Frdbio®第三代抗體生物素標記試劑盒

friendbio 2023-12-13 發(fā)布于湖北

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產(chǎn)品介紹：

本產(chǎn)品是在超級生物素標記試劑盒（ARL0020SK）基礎(chǔ)上的升級。本試劑盒操作不需要離心等步驟，操作更簡便，標記效率更高，即使抗體含有BSA、疊氮鈉、甘油等都不影響生物素標記效率，標記后實驗背景更低，抗體損失更少。本試劑盒對樣品更兼容。

本試劑盒亮點：

可以直接標記抗血清，腹水，細胞培養(yǎng)上清中的抗體，不需要事先純化。

基本原理：

本試劑盒先將抗體固定在預(yù)處理超順磁性聚合物微球表面，使抗體與其他蛋白分離，再將高活性的生物素標記在抗體上，通過洗脫、中和即可得到高純度的生物素標記的抗體。可從血清、腹水等樣品中分離出純度大于90%的抗體并將其標記。

主要特點：

ü 試劑盒組分齊全，操作簡單，只要按照操作步驟進行便可得到高品質(zhì)Biotin-antibody偶聯(lián)抗體；

ü 本試劑盒所配置的磁珠與抗體結(jié)合能力高，蛋白非特異吸附率低；

ü 本試劑采用的生物素為本公司自主設(shè)計優(yōu)化合成的，增加了延長臂，標記效率更高，保證偶聯(lián)物的特異性和均一性；解決了目前市面上所使用生物素標記后背景高，易脫落，抗體容易沉淀聚集或者抗體效價下降等情況。

ü 相較于傳統(tǒng)生物素標記，本試劑盒操作時間短，不需要離心機等儀器。

試劑盒已經(jīng)提供材料：

ü 抗體固定磁珠 100ul

ü 活性生物素（干粉） 1支使用前加助溶劑 220ul

ü 助溶劑 220ul

ü 標記緩沖液 30ml*1瓶

ü 抗體洗脫液 30ml*1瓶

ü 抗體穩(wěn)定液 30ml*1瓶

ü 抗體保存液 2ml*1支

ü 磁力架 1支

ü 說明書 1份

其他需要自備試劑材料：

2 待標記的抗體

2 移液器及吸頭

2 PBS(pH 7.2)

2 去離子水

2 旋轉(zhuǎn)離心管搖床（非必須）

試劑盒儲存

試劑盒活性生物素（干粉）放在-20?C，磁力架室溫存放，其余組分放在2-8 ?C可保存12個月以上。

試劑盒操作流程（按1mg抗體標記量）：

實驗前，將試劑盒各組分平衡到室溫；

1.抗體的固定分離

1）取出抗體固定磁珠，吸頭（用剪刀剪去吸頭尖部，使吸口變大）吹打成懸濁液，立即取出適量磁珠懸濁液（此時磁珠為50%懸濁液，按照100ul懸濁液對應(yīng)1mg抗體），加到1.5ml離心管中，將離心管放入磁力架上，待磁珠被全部吸附到離心管側(cè)壁，將移液器吸頭插入到離心管底部吸干磁珠保護液；

2）將離心管移出磁力架，加入1ml PBS緩沖液，吹打成懸濁液，重新放入磁力架靜置，待磁珠被全部吸附到離心管側(cè)壁，將移液器吸頭插入到離心管底部吸干PBS；

3）重復(fù)上步驟2-3次；

4）將磁珠離心管移出磁力架，待標記抗體（抗血清，腹水或者細胞上清）用PBS調(diào)整為約2mg/ml濃度，加入磁珠離心管中，蓋緊管蓋，放在離心管旋轉(zhuǎn)搖床上搖晃30分鐘；

5）將離心管重新放回磁力架，待磁珠被全部吸附到離心管側(cè)壁，將移液器吸頭插入到離心管底部吸干液體；

6）重復(fù)步驟2 三次；

2. 生物素標記抗體

1）將離心管移出磁力架，加入適量抗體標記緩沖液（1mg抗體加入200ul標記緩沖液），同時取出活性生物素（干粉），用助溶劑調(diào)整成10mM濃度，按照1mg抗體取13.5ul生物素加入上述離心管。

2）將離心管固定在離心管旋轉(zhuǎn)搖床上室溫反應(yīng)1個小時或者4℃反應(yīng)過夜；

3）將離心管重新放回磁力架，待磁珠被全部吸附到離心管側(cè)壁，將移液器吸頭插入到離心管底部吸干液體；

4）將離心管移出磁力架，加入1ml PBS緩沖液，吹打成懸濁液，重新放入磁力架靜置，待磁珠被全部吸附到離心管側(cè)壁，將移液器吸頭插入到離心管底部吸干PBS；

5）重新以上步驟2-3次；

6）將離心管移出磁力架，按照1mg抗體對應(yīng)400ul抗體洗脫液，吹打磁珠10次，將離心管重新放回磁力架，待磁珠全部被吸附到離心管側(cè)壁，將移液器吸頭插入到離心管底部吸取全部的洗脫標記抗體，轉(zhuǎn)移到新的離心管，立即加入100ul抗體穩(wěn)定液，即得到生物素標記的抗體。

3. 生物素標記抗體的保存

加入等體積抗體保存液，-20℃保存。

4. 生物素標記抗體的標記效率計算

請參考Frdbio? HABA法生物素標記效率檢測試劑盒(貨號：ARL0021T1)

5. 生物素標記抗體的使用

一般來說生物素標記的抗體不能直接使用，需要配合鏈霉親和素標記復(fù)合物使用，比如：FITC鏈霉親和素(FITC- conjugated Streptavidin)，HRP鏈霉親和素(HRP- conjugated Streptavidin)

注意事項：

1）本試劑盒只針對抗體（非IgM亞型）的生物素標記。若標記其他非抗體蛋白試劑，可選擇貨號ARL0020K的生物素標記試劑盒。

2）本試劑盒中活性生物素為高活性試劑，請-20℃保存；其余成份2-8℃保存、勿凍存。

3）本試劑盒中組分抗體洗脫液若有沉淀析出，為正?，F(xiàn)象，離心取上清即可。

4）試劑盒組份在運輸過程中可能造成顛倒，會使液體或干粉試劑粘到管壁或瓶蓋上。使用前請離心處理，以使附著管壁或瓶蓋的液體或干粉試劑沉積到管底。

5）活性生物素需現(xiàn)用現(xiàn)配，干粉溶解后不能長期保存；