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新冠檢測,如何控制核酸污染

 bluewhale 2021-02-13

來源:小桔燈網(wǎng)

臨近春節(jié),《冬春季農(nóng)村地區(qū)新冠肺炎疫情防控工作方案》要求返鄉(xiāng)人員需持7天內(nèi)有效新冠病毒核酸檢測陰性結(jié)果返鄉(xiāng),返鄉(xiāng)后實行14天居家健康監(jiān)測,期間不聚集、不流動,每7天開展一次核酸檢測。此外,醫(yī)院與食品檢測機構(gòu)也開展了場地、食品、外包裝等的新冠核酸檢測,以監(jiān)控新冠傳染途徑。

在大規(guī)模新冠核酸檢測中,出現(xiàn)了少量假陽性的誤報。這些假陽性報告會給新冠監(jiān)控帶來錯誤的指導(dǎo),一旦錯誤采取隔離/封閉措施,極大干擾相關(guān)企事業(yè)單位的正常運營。檢測前后及處理花費的人力和物力也浪費社會資源,擠占了原本可用于正確防控的資源。

這些假陽性結(jié)果大部分是由核酸污染造成的,其來源主要有:1、PCR產(chǎn)物污染;2、克隆質(zhì)粒污染;3、樣本污染;4、試劑污染。PCR會將極少量新冠基因進行指數(shù)復(fù)制,操作不當(dāng)時,這些被大量增值的新冠核酸會以氣溶膠形式被釋放出來,污染整個實驗室。在進行質(zhì)??寺『统樘釙r,高濃度質(zhì)粒容易以氣溶膠形式污染實驗室。采樣樣本處理/放置不當(dāng)時,被其他樣本或氣溶膠污染。檢測試劑生產(chǎn)或使用不當(dāng)時,被氣溶膠或其他方式污染。

見擴展閱讀:美國CDC檢測試劑盒污染;滅活病毒暴露污染樣本;核酸檢測氣溶膠污染

核酸污染預(yù)防:
1、設(shè)置合理的實驗室布局,一般可分為1)試劑準備區(qū),2)樣本制備區(qū),3)核酸擴增區(qū),4)產(chǎn)物分析區(qū),qPCR這類不需要電泳分析的可將產(chǎn)物分析區(qū)與核酸擴增區(qū)合并。
2、每個步驟都在相應(yīng)的實驗區(qū)進行,每個區(qū)域內(nèi)實驗器材、物品不能共用,每個區(qū)完全隔離和獨立通風(fēng),控制空氣流動方向。如條件不足,也必須將擴增區(qū)和分析區(qū)與試劑準備和樣本制備區(qū)隔離。最后廢棄物處理區(qū)必須遠離以上實驗區(qū)。
3、實驗人員、物料須嚴格單向流動,即只能從準備區(qū)到擴展區(qū)和分析區(qū),避免產(chǎn)生交叉污染。
4、定期進行陰性質(zhì)控檢測,在大規(guī)模檢測時,必須添加陰性樣本,陰性對照品,無模板對照,保證出現(xiàn)污染時可立即發(fā)現(xiàn)。
5、使用封閉擴增的檢測方法,如熒光定量PCR,并在擴增完成后不能打開試管。普通PCR和一些等溫擴增方法需要開蓋,很容易產(chǎn)生氣溶膠污染。(Novoprotein 熒光定量PCR,Cat.E096/E094)
6、實驗管理操作嚴格規(guī)范:在通風(fēng)櫥/超凈工作臺操作,實驗前/后即時擦拭、清潔、消殺實驗臺,實驗中使用一次性手套,如有污染可能,立即替換手套,移液槍吸取液體輕柔,輕輕吹打,避免飛濺,打開管蓋時動作輕緩,漩渦震蕩后,離心甩下液滴。使用帶濾芯槍頭,避免液體被吸入移液槍,所有實驗物品盡可能提前分裝成小包裝,并預(yù)先滅菌和分裝好。實驗廢棄物統(tǒng)一處理。

7、使用dUTP+UDG酶防污染體系:在PCR中使用dUTP部分代替dTTP,使PCR產(chǎn)物中摻入U。在第二次PCR擴增前,使用UDG酶處理PCR反應(yīng)液,可打斷上一次PCR產(chǎn)物中的U,使其無法污染第二次PCR擴增。(Novoprotein 熱敏UDG,Cat.E063)

核酸污染處理:
發(fā)現(xiàn)核酸污染,立即暫停相關(guān)實驗/檢測,對實驗場所、儀器設(shè)備進行徹底的清潔/消殺/去核酸處理,更換相關(guān)試劑、耗材,實驗人員更換衣物并進行核酸去除。
常用的核酸污染去除方法有:紫外照射、酒精擦拭、通風(fēng)等。紫外照射可打斷核酸,但對打斷小于200bp的片段效果不佳。酒精無法消化核酸,擦拭抹去表面核酸時容易殘留。通風(fēng)可將空氣中氣溶膠排出,但無法清除表面殘留,而且需要很長時間。

因傳統(tǒng)的核酸污染去除方法并不能完全去除核酸污染,《醫(yī)療機構(gòu)新型冠狀病毒核酸檢測工作手冊(試行)》指出,為避免氣溶膠等核酸污染造成的檢測假陽性,可采用核酸清除劑等試劑清除實驗室殘留核酸。

Novoprotein核酸污染去除劑(Cat.M126)降解所有核酸,完全清除掉核酸污染:

使用不同方法去除核酸污染,再進行qPCR擴增檢測,M126完全消除核酸

  

M126完全消除DNA及RNA

核酸污染是實驗室、生產(chǎn)車間常見的污染事故,嚴重時會導(dǎo)致實驗室、生產(chǎn)車間封停整頓。在新冠疫情之下,每一個核酸檢測陽性都會被極度重視,并采取更嚴格的處理措施,一旦相關(guān)單位被檢測出假陽性,將面臨全面檢測排查和停業(yè)整頓以及人員隔離檢測,會嚴重影響相關(guān)單位的運營,也浪費了疾控中心、檢測機構(gòu)、排查/隔離/封鎖單位的人力和物力。所以必須重視核酸污染,并且采取切實有效的手段預(yù)防、控制和處理核酸污染。

相關(guān)產(chǎn)品:

熒光定量試劑:E096/E094

熱敏UDG酶:E063

核酸污染清除劑:M126

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