關(guān)鍵詞： 庚型肝炎病毒；致病性；研究進展 分類號 R512.6 目前公認(rèn)的肝炎病毒共有五種，即HAV、HBV、HCV、HDV、HEV。但至少還有20％的病毒性肝炎，其病原不明，稱為非A-E肝炎。在第30屆歐洲肝臟研究年會上，首次報告了庚型肝炎病毒（HGV／GBV-C）。但近年學(xué)者對HGV的致病性提出了截然不同的兩種觀點。一種認(rèn)為，HGV是一類新的肝炎病毒，其可致病。而另有人則對HGV的致病性提出了質(zhì)疑，甚至認(rèn)為HGV不是肝炎病毒。本文主要介紹近三年圍繞HGV爭論的有關(guān)進展。 1 病原學(xué) 1966年Deinhardt等用一名因手術(shù)意外創(chuàng)傷而患急性肝炎的外科醫(yī)師（G?B）的血清靜脈內(nèi)感染狨猴和絹毛猴，導(dǎo)致該兩種動物發(fā)生肝炎，且該傳染性血清可在狨猴和絹毛猴體內(nèi)連續(xù)傳代感染。因此，將這種人源性傳染性血清稱為GB因子〔1〕。1995年Abbott公司的Simons等用差式聚合酶鏈反應(yīng)在感染GB因子的絹毛猴急性期血漿中發(fā)現(xiàn)了兩種病毒RNA序列，因與黃病毒屬關(guān)系密切，而與HCV的同源性相差較遠(yuǎn)，而將之分別命名為GBV-A和GBV-B，二者均為有包膜的正鏈RNA病毒。隨后Simons用重組蛋白建立的ELISA技術(shù)檢測非A-E肝炎病人的血清，發(fā)現(xiàn)一名西非病人血清抗GBV-A和GBV-B抗體反應(yīng)陽性，用代表性差異分析擴增得到的為一個黃病毒樣基因產(chǎn)物。該產(chǎn)物在核苷酸水平上與GBV-A，GBV-B和HCV的同源性分別為59％，47.9％和53.7％，而在氨基酸水平上同源性為64.2％，50.4％和57.3％。經(jīng)檢索發(fā)現(xiàn)，該基因序列與已發(fā)表且被公認(rèn)的基因序列無任何同源性，因此將該序列所代表的病毒命名為GBV-C〔2〕。1995年美國Kim與Bradley報告，在一名輸血后非A-E肝炎病人血中也發(fā)現(xiàn)一個新的黃病毒樣RNA序列，在第三屆丙型肝炎及相關(guān)病毒會議上被建議暫稱為庚型肝炎病毒（HGV）。Ohba用聚類分析法研究證明，GBV-C與HGV的核苷酸與氨基酸同源性分別為85％和95％，故是同一種病毒的兩個不同分離株，目前帶用HGBV-C／HGV表示；GBV-A與GBV-C／HGV親緣關(guān)系較近，而GBV-B與HCV親緣關(guān)系較近〔3〕。Mukaide用RELP法對來自不同國家的33例GBV-C／HGVRNA研究，認(rèn)為HGV目前可能有三種亞型：GBV-C（G-1），HGV（G-3）和G-2。其中G1比G3進化早，G3主要分布于北美、亞歐，G2僅在亞洲發(fā)現(xiàn)。中野等搜集日本及世界34個國家的2918份樣本中所得HGV感染分離株，以RFLP法進行分類，其結(jié)果如附圖〔4〕。 附圖 HGV基因型的地理分布， 李伯安等對中國HGVNS區(qū)部分基因序列變異研究發(fā)現(xiàn)，HGVNS5區(qū)第7820～7960核苷酸間的5端較3端核苷酸及其編碼氨基酸變異率高。與Linnen報道的美國株相比，中國人群之間HGVNS5區(qū)的同源性較大，與美國株的同源性較小。作者認(rèn)為，HGV核苷酸的變異可能與地域因素有關(guān)?，F(xiàn)有資料證明，HGV屬單股正鏈RNA病毒，基因組全長約9.4kb，僅有一個完整的開放讀碼框架（ORF），編碼為長約2900個氨基酸的多蛋白前體。該前體蛋白經(jīng)病毒和宿主細(xì)胞蛋白酶水解后可形成不同的結(jié)構(gòu)和功能蛋白。編碼結(jié)構(gòu)蛋白的基因序列中存在4個明顯的真核信號序列切割位點。其中C／E1的天門冬酰胺-半胱氨酸-半胱氨酸間為第1個切割位點，其余3個分別位于E1（第80～267位氨基酸）、E2（第268～645位氨基酸）和P7（第644～704位氨基酸）蛋白。在非結(jié)構(gòu)蛋白中，NS2／NS3區(qū)的水解由位于NS2的羧基端和NS3的氨基端的蛋白酶完成。此外HGV還存在絲氨酸蛋白酶原，提示絲氨酸蛋白酶在非結(jié)構(gòu)蛋白的加工中起作用。在編碼蛋白的兩側(cè)分別為5?-非編碼區(qū)（5?-NCR）和3?非編碼區(qū)（3?-NCR）?；蚪M5端的結(jié)構(gòu)基因依次編碼核心蛋白（C），包膜蛋白（E1、E2）等。3?端的非結(jié)構(gòu)基因區(qū)編碼非結(jié)構(gòu)蛋白，其中NS3區(qū)編碼病毒超Ⅱ組解旋酶，鋅蛋白酶和絲氨酸蛋白酶，NS5b編碼RNA依賴的RNA聚合酶。5?-NCR和3?-NCR是基因組中最保守的區(qū)域，其次是NS3，NS4b和NS5b。3?-NCR的保守區(qū)可能參與二級結(jié)構(gòu)的形成，5?-NCR含有4個高度保守區(qū)域，可能參與發(fā)夾結(jié)構(gòu)的形成。這些二級結(jié)構(gòu)的維系有可能限制基因的變異，從而使其相對保守。這在病毒復(fù)制或基因表達中起著相當(dāng)重要作用，對利用PCR檢測HGV的引物選取也具有一定意義〔5〕。 2 流行病學(xué) 2.1 感染率 各學(xué)者報道的HGV人群感染率差異較大，茲將部分材料列于表1～3〔6～8〕。差異的原因除樣本來源差異外，試制和檢測方法不同，尤其是采用的引物不同是一個重要原因，見表4～5〔7〕。Kao比較了高度保守的5末端區(qū)（5 UTR），囊膜區(qū)2（E2）和非結(jié)構(gòu)區(qū)3（NS3）的探針對200例高危人群標(biāo)本聯(lián)合測定的結(jié)果，其陽性率為21.5％。以5?-UTR，NS3與E2探針檢測的陽性結(jié)果分別與之對比，符合率分別為100％，98％和84％。Kao認(rèn)為5?-UTR區(qū)引物對GBV-C／HGVRNA測定更特異，其敏感性是NS3與E2引物的10～100倍〔9〕。 表1 GBV┐C／HGV在各種肝炎高危人群的檢出率（％） 地區(qū) 獻血員 靜脈藥癮 血透析者 表2 GBV┐C／HGV在各型肝病中檢出率（％） 地區(qū) 非A_E肝炎 HCV感染 HBV感染 表3 GBV┐C／HGV在暴發(fā)性肝炎中檢出率（％） 地區(qū) 非A_E暴肝 非A_E亞暴肝 2.2 傳播途徑 HGV感染主要經(jīng)血或腸道外途徑傳播。受血者、靜脈藥癮者，接觸血源者、血透者均為高危人群。其已知的主要傳播途徑為： 2.2.1 經(jīng)血液傳播 Feinman等檢測20例非A-C輸血后肝炎病人血清，其中3例在接受輸血前血清HGVRNA均陰性，在輸血后6～24周血清HGVR-NA轉(zhuǎn)陽性。追蹤其相應(yīng)的供血員，并進行NS5PCR產(chǎn)物的序列分析，3例HGVRNA陽性者與其相應(yīng)供血員的HGVRNA序列完全相同，證明為血液傳播〔10〕。Dawson報告西非志愿獻血員中ALT升高者HGV陽性率3.9％，正常者為0.8％，而商用職業(yè)供血員中HGV陽性率高達12.9％。王氏報告在北京檢測205例商用職業(yè)供血員和205名志愿獻血員，其HGVRNA陽性率分別為8％和1％，與HCV的陽性率6％與0％相接近。Jarvis對112名血友病人，57名低γ球蛋白血癥，64份不同批號的凝血因子濃縮物與免疫球蛋白制劑進行檢查發(fā)現(xiàn)，供血員HGV感染率3.2％。在非病毒滅活法制備的Ⅷ因子和Ⅸ因子濃縮物中，HGV陽性率分別為16／17和6／6。 表4 不同作者檢測HGVRNA自行合成的內(nèi)外引物序列 作者 5_NCR外引物 內(nèi)引物 表5 不同作者對肝炎患者血清HGVRNA檢出率（％） 作者 各種肝炎例 HGV? 非A_E肝炎 HGV? 試劑來源 接受這種濃縮物制劑的95名血友病人中14％HGV陽性。在37名長期接受免疫球蛋白者中2例HGV陽性。Tsuda報告印尼的58名持續(xù)血透病人，32例（55％）HGV陽性，遠(yuǎn)高于慢肝病人（5％，P＜0．001）為血透為高危HGV感染因素。Shimizu研究35例開胸病人，平均受血（10．2±10．8）單位（1～35單位），術(shù)后2～4周12％HGV陽性。在3個病人所輸血中，至少有1個單位血有HGV，且與病人的HGV在NS3序列相似。3個病人均有ALT升高，內(nèi)2個超過2周以上。Pessoa研究因不明原因肝硬化而行肝移植的46名病人，HGV陽性率移植前為22％，移植后為67％。在移植后得肝炎的25名病人中，HGV陽性16人，陰性9人。Loiseau報告法國獻血員與受血者HGV感染情況。獻血員中陽性率4.2％，接受壓積紅細(xì)胞輸注的非免疫抑制病人為10.7％，接受靜脈輸注免疫球蛋白的普通免疫缺陷病人為8.7％，接受靜脈注射免疫球蛋白和細(xì)胞成份的骨髓移植病人為24.7％。故由輸注血制品、血透、手術(shù)、器官移植、骨髓移植等大劑量用血均為經(jīng)血傳播高危因素。 2.2.2 靜脈注射毒癮 德國的Schreier研究顯示靜脈藥癮者HGV陽性率高達49％。在21份HGV陽性標(biāo)本中，11份復(fù)合感染HCV3a，10例復(fù)合感染HCV1b。序列分析表明，HGV序列在核苷酸水平同源性為75％～81％，氨基酸水平為94％～100％。Wu報道中國南寧靜脈藥癮者中HGV陽性率為75％，遠(yuǎn)高于肝?。?5％）和供血員（2％）〔11〕。Mar-roae〔12〕報道18例HGVRNA陽性的慢肝病人中，75％為靜脈藥癮者。Feucht檢測9例HGV陽性孕婦，6例（66.7％）有靜脈毒品史。 2.2.3 性傳播 Wu報告對140名妓女測試結(jié)果，用套式PCR法測定有30名（21％）HGV陽性，用單純RT-PCR檢測，在上述30名中只有22名陽性（73％），與對照組相比（5％），差異有顯著性（P＜0．02）。多因素分析表明，性亂交次數(shù)每月超過120次是與HGV陽性率唯一有關(guān)的因素（P＜0．003）〔13〕。Stark研究靜脈藥癮（130人）、非靜脈藥癮的同性戀與雙性戀男（101人）和供血員（90人）中HGV感染率分別為33％、11％和2％，他認(rèn)為非靜脈藥癮者的性亂交亦是HGV傳播的重要途徑。Gi-anfranco研究93名意大利HIV感染者，其中靜脈藥癮者54例，雙性戀者28例，同性戀者11例，還有供血員144例，其HGV陽性率分別為42.6％，25％，0％和0.7％，證明雙性戀可傳播HGV，但性亂交的傳播率低于靜脈藥癮途徑。 2.2.4 母嬰傳播 Lopez-Alcorocho研究取自58例患慢乙肝（33例）和慢丙肝（25例）的兒童的血清與肝組織標(biāo)本，其中9例（15％）HGVRNA陽性。同時研究2名HGV陽性兒的29名親屬的血清標(biāo)本，結(jié)果3名陽性。1名患兒的母親與兄弟血為陽性，患兒血中HGVRNA序列與母血中序列同源性為93％，與兄弟血中序列同源性為88％。另1名患兒血中序列與母血中序列的同源性為94％，證明存在母嬰傳播〔14〕。Fischler報告由HGV陽性母所生的雙胞胎子女中，兒子血在出生后3個月陽性，其孿生阻妹血陰性。HGV序列分析證明，兒子與母親的HGV序列存在遺傳關(guān)系〔15〕。Feucht報告9名HGVRNA陽性孕婦所生嬰兒中3例HGVRNA陽性，母嬰垂直傳播率33.3％。3例HGV感染嬰兒均出現(xiàn)黃疸或肝炎的生化或臨床癥狀。 2.2.5 Aikawa對17例紋身但無吸毒史的HCV相關(guān)慢性肝病的男病人檢測，有1例（6％）HGVR-NA陽性。他認(rèn)為紋身亦可能是一種傳播率很低的途徑。李氏對福建沿海地區(qū)共計559戶（1～59歲，1653名居民），以國產(chǎn)EIA試劑檢測抗HGV進行自然人群的HGV感染情況調(diào)查，流行率為1.96％，標(biāo)化流行率為1.86％。流行率在小年齡組較低，有隨年齡增高的趨勢，50歲組最高（3.33％），尤其是農(nóng)村50歲組居民感染最高（8.33％）。男女性別間、農(nóng)戶與非農(nóng)戶間、工人與農(nóng)民間、文盲與非文盲間、城鄉(xiāng)間、地區(qū)間等其流行率差異均無統(tǒng)計學(xué)意義。HGV感染與肝病史無明顯相關(guān)，但與輸血史有明顯相關(guān)。HGV與HCV、HBsAg、HEV合并感染的相對危險度（RR）值分別為1.37，0.38和2.41。作者認(rèn)為不同年齡組人群對HGV普遍易感〔16〕。 2.2.6 動物實驗 程云等用HGV感染住院病人HGVRNA陽性血清感染實驗動物恒河猴，并以傳代觀察檢測感染動物的血清HGVRNA、ALT水平及感染動物肝穿組織中病理變化。實驗結(jié)果表明，HGV可感染恒河猴，并在其體內(nèi)長期存在和引起輕度自限性肝損傷，而且隨著傳代和時間延長，盡管有持續(xù)的病毒血癥存在，但HGV病毒的致病毒力有趨于減弱與消失的可能〔17〕。貌氏用1名HGVRNA陽性，HBV、HCV均陰性的健康獻血員血漿感染2只恒河猴，并取第一代猴感染后第6周的血再感染1只第2代猴。然后用第二代猴感染后6周血感染2只第三代猴。以RT-PCR檢測受染猴血清HGVR-NA，在感染后6周即轉(zhuǎn)陰。肝組織病理發(fā)現(xiàn)，感染猴中可出現(xiàn)不同程度的病毒性肝炎樣病理改變，肝細(xì)胞水腫，少數(shù)氣球樣變，肝小葉內(nèi)可見點狀壞死、壞死灶內(nèi)及血竇壁上單個核細(xì)胞浸潤，Kupffer細(xì)胞略增生，匯管區(qū)略擴大，見較多單個核細(xì)胞彌漫性浸潤及成纖維細(xì)胞增生。將獻血員與感染猴的HGVRNA序列相比，同源率為95.83％。證明HGV在恒河猴中可以顯性或隱性感染存在，有致病性。 參 考 文 獻 1 Deinhardt e，Holmes a W，Cappes r B et al．Studies on the transmissions of human viral hepatitis to marmoset monkeys．J Exp Med，1967；125：673 2 Simons j N，Leary t P，Dawson g J et al．Isolation of nov-elvirus-like sequences associated with human hepatitis．Nature Med，1995；1：564 3 ohba K，Mizokami m，Orito e et al．Evolutionary rela- tionship between hepatitis Gvirus．Hepatology，1996；24（pt2）：227A 4 中野達德，溝上雅史．GBV-C／HGVRNAの檢出法，定量法，genotyping法の開發(fā)とその臨床意義．肝月藏，1998；39（2）：68 5 戚中田，任浩，朱分祿．庚型肝炎病毒（HGV）研究進展．見：中國微生物學(xué)會、香港微生物及傳染病學(xué)會編．基礎(chǔ)與臨床病毒學(xué)會議論文集，基礎(chǔ)與臨床病毒學(xué)會議，香港，1998，香港：香港大學(xué)出版社，1998：40～41 6 趙國強，邢培清，程勉學(xué)等．河南省庚型肝炎病毒的感染情況和部分基因序列分析的初步研究．見：中國微生物學(xué)會、香港微生物及傳染病學(xué)會編．基礎(chǔ)與臨床病毒學(xué)會議論文集，基礎(chǔ)與臨床病毒學(xué)會議，香港，1998；香港：香港大學(xué)出版社，1998：44 7 黃愛龍，張建軍，曾維群等．重慶地區(qū)HGVRNA檢測及部分序列分析．中華肝臟病雜志，1997；5：5 8 heringlak S，Osterkamp S，Trautwein C et al．Associa-tion between fulminan thepatic falure and strain of G B virus C．Lancet，1996；348：1626 9 kao J H，Chen p J．Amplification of GB virus-C／hepatits Gvirus RNA with primers from different regions of the viralgenome．J Med Virol，1997；51（4）：284 10 feinman S U，Kim j P，Blajehman m A et al．Posttrans-fusion hepatits G（PTH-G）．Hepatology，1996；24（pt2）：415A 11 wu RR，Mizokami m，Cao K et al．G B virus C／hepatitis G virus in fectionin southern China．J Infect Dis，1997；175（1）：168 12 marroae A，Shib j W K．Makatsuji yetal．Hepetitis gvirus（HGV）among patients with chronic hepatitis B．Hepatolog，1996；24（pt2）：225A 13 wu Jc，Sheng w Y，Huang Y H et al．Prevalence and risk factor analysis of GBV-C／HGV infection in prostitutes．J Med Virol，1997；52（1）：83 14 lopez-Alcorocho J M，Millan a，Gareia-Trevijane e R et al．Detection of hepatitis GB virus typec RNA inserun and liver from children with viral hepatitis B and C．Hepatology，1997；25（5）：1258 15 fischler B，Lara c，Chen m et al．Genetic evidence form other to infant transmission of hepatitis G virus．J In-fect Dis，1997；176：281 16 李凌奮，江家驥，張荔等．福建沿海地區(qū)自然人群庚型肝炎病毒（HGV）感染血清流行病學(xué)調(diào)查．見：中國微生物學(xué)會、香港微生物及傳染病學(xué)會編．基礎(chǔ)與臨床病毒學(xué)會議論文集，基礎(chǔ)與臨床病毒學(xué)會議，香港，1998，香港：香港大學(xué)出版社，1998：44～45 17
程云，張文志，李伯安等．庚型肝炎病毒（HGV／GBV-C）感染實驗動物――恒河猴及傳代的血清學(xué)和病理組織學(xué)的實驗研究．見：中國微生物學(xué)會、香港微生物及傳染病學(xué)會編．基礎(chǔ)與臨床病毒學(xué)會議論文集，基礎(chǔ)與臨床病毒學(xué)會議，香港，1998，香港：香港大學(xué)出版社，1998：42～43 |
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