與其他病毒載體相比而言,慢病毒載體攜帶的DNA能整合到宿主細(xì)胞基因組中,因此其介導(dǎo)的基因表達(dá)或RNAi干擾作用持續(xù)且穩(wěn)定,隨細(xì)胞基因組的分裂而分裂,并可感染非分裂的細(xì)胞。 慢病毒系統(tǒng)主要應(yīng)用于以下研究: 1.對(duì)于較難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞如原代細(xì)胞、干細(xì)胞、不分化的細(xì)胞等,能大大提高目的基因轉(zhuǎn)染效率,增加目的基因/RNAi基因的效率。 2. 將目的基因/RNAi基因轉(zhuǎn)入細(xì)胞/動(dòng)物組織,以期獲得長(zhǎng)期表達(dá)。 3. 構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)目的基因/蛋白/RNAi的細(xì)胞系,再用ex vivo的方法導(dǎo)入動(dòng)物體內(nèi)。 4. 慢病毒介導(dǎo)的基因治療 5. 慢病毒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物 6. 慢病毒介導(dǎo)的基因敲除 7. 藥物研究:構(gòu)建表達(dá)受體蛋白穩(wěn)定表達(dá)的細(xì)胞系,研究藥物的作用。 二.慢病毒系統(tǒng)應(yīng)用的典型案例解析: 1. 細(xì)胞穩(wěn)轉(zhuǎn)株的構(gòu)建應(yīng)用 細(xì)胞:E1持續(xù)表達(dá)的293T細(xì)胞系,慢病毒pTYF-EF1α-eGFP(1000 viral genomes per cell),轉(zhuǎn)導(dǎo)后的細(xì)胞以1:10的比例每3天傳代1次。在病毒感染9周E1仍持續(xù)高效表達(dá)。(PMID: 26005375 PMCID: PMC4441065 DOI: 10.7150/ijms.11270) ![]() ![]() 2. 慢病毒基因治療應(yīng)用 通過(guò)向杏仁核內(nèi)腦立體定位注射慢病毒系統(tǒng)遞送的Akap150 shRNA(lenti-Akap150 shRNA),注射體積~0.5ul濃縮的慢病毒溶液。能有效降低Akap150蛋白的表達(dá)水平達(dá)58%以上。有效緩解小鼠出現(xiàn)慢性束縛造成的焦慮/抑郁樣行為。(PMID: 31076080 DOI: 10.1016/j.biopsych.2019.03.967) 3. 慢病毒介導(dǎo)的基因敲除應(yīng)用 MOI=10~100, 靶標(biāo)基因:唾液上皮外植體中的Itgb1。(PMID: 37222511 PMCID: PMC10234494) 今天的分享就到這里了,希望通過(guò)本期的分享能夠讓大家對(duì)于慢病毒系統(tǒng)的應(yīng)用有更深入的了解。也特別歡迎大家通過(guò)公眾號(hào)菜單欄“更多—讀者的話”欄目留言,您的問(wèn)題也許就是我們下期分享的主題。希望我們能一起成長(zhǎng),共同進(jìn)步! ![]() |
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