免疫檢查點(diǎn)阻斷（ICB）治療，尤其是PD-1/PD-L1抑制劑，給很多腫瘤患者帶來(lái)了希望[3]。但是臨床試驗(yàn)顯示，PD-1抑制劑單藥并沒(méi)有給HCC患者帶來(lái)顯著的臨床收益（臨床試驗(yàn)注冊(cè)號(hào)：KEYNOTE-240、CheckMate-459）。

有研究表明，這很大程度上歸因于腫瘤對(duì)PD-1抑制劑的耐藥性[4，5]。所以我們迫切需要了解HCC耐藥的機(jī)制，并尋找一種有效的聯(lián)合治療策略克服耐藥，改善ICB療法對(duì)HCC的療效。

近日，由復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院樊嘉院士、柯愛(ài)武副研究員、蔡加彬博士領(lǐng)銜的研究團(tuán)隊(duì)在Journal of Hepatology期刊發(fā)表研究成果[6]。

他們發(fā)現(xiàn)對(duì)PD-1抑制劑有耐藥性的HCC會(huì)上調(diào)表達(dá)轉(zhuǎn)錄因子ZFP64，隨后ZFP64被蛋白磷酸化酶Cα（PKCα）活化，從而促進(jìn)巨噬細(xì)胞集落刺激因子1（CSF1）的表達(dá)；而CSF1又會(huì)招募并促進(jìn)巨噬細(xì)胞極化為促癌的M2表型，導(dǎo)致HCC的免疫逃逸并對(duì)PD-1抑制劑產(chǎn)生耐藥。

好消息是，他們發(fā)現(xiàn)使用蛋白激酶抑制劑G？6976或侖伐替尼，可以阻斷PKCα/ZFP64/CSF1軸，恢復(fù)HCC對(duì)PD-1抑制劑的敏感性。

接下來(lái)我們就一起來(lái)看看這個(gè)研究是如何展開(kāi)的。

為了尋找對(duì)PD-1抑制劑治療耐藥HCC的特征，研究團(tuán)隊(duì)選取了10例接受PD-1抑制劑治療后疾病進(jìn)展（PD），7例部分應(yīng)答（PR）的患者肝臟活檢樣本進(jìn)行了NGS測(cè)序。

經(jīng)過(guò)分析發(fā)現(xiàn)，ZFP64在疾病進(jìn)展患者腫瘤組織中顯著上調(diào)表達(dá)。在小鼠原位腫瘤模型中，若腫瘤細(xì)胞過(guò)表達(dá)ZFP64，則小鼠腫瘤生長(zhǎng)更加迅速，對(duì)PD-1抑制劑治療的響應(yīng)更差。

在驗(yàn)證隊(duì)列中，研究者發(fā)現(xiàn)ZFP64在腫瘤中顯著上調(diào)，并且ZFP64的表達(dá)與腫瘤內(nèi)浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞的數(shù)量呈反比，ZFP64水平高與患者預(yù)后不良相關(guān)。這些數(shù)據(jù)提示，ZFP64可能是引起HCC免疫逃逸以及PD-1抑制劑耐藥的關(guān)鍵因素。

為了在體內(nèi)環(huán)境探究ZFP64對(duì)腫瘤發(fā)生發(fā)展的影響，樊院士團(tuán)隊(duì)使用一種能夠自發(fā)肝細(xì)胞癌的HBV轉(zhuǎn)基因小鼠模型。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，若使小鼠肝細(xì)胞過(guò)表達(dá)ZFP64，則HCC發(fā)生率、生長(zhǎng)速度、轉(zhuǎn)移率都會(huì)顯著增加。

對(duì)腫瘤微環(huán)境進(jìn)行分析可見(jiàn)腫瘤中巨噬細(xì)胞明顯增多，主要是促癌的M2巨噬細(xì)胞；但是，CD4+T以及CD8+T細(xì)胞顯著減少。這些數(shù)據(jù)說(shuō)明，ZFP64可以促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展，并且誘導(dǎo)形成免疫抑制性的腫瘤微環(huán)境。

那么ZFP64是如何誘導(dǎo)M2型巨噬細(xì)胞增加的呢？

為了解答這個(gè)問(wèn)題，研究者將巨噬細(xì)胞與ZFP64hi HCC細(xì)胞共培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)這可以促使巨噬細(xì)胞上調(diào)表達(dá)CD206、CD163 和Arg1等M2巨噬細(xì)胞的標(biāo)志物，同時(shí)還會(huì)上調(diào)表達(dá)免疫抑制細(xì)胞因子IL-10和TGF-β1；共培養(yǎng)后的巨噬細(xì)胞可以強(qiáng)烈地抑制T細(xì)胞增殖與活化。此外，趨化實(shí)驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)ZFP64hi HCC促進(jìn)巨噬細(xì)胞的趨化募集。

以上的研究結(jié)果說(shuō)明ZFP64hi HCC可以通過(guò)誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞M2極化和促進(jìn)巨噬細(xì)胞趨化募集兩種機(jī)制，增加腫瘤內(nèi)M2巨噬細(xì)胞數(shù)量。

那么ZFP64hi HCC細(xì)胞為什么能夠招募并且誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞M2極化呢？

由于ZFP64是一種轉(zhuǎn)錄因子，那么會(huì)不會(huì)是它調(diào)控了某種重要的基因表達(dá)，以此調(diào)控巨噬細(xì)胞呢？

為了證明上述猜測(cè)，研究者通過(guò)RNA測(cè)序以及ChIP-seq技術(shù)結(jié)合細(xì)胞系實(shí)驗(yàn)，尋找ZFP64的靶基因。最終發(fā)現(xiàn)，ZFP64可以促進(jìn)CSF1的轉(zhuǎn)錄激活。

研究人員通過(guò)共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，敲低腫瘤細(xì)胞的CSF1后，巨噬細(xì)胞的Arg1、IL-10和TGF-β1表達(dá)水平顯著降低，并且趨化運(yùn)動(dòng)也減少。這些數(shù)據(jù)說(shuō)明，ZFP64通過(guò)激活CSF1的轉(zhuǎn)錄，從而促進(jìn)巨噬細(xì)胞的招募與M2極化。

那么ZFP64的活性又是受誰(shuí)的調(diào)控呢？

接下來(lái)研究團(tuán)隊(duì)探究了ZFP64活性的調(diào)控機(jī)制，發(fā)現(xiàn)PKCα可以磷酸化ZFP64第226位絲氨酸，從而促進(jìn)ZFP64核定位與轉(zhuǎn)錄激活能力。因此，PKCα、ZFP64和CSF1組成了一個(gè)完整的免疫逃逸信號(hào)軸。

對(duì)臨床隊(duì)列的回顧性研究發(fā)現(xiàn)，HCC患者PKCα/ZFP64/CSF1軸的激活與不良預(yù)后相關(guān)，并且與PD-1抑制劑治療效果呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)。

既然已經(jīng)知道了以上的機(jī)制，那么臨床上該怎么解決PKCα/ZFP64/CSF1軸引起的PD-1抑制劑耐藥問(wèn)題呢？

研究者嘗試使用PKCα抑制劑G？6976抑制這條信號(hào)軸。他們發(fā)現(xiàn)，G？6976單藥治療就可以抑制腫瘤生長(zhǎng)，并改善腫瘤免疫微環(huán)境。若是將G？6976與PD-1抑制劑聯(lián)用，則可以取得更好的療效。更為重要的是，研究者發(fā)現(xiàn)使用已經(jīng)批準(zhǔn)的多激酶抑制劑侖伐替尼與PD-1抑制劑聯(lián)用，也能顯著地改善治療效果。

既然CSF1是PKCα/ZFP64/CSF1軸的最終效應(yīng)因子，那么抑制CSF1信號(hào)是否能發(fā)揮很好的效果？為了探究這個(gè)可能性，研究人員使用CSF1R抑制劑BLZ945對(duì)荷瘤小鼠進(jìn)行治療，發(fā)現(xiàn)單用BLZ945就能很好的抑制腫瘤生長(zhǎng)，若將其與PD-1抑制劑聯(lián)用，則可以極大地改善PD-1抑制劑的療效。（生物谷Bioon.com）