Step. 1

取材與固定

步驟：取出目標(biāo)組織塊，將其放入固定液（常用福爾馬林或4%多聚甲醛）中，固定液的量一般為組織體積的5倍以上。固定時間根據(jù)固定液的種類一般為12-24h（對于體積大的組織，可適當(dāng)延長時間）。

目的：保持組織原有形態(tài)、并使組織變得堅硬便于后續(xù)切片。

Step. 2

修整與沖洗

步驟：按需求修整組織塊，放入包埋盒中，用流動自來水沖洗30分鐘。

目的：洗去固定液。

Step. 3

脫水+透明+浸蠟

步驟：可使用全自動脫水機或自行操作，程序設(shè)置：75%乙醇30min → 80%乙醇30min → 90%乙醇30min×2 → 95%乙醇30min×2 → 100%乙醇20min×2 → 二甲苯20min×2 → 組織石蠟 90min×3 。

目的：

①脫水——去除組織中的水分，使組織變?yōu)橛H脂性，便于后續(xù)浸蠟；

②透明——去除脫水劑，為浸蠟做準(zhǔn)備；

③浸蠟——去除透明劑，為包埋做準(zhǔn)備。

Step. 4

包埋

步驟：準(zhǔn)備包埋蠟，一般選用硬蠟（56-58℃或60-62℃為宜），倒入金屬框中，將組織包埋盒埋于熱蠟中，放于冰臺上冷卻4-6小時。待蠟塊完全凝固后取出。

目的：使組織塊保持固定形狀和硬度，便于切片。

Step. 5

切片

準(zhǔn)備工作：準(zhǔn)備好切片所需的切片機、冰臺、刀片、毛筆、鑷子、載玻片、展片機或恒溫水浴箱（45-50℃）、染色架。提前將蠟塊置于冰臺10-30分鐘以增加硬度，便于切片。切去組織周圍多余石蠟，可將蠟塊切成梯形。

切片：將蠟塊固定于切片機上，左手執(zhí)毛筆，右手轉(zhuǎn)動切片機。先修出組織塊并將切面修整平齊。然后設(shè)置切片厚度為5-7μm，切片?？梢郧谐蓡螐垼部梢赃B續(xù)切片形成蠟帶。

Step. 6

展片

左手拿毛筆輕輕托起切片，右手用鑷子夾起切片一角，正面向上平鋪在溫水中，切片在表面張力的作用下會自然展開，必要時用鑷子輕輕撥開。這一步容易弄破切片，要小心操作！

Step. 7

撈片

用載玻片豎直插入水中，靠近切片，輕輕帶出，使切片貼附在玻片上，標(biāo)記信息后放置在染色架上。

Step. 8

烤片（可選）

將玻片放在60℃恒溫烘箱中半個小時，烤干備用。

這是總流程圖！薄薄切片在展片的時候容易弄破，多練習(xí)一定會切出滿意的片子的