染色質(zhì)免疫共沉淀技術(shù)(Chromatin Immunoprecipitation,ChIP)也稱結(jié)合位點分析法,是研究體內(nèi)蛋白質(zhì)與DNA相互作用的有力工具,通常用于轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點或組蛋白特異性修飾位點的研究。 實驗流程 (1)甲醛交聯(lián)整個細胞系(組織),即將目標(biāo)蛋白與染色質(zhì)連結(jié)起來;(這一步一般會檢測下交聯(lián)情況) (2)分離基因組DNA,并用超聲波將其打斷成一定長度的小片段; (3)添加與目標(biāo)蛋白質(zhì)特異的抗體,該抗體與目標(biāo)蛋白形成免疫沉淀免疫結(jié)合復(fù)合體;(chip級別的抗體,會有效率問題存在,很考驗抗體質(zhì)量和操作) (4)去交聯(lián),純化DNA即得到染色質(zhì)免疫沉淀的DNA樣本,準(zhǔn)備測序; (5)將準(zhǔn)備好的樣本進行深度測序(一般會準(zhǔn)備空白對照,排除假陽性,有兩種,1.input DNA:不用任何抗體拉的DNA;2.mock IP DNA:用不含有抗體的DNA) 優(yōu)缺點 |
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