù)試 驗，進(jìn)而研究多糖的免疫活性。試驗結(jié)果表明，金 銀花多糖具有明顯的免疫增強(qiáng)作用，旦藥效和劑量 相關(guān)問。 5 小結(jié) 隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，多糖的各種生物活性 已得到廣泛關(guān)注，其生物活性強(qiáng)、毒副作用小，且 具有抑菌、抗氧化和免疫增強(qiáng)的作用，因此對金銀 花多糖進(jìn)行深入研究具有十分重要的意義和開發(fā)應(yīng). 用價值，近年來對金銀花多糖的研究還存在很多不 足，主要表現(xiàn)在用于提取金銀花多糖的方法較多， 但是所獲多糖含量不太高，需要選擇其他的提取方 法，對現(xiàn)用提取方法進(jìn)行不斷改善，對各方法的提 取工藝進(jìn)行優(yōu)化篩選，進(jìn)而提高多糖產(chǎn)出率;含量 測定方法大多為測定總糖的比色法，不能如實地反 映多糖含量，需要進(jìn)一步矯正;用現(xiàn)有提取方法所 得到的金銀花多糖多為粗品，含較多雜質(zhì)，仍需進(jìn) 一步純化，這就要對分級純化的方法進(jìn)行研究;金 銀花多糖的化學(xué)結(jié)構(gòu)還不明確，構(gòu)效關(guān)系尚不清 楚，有待進(jìn)一步研究;藥理活性研究也主要停留在 行為學(xué)、器官和組織水平，活性機(jī)理不清楚，需要 深入研究。因此，金銀花多糖提取方法的篩選和純 化工藝、多糖的構(gòu)效關(guān)系以及生物活性的深人研究 應(yīng)該作為今后的主要研究方向。 [參考文獻(xiàn)} [ 1] 張永清，王麗萍，劉志敏.金銀花名稱本草考證[1].山東中醫(yī)藥 大學(xué)學(xué)報， 1998, 22(6): 456. 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