免疫學(xué)技術(shù)的迅速發(fā)展對精度的要求越來越高，一般的酶免檢測技術(shù)已逐漸無法適應(yīng)這種形勢的需要?，F(xiàn)今發(fā)展的主流已不再是用放射性同位素標(biāo)記的測定方法(避免污染環(huán)境及對人體損害)，而是轉(zhuǎn)向于能在任何地方操作的快速均相和固相測定，最終趨向于能夠槍測到皮克或10負(fù)18摩爾級的、非同位素的、自動或半自動的實(shí)驗(yàn)室測定技術(shù)，發(fā)光免疫分析技術(shù)順應(yīng)了這一潮流，開創(chuàng)了免疫診斷的新紀(jì)元。

       發(fā)光免疫分析是一種靈敏度高、特異性強(qiáng)、檢測快速及無放射危害的分析技術(shù)。70年代末以來得到了迅速發(fā)展，目前在國際上已經(jīng)實(shí)現(xiàn)商品化和產(chǎn)業(yè)化的發(fā)光免疫分析產(chǎn)品，基本上可以分為：化學(xué)發(fā)光、時間分辨熒光(也稱時間延遲光致發(fā)光)、電化學(xué)發(fā)光(也稱場致發(fā)光和電致發(fā)光)幾種。

       1、化學(xué)發(fā)光

       化學(xué)發(fā)光是指在化學(xué)反應(yīng)過程中發(fā)出可見光的現(xiàn)象。通常是指有些化合物不經(jīng)紫外光或可見光照射，通過吸收化學(xué)能(主要為氧化還原反應(yīng))，從基態(tài)激發(fā)至激發(fā)態(tài)。退激時通過躍遷(或?qū)⒓ぐl(fā)能轉(zhuǎn)移至受體分子上)，釋放能量產(chǎn)生光子，以光形式放出能量從而導(dǎo)致的發(fā)光現(xiàn)象。其主要特點(diǎn)為消耗發(fā)光劑。同時量子效率相對較低。

       1.1 按化學(xué)反應(yīng)類型分類：可分為酶促化學(xué)發(fā)光和非酶促化學(xué)發(fā)光兩類。其中酶促化學(xué)發(fā)光主要包括辣根過氧化物酶(HRP)系統(tǒng)、堿性磷酸酶 (ALP)系統(tǒng)、黃嘌呤氧化酶系統(tǒng)等。酶促發(fā)光的共同特點(diǎn)為發(fā)光過程中作為標(biāo)記物的酶基本不被消耗，而反應(yīng)體系中發(fā)光劑充分過最，因此發(fā)光信號強(qiáng)而穩(wěn)定，且發(fā)光時間較長。因此可采用速率法測量，故檢測方式簡單、成本較低。酶促反應(yīng)的主要缺點(diǎn)為工作曲線可能隨時間漂移，而且低端斜率容易呈非線性下移。而非酶促化學(xué)發(fā)光包括吖啶酯系統(tǒng)、草酸酯系統(tǒng)、三價(jià)鐵一魯米諾系統(tǒng)等。非酶促發(fā)光的共同特點(diǎn)為發(fā)光過程中標(biāo)記物被消耗，同時作為標(biāo)記物的發(fā)光劑是發(fā)光反應(yīng)的瓶頸，即含量總是相對不足，因此發(fā)光信號持續(xù)時間較短；如果直接在免疫反應(yīng)杯中啟動發(fā)光反應(yīng)，由于發(fā)光劑被很快消耗，故只能進(jìn)行一次性測量。所以重復(fù)性較差。為降低檢測成本并實(shí)現(xiàn)重復(fù)測量，目前普遍采用原位進(jìn)樣加流動池的時間積分測量方式。因此儀器成本及維護(hù)費(fèi)用較高，而且反復(fù)使用的流動池可能導(dǎo)致交叉污染；并目沖洗或進(jìn)樣中產(chǎn)生的氣泡也會干擾測定；同時繁瑣冗長的沖洗過程也會成為提高檢測效率的瓶頸。另外，使用磁性或非磁性微粒時，強(qiáng)烈的散射吸收作用也會降低靈敏度。

       1.2 按發(fā)光持續(xù)時間分類：可分為閃光和輝光兩類，閃光型發(fā)光時間在數(shù)秒內(nèi)，如吖啶酯系統(tǒng)。其檢測方式一般采用原位進(jìn)樣和時間積分法測量，即在檢測器部位加裝進(jìn)樣器，并保證加入發(fā)光劑和檢測2個過程同步進(jìn)行；同時以整個發(fā)光信號峰的面積為發(fā)光強(qiáng)度。而輝光型發(fā)光時間在數(shù)分鐘至數(shù)十分鐘以上，如HRP一魯米諾系統(tǒng)、ALP—AMPPD系統(tǒng)、黃嘌呤氧化酶-魯米諾系統(tǒng)等。其信號檢測無需原位進(jìn)樣，一般以速率法測量，即在發(fā)光信號相對穩(wěn)定的區(qū)域任意點(diǎn)測量單位時間的發(fā)光強(qiáng)度。

       測量化學(xué)發(fā)光反應(yīng)的光強(qiáng)度，求得某些化學(xué)物質(zhì)和生物物質(zhì)的含量，尤其與免疫學(xué)方法結(jié)合以后形成的化學(xué)發(fā)光免疫測定法(CLIA)，其既具有發(fā)光檢測的高度靈敏性，又具有免疫分析的高度特異性，檢測快速，試劑無放射危害，檢測限達(dá)10負(fù)15 mol／L。

       1.3 評價(jià)：化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物已廣泛應(yīng)用于抗原、半抗原和抗體的檢測，與放射性核素標(biāo)記物相比較，它的優(yōu)點(diǎn)在于安全(無放射危害)、穩(wěn)定、測量快速、靈敏度高、線性范圍寬、自動化程度高、減少了人為的誤差。檢測快速縮短了等待結(jié)果的時間，無需批量檢測可隨到隨測保證及時提供結(jié)果。缺點(diǎn)在于一般化學(xué)發(fā)光是標(biāo)記催化酶或化學(xué)發(fā)光分子的發(fā)光反應(yīng)，一般發(fā)光不穩(wěn)定，為問斷的、閃爍性發(fā)光，而且在反應(yīng)過程中易發(fā)生裂變，導(dǎo)致反應(yīng)結(jié)果不穩(wěn)定。此外。檢測時需對結(jié)合相、游離相進(jìn)行分離，操作步驟多，測試成本高。主要問題是化學(xué)發(fā)光的產(chǎn)生通常是瞬間完成的，發(fā)光的峰值很快衰減，再是本底較高和干擾妨礙應(yīng)用。

       1.4 代表儀器

       1.4.1 美國拜耳公司最新診斷產(chǎn)品——ACS：180系列全自動化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)，以吖啶酯作為標(biāo)記，量度AE標(biāo)記物化學(xué)反應(yīng)所產(chǎn)生的光量為基礎(chǔ)，靈敏度可達(dá)10負(fù)15 g／mL。

       1.4.2 美國雅培公司生產(chǎn)的AxSYM系列全自動免疫發(fā)光分析儀將3種技術(shù)于一機(jī)，可用于非均相標(biāo)記微粒子酶免發(fā)光分析(MEIA)、離子捕捉發(fā)光分析(ICIA)和均相標(biāo)記熒光偏振免疫發(fā)光技術(shù)(FPIA)，目前已有80多個檢測項(xiàng)目可供臨床應(yīng)用。