不孕不育已逐漸成為一個(gè)全球性的重大衛(wèi)生難題，影響著數(shù)以千萬(wàn)計(jì)的育齡人口。不同于對(duì)女性不孕癥的排查涉及排卵、子宮、盆腔等多種方面，對(duì)男性生育能力的評(píng)估則通常僅圍繞精液質(zhì)量展開(kāi)。人類輔助生殖技術(shù)的出現(xiàn)一定程度上幫助了不孕不服夫婦擺脫困境，但其施行成功率的保證同樣有賴于對(duì)精液質(zhì)量的分析。甚至還有一些研究表明，男性不育癥與死亡率之間存在關(guān)聯(lián)，暗示精液質(zhì)量還可用于識(shí)別不育癥以外的男性一般健康問(wèn)題。

雖然世衛(wèi)組織（WHO）和國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)化組織（ISO）對(duì)精液檢查早有建議，但在世界范圍內(nèi)，各中心在實(shí)踐過(guò)程中卻缺乏真正的標(biāo)準(zhǔn)，這對(duì)確定許多研究的科學(xué)準(zhǔn)確性乃至臨床價(jià)值也產(chǎn)生了不利影響。比如Campbell等人在2021年發(fā)布的研究“Distribution of semen examination results 2020—a follow up of data collated for the WHO semen analysis manual 2010”中就指出，在確保不同研究的精液檢查方法沒(méi)有質(zhì)量問(wèn)題上存在諸多挑戰(zhàn)。使用那些高度不確定性的方法，產(chǎn)生的隨機(jī)結(jié)果則極有可能掩蓋健康情形和病理性情形之間的差異。為此，基于第6版《世界衛(wèi)生組織人類精液檢查和處理實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)》和國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)ISO23162:2021，近90位專家呼吁：應(yīng)在精液檢查中采用高質(zhì)量的方法去產(chǎn)出可復(fù)現(xiàn)且可靠的數(shù)據(jù)。該呼吁以“Standards in semen examination: publishing reproducible and reliable data based on high-quality methodology”為題，發(fā)表于Human Reproduction（圖1）[1]。

圖1 研究報(bào)道（圖源：[1]）

透明度、開(kāi)放性和可重復(fù)性在任何科學(xué)領(lǐng)域都是一個(gè)老生常談的話題，已有大量建議、框架、指南明確地給出了提高研究可靠性的辦法。在男科領(lǐng)域，從1980年到2010年共出版了五版關(guān)于人類精液的WHO手冊(cè)。相比于前五版手冊(cè)，2021年7月發(fā)布的第六版手冊(cè)提供了標(biāo)準(zhǔn)高效的精液處理方案框架，對(duì)各種精子參數(shù)進(jìn)行了相應(yīng)的修訂，強(qiáng)調(diào)了遺傳評(píng)價(jià)的重要性，添加了來(lái)自更廣泛國(guó)家地區(qū)的精液數(shù)據(jù)，刪去了人類宮頸粘液這部分過(guò)時(shí)的內(nèi)容。同時(shí)發(fā)布的國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)“ISO23162:2021 Basic semen examination—Specification and test methods”作為正式標(biāo)準(zhǔn)的補(bǔ)充。

在呼吁專家最關(guān)心的精液檢查方法方面，第六版手冊(cè)給出了每一步程序必須遵守的實(shí)驗(yàn)室原則，以減少測(cè)量的不準(zhǔn)確性和不精確性，從而保證不同技術(shù)人員之間、全球不同實(shí)驗(yàn)室之間的精液參數(shù)結(jié)果具有可比性，也使得其研究更易于在同行評(píng)審的期刊上發(fā)表。當(dāng)不能遵循手冊(cè)中的方法時(shí)，專家建議，應(yīng)在材料和方法的部分單獨(dú)說(shuō)明不同之處和原因，并進(jìn)一步闡明這些變化會(huì)對(duì)結(jié)果的準(zhǔn)確性產(chǎn)生什么樣的影響。手冊(cè)還強(qiáng)調(diào)，人員培訓(xùn)、內(nèi)部質(zhì)量質(zhì)控（internal quality control，IQC）和外部質(zhì)量評(píng)估（external quality assessment，EQA）對(duì)于保證精液檢查具備可靠性、一致性和可比較性不可或缺。

以下介紹手冊(cè)中涉及實(shí)驗(yàn)室原則的部分重要環(huán)節(jié)：

手冊(cè)強(qiáng)調(diào)了樣本采集前射精頻率的重要性，并建議在樣本采集前的2-7天禁欲，以減少個(gè)人生活和習(xí)慣對(duì)樣本的干擾。禁欲時(shí)間的延長(zhǎng)將可能導(dǎo)致精子數(shù)量增加，而活動(dòng)精子比例下降。

精液的不同部分常常糾纏于凝膠狀物質(zhì)中，且天生具有異質(zhì)性。射精之后的5-30分鐘內(nèi)精液將液化變?yōu)椴惶吵淼囊后w狀，然而這種長(zhǎng)時(shí)間的混合并不太可能發(fā)生于體內(nèi)環(huán)境。此外精液中的精子活力會(huì)隨著時(shí)間推移而降低，因此當(dāng)正常液化完成時(shí)，必須在射精30分鐘內(nèi)開(kāi)始檢查。

移液器或量筒會(huì)導(dǎo)致提及損失，因此對(duì)射精量的評(píng)估建議通過(guò)確定空容器重量和有樣本容器重量來(lái)獲得。對(duì)于精液樣本的宏觀（肉眼）檢查同樣是分析的重要步驟，比如可以提供樣本是否為完成精液樣本、是否包含血液或尿液等關(guān)鍵信息。

液化后的精液通常存在精子數(shù)量的空間不均一性，而在液化不均勻的樣本中這種情況尤甚，樣本量不足將增加很多替代方案的錯(cuò)誤風(fēng)險(xiǎn)。手冊(cè)建議使用正排量移液器抽取足夠體積（50μl）的子樣本，并進(jìn)行稀釋等分。血細(xì)胞計(jì)數(shù)器建議使用100微米深度帶有改進(jìn)Neubauer規(guī)則的。

手冊(cè)重新引入了快行精子和慢行精子的區(qū)別。在采用非計(jì)算機(jī)輔助精子分析（computer-assisted sperm analysis，CASA）手段區(qū)分快行精子和慢性精子的情形下，節(jié)拍器打拍和目鏡刻度將有助于數(shù)據(jù)結(jié)果實(shí)現(xiàn)可復(fù)制性。由于精子速度高度依賴于環(huán)境溫度，應(yīng)注意在標(biāo)準(zhǔn)化的溫度（37°C）下對(duì)精子活力進(jìn)行評(píng)估。

報(bào)告中不應(yīng)只有“正?！本拥谋壤雎匀毕菥拥姆植?。不同的染色劑會(huì)增強(qiáng)精子形態(tài)的不同部分，因此對(duì)于精子染色劑的選擇，也應(yīng)遵循手冊(cè)的推薦。

手冊(cè)建議采用Rothmann等人提出的結(jié)構(gòu)化的方法對(duì)精子形態(tài)進(jìn)行評(píng)估。精子所有部分（頭部/中段/尾部）的缺陷統(tǒng)計(jì)均應(yīng)充分考慮，避免精子頭部之外其他部位異常情況的報(bào)告不足。