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WB、ELISA、IHC 的之間的區(qū)別與選擇？

 楊yxabu5tlg7cm 2022-08-01 發(fā)布于陜西
免疫組化、Western、ELISA，免疫學(xué)三大工具，分別用于定位，定性和定量。以下內(nèi)容來自「WB、ELISA、IHC 」三大專題，提前訂閱收藏，每周更新。


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IHC  免疫組化
Immunohistochemistry

是融合了免疫學(xué)原理(抗原抗體特異性結(jié)合)和組織學(xué)技術(shù)(組織的取材、固定、包埋、切片、脫蠟、水化等)。

定位：通過化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑 (熒光素、酶、金屬離子、同位素)顯色，來對組織、細(xì)胞內(nèi)抗原進(jìn)行定位、定性及定量的研究，主要是定位。

樣品：細(xì)胞或組織，要在顯微鏡下觀察結(jié)果，可能出現(xiàn)膜陽性、質(zhì)陽性和核陽性。

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ELISA 酶聯(lián)免疫吸附試驗
Enzyme linked immunosorbent assay

用到了免疫學(xué)原理和化學(xué)反應(yīng)顯色?？梢杂米鼍珳?zhǔn)定量。

樣品：多是血清、血漿、尿液、細(xì)胞或組織培養(yǎng)上清液，因而沒有用到組織包埋、切片等技術(shù)，這是與免疫組化的主要區(qū)別。

操作上：需要將抗原或抗體結(jié)合到固相載體表面，從而使后來形成的抗原-抗體-酶-底物復(fù)合物粘附在載體上，這就是「吸附」的含義。

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WB  蛋白質(zhì)印跡
Western Blot

先要進(jìn)行 SDS-PAGE，然后將分離開的蛋白質(zhì)樣品用電轉(zhuǎn)儀轉(zhuǎn)移到固相載體上，而后利用抗原-抗體-標(biāo)記物顯色來檢測樣品，可以用于定性和半定量。

樣品：細(xì)胞、蛋白。

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 3 類實驗區(qū)別與選擇

01-定位是免疫組化最大的優(yōu)勢

該方法可在組織和細(xì)胞中進(jìn)行抗原的準(zhǔn)確定位，因而可同時對不同抗原在同一組織或細(xì)胞中進(jìn)行定位觀察，這樣就可以進(jìn)行形態(tài)與功能相結(jié)合的研究。

相比于其他蛋白檢測方法，免疫組化具有定位較直接準(zhǔn)確、定性靈敏度高，是定位檢測分析首選方法對病理學(xué)領(lǐng)域開展深入研究是十分有意義，尤其對于有些因子的轉(zhuǎn)位研究十分有用。


02-WB 與 IHC 相比定量更加準(zhǔn)確

當(dāng)然WB也可定性和定位(通過提取膜蛋白或核蛋白、胞漿蛋白分別檢測其中抗原含量，進(jìn)而間接反映它們的定位)，但敏感性遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于IHC。


03-ELISA 最準(zhǔn)確，是分泌性蛋白檢測首選方法之一

尤其對于微定量分析多個樣本非常有用，所用試劑和樣品量很少，結(jié)果精確。


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總結(jié)

  • IHC 定位性比較強(qiáng)，一般是以組織或者細(xì)胞為樣本

  • ELISA 定量更精準(zhǔn)樣本一般是使用血清或者組織磨碎液

  • IHC 可以快速檢測樣本中抗體的陽性或者陰性，一般不用于定量檢測

  • WB 可以用做定性和半定量。


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策劃｜Olaf
配圖｜丁香實驗設(shè)計團(tuán)隊

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