基于ERA技術的 CRISPR/Cas12a.而在近日，國內眾多研究所專家在歐洲食品科學與技術聯(lián)合會（EFFoST）官方科學期刊刊登了快速鑒定啤酒腐敗細菌課題研究中取得突破性成果，通過由先達基因研發(fā)的酶促恒溫擴增技術（ERA技術），實現(xiàn)了對腐敗菌現(xiàn)場的準確快速核酸檢測。在本研究中，專家建立了一種快速、特異且高度便攜的基于 CRISPR/Cas12a 的關鍵啤酒腐敗細菌掃描方法，稱為 CRISPR-Beer Scan。

我國核酸檢測取得技術突破，可實現(xiàn)10分鐘全程現(xiàn)場完成。這是來自于中國的一家創(chuàng)新企業(yè)，依托自主開發(fā)的新一代核酸檢測技術（New ERA）,配套微型熒光檢測儀（基因鏡，GENEYE?），打造出一款“10分鐘一體化核酸檢測解決方案”，無需繁雜樣本處理，操作簡單，未來有望廣泛用于醫(yī)院床旁、基層診所、野外、學校、機場、家庭等檢測場景，甚至可應用于腫瘤、老年癡呆等早期篩查領域。新一代核酸檢測技術，讓病原檢測j進入10分鐘時代。

聽說你的細胞被污染了？細胞培養(yǎng)中的常見污染主要包括：細菌、霉菌、支原體、黑膠蟲、病毒和交叉污染等，每一種污染都有各自的特點。如下圖所示：左：懸浮細胞污染后，可見懸浮細胞個體遠大于桿狀細菌，而細菌呈黑色顆粒狀并會有較快的運動速度；細菌污染的細胞（左懸浮細胞，右貼壁細胞）另外添加西司他丁鈉和亞胺培南（泰能）處理細胞，適用于培養(yǎng)用具被打翻、使用了污染的培養(yǎng)液或要培養(yǎng)污染的組織或者凍存細胞的污染情況[1]。

酶促恒溫擴增技術（ERA）在食品安全檢測領域的應用。實時熒光型核酸擴增ERA，是 ERA 基礎反應體系與熒光探針結合起來的一種聯(lián)用技術。ERA-ELISA 技術是在 ERA 技術的基礎上結合 ELISA 技術發(fā)展起來的用于檢測核酸擴增產(chǎn)物的新型分析檢測手段，綜合了 ERA、ELISA 兩種技術的特點，在特異性、靈敏性等方面表現(xiàn)出優(yōu)異的特點、而且操作過程簡單，結果不需要電泳檢測和 ERA 產(chǎn)物純化，較短時間內可以完成整個檢測過程。

銅綠假單胞菌簡介1 基本簡介。青霉素對此菌無效，但慶大霉素和多粘菌素B、E，氨基甙類、第三和第四代頭孢菌素（頭孢哌酮、頭孢曲松、頭孢匹羅、頭孢唑南等，后兩種為三線抗菌藥物，應慎用）等抗生素作用較明顯，一些半合成的青霉素類抗生素，比如阿洛西林和哌拉西林對綠膿桿菌也有很強的抗菌作用，其有效率約為80%。②細菌改變抗菌藥物作用的靶位，如青霉素結合蛋白(PBPs)、DNA旋轉酶等結構發(fā)生改變，從而逃避抗菌藥物的抗菌作用。

CRISPR快速核酸檢測系統(tǒng)介紹。CRISPR-Cas12a快速核酸檢測系統(tǒng)。首先進行RPA快速等溫擴增，擴增過程只需要15min，并且在擴增反應管中，除了包括RPA擴增的所有體系之外，也包括除Cas12a酶之外酶切的所有體系，他們是將Cas12a酶固定在擴增反應管壁上。整個檢測過程中RPA擴增的反應體系和Cas12a酶切的體系是混合在一起的，為了能讓Cas12a有效地切割RPA擴增產(chǎn)物，作者通過大量實驗摸索發(fā)現(xiàn)用NEB buffer 2.1有較好的酶切效果。

當PCR反應開始后,莖環(huán)結構在變性高溫條件下打開,釋放熒光;在退火過程中,靶序列特異性探針則與模板雜交保持線性,不能與模板雜交的探針則復性為莖環(huán)結構而熒光淬滅,通過檢測qPCR體系中退火時的熒光信號強度,便可以real-time PCR原理特異性檢測體系中的初始模板濃度。經(jīng)過PCR后,對每個微反應孔的熒光信號進行檢測,存在靶核酸模板的反應孔會釋放熒光信號,沒有靶模板的反應孔就沒有熒光信號,以此推算出原始溶液中待測核酸的濃度。

2015版中國藥典規(guī)定：“主細胞庫、工作細胞庫、病毒種子批、對照細胞以及臨床治療用細胞進行支原體檢查時，應同時進行培養(yǎng)法和指示細胞培養(yǎng)法（DNA染色法）。病毒類疫苗的病毒收獲液、原液采用培養(yǎng)法檢査支原體，必要時，亦可采用指示細胞培養(yǎng)法篩選培養(yǎng)基。也可采用經(jīng)國家藥品檢定機構認可的其他方法?！睘楸苊饧毎俅问艿健爸гw”的污染，以后每隔1個月進行支原體的常規(guī)檢測，以保證沒有新的支原體污染。

體外診斷試劑液體輔助試劑分類界定！2.7.1直接參與檢測反應的單組分試劑，如：校準品、質控品、對照品、免疫分析的第一抗體、生化產(chǎn)品中的反應試劑、核酸分析的引物等，不屬于體外診斷試劑液體輔助試劑。2.7.3 關于通用試劑和專用試劑，當某一液體輔助試劑適用于某一檢測系統(tǒng)一系列試劑盒的共同作用時，一般應被視為通用試劑；當液體輔助試劑同時具有通用試劑和專用試劑的功能時，建議按照專用試劑的類別管理。

Cell子刊：新冠病毒是如何劫持并摧毀人類肺部細胞的。研究人員檢查了SARS-CoV-2感染后1到24小時內的肺泡細胞，以了解肺細胞立即發(fā)生了什么變化（在SARS-CoV-2感染后1、3和6小時）以及后來發(fā)生了什么變化（在感染后24小時）。論文的共同通訊作者 Darrell Kotton 教授表示：這些結果表明，與正常/未感染的肺細胞相比，SARS-CoV-2感染的肺細胞在數(shù)千種蛋白質的豐度和磷酸化事件中顯示出巨大的變化。

分子診斷-獸醫(yī)體外診斷的趨勢和制高點。作為一種在獸醫(yī)診斷領域新興的檢測技術，PCR因其無可比擬的優(yōu)勢受到了越來越多的關注，也將會引領獸醫(yī)體外診斷技術發(fā)展的潮流。實時熒光定量PCR技術（將熒光基團加入到PCR反應體系中，借助熒光信號，累積實時監(jiān)測整個PCR的進程）不僅具有傳統(tǒng)PCR的優(yōu)勢，還具有特異性強、靈敏度高、重復性好、反應速度快、定量準確和自動化程度高等特點，成為國際公認的核酸分子定量的標準方法。

基因檢測的市場應用有哪些？7、病原微生物檢測：應用分子生物學技術快速檢測病原微生物，對感染性疾病的診斷意義重大。11、藥物基礎研究與藥物臨床測試：通過藥物相關的基因檢測結果，能為制定個體化給藥方案提供科學依據(jù)，目前不少創(chuàng)業(yè)公司聚焦研究藥物相關基因與藥物代謝動力學和產(chǎn)生藥物不良反應個體的相關性，建立中國人臨床用藥數(shù)據(jù)庫；該門類下有祖源分析、疾病易感基因篩查、寵物基因檢測、DNA應用商店等細分領域。

RNA抽提知多少。今天小編帶來滿滿的干貨，RNA提取小課堂開課啦，我們就來聊一聊關于RNA抽提的那些事兒吧~希望對于正在進行實驗的小伙伴們提供一些幫助，前排搬好小板凳，敲黑板劃重點啦~加入1ml預冷的75%乙醇，輕輕將整塊沉淀吹起懸浮，此處千萬注意別把RNA沉淀吹散，因為RNA吹散后很難通過離心重新聚集在一起，最終導致實驗失敗。RNA抽提試劑盒。5.使用Rnase-free的雙蒸去離子水或其他緩沖液溶解RNA，否則容易導致RNA降解。

DNA與RNA提取注意事項。RNA制備的關鍵是要抑制細胞中的RNA分解酶和防止所用器具及試劑中的RNA分解酶的污染。這樣做的唯一目的就是兩個：一是小心RNAse的污染降解RNA二是動作過度暴力破壞RNA的完整性。4. 一般RNA電泳應該是做甲醛變性電泳但是一般的瓊脂糖電泳也可以需要上樣量稍微大些并且跑電泳的時間越短越好(這樣也是為了減少外界RNAse對RNA的降解)跑完電泳立刻觀察。

干貨 | 實驗篇之RT-PCR.逆轉錄（reverse transcription）是以 RNA 為模板合成 DNA 的過程，即 RNA 指導下的 DNA 合成，逆轉錄實驗包括3大要素，分別是引物、逆轉錄酶和 RNA 模板：可將已確定的高質量 RNA 模板同樣品混合，同高質量 RNA 模板比較產(chǎn)量以檢測 RNA 抑制劑；① RNA 模板質量差，需要重新制備 RNA 模板，可通過瓊脂糖凝膠電泳檢測質量。③ 起始的 RNA 模板量低，需要減少稀釋倍數(shù)或增加 RNA 模板量。

核酸存在于所有動物細胞、植物細胞、微生物內、生物體內的核酸常與蛋白質結合形成核蛋白。離心柱提取離心柱技術是用于微量核酸分離純化的較為簡單的方法，屬于硅吸附方法的一種，在原理上可分為三個部分：①利用裂解液促使細胞破碎，使細胞中的核酸釋放出來。②把釋放出來的核酸特異吸附在特定的硅載體上，這種載體只對核酸有較強的親和力和吸附力，對其他生化成分如蛋白質、多糖、脂類則基本不吸附，因而離心時被甩出柱子。

初步搞定恒溫擴增分子診斷（RPA/ERA）重組酶聚合酶擴增技術，RPA, recombinase polymerase amplification酶促重組等溫擴增技術，ERA, Enzymatic Recombinase Amplification重組酶，recombinase，同引物形成蛋白-核酸復合物，指導引物與模板結合，起到定位作用；DNA聚合酶，DNA polymerase，以DNA為模板，利用dNTP合成子代DNA。2、當引物尋找到配對DNA模板，ATP水解供應能量，重組酶離開引物，并在DNA聚合酶的作用下合成新DNA鏈；

PCR引物設計遵循的規(guī)律精彩推薦。即使其他所有參數(shù)都是最優(yōu)的，引物設計不好可引起非特異的擴增和或引物二聚體形成，導致PCR產(chǎn)物較少或根本沒有產(chǎn)物，接下來主要介紹PCR引物設計的一般規(guī)律。一個帶有自身同源序列的引物可以回折形成部分雙鏈的發(fā)夾結構，類似地，引物之間的同源可能引起引物二聚體的形成，.PCR反應時，相對于模板而言，引物濃度高很多，引物之間相互退火要比引物與模板之間退火容易得多。

引物或探針不佳: 重新設計更好的引物和探針。模板中存在抑制物，或模板濃度過高。引物設計不夠優(yōu)化：應避免引物二聚體和發(fā)夾結構的出現(xiàn)。引物濃度不佳：適當降低引物的濃度，并注意上下游引物的濃度配比。鎂離子濃度過高：適當降低鎂離子濃度，或選擇更合適的mix試劑盒。模板有基因組的污染：RNA提取過程中避免基因組DNA的引入，或通過引物設計避免非特異擴增。鎂離子濃度過高：適當降低鎂離子濃度，或選擇更合適的 mix 試劑盒。