產(chǎn)品簡(jiǎn)介：MitoTracker Red CMXRos是一種紅色熒光染料，用于活細(xì)胞線粒體的染色。MitoTracker Red CMXRos是一種細(xì)胞滲透型的X-rosamine衍生物，包含標(biāo)記線粒體的弱巰基反應(yīng)性的氯甲基官能團(tuán)。本品是一種氧化型的紅色熒光染料，只需簡(jiǎn)單孵育細(xì)胞，即可被動(dòng)運(yùn)輸穿過(guò)細(xì)胞膜并直接聚集在活性線粒體上，該染料的積累取決于膜電位的高低。一旦線粒體被染色后，還能根據(jù)后續(xù)實(shí)驗(yàn)的需求進(jìn)行固定（醛類固定劑如甲醛）和透化（醛類去污劑如Triton X-100），探針依然維持在細(xì)胞內(nèi)。因?yàn)镸itoTracker Red CMXRos的紅色熒光與其他的綠色熒光探針具有良好的分辨率，因此本品適合雙標(biāo)實(shí)驗(yàn)。
雖然傳統(tǒng)的線粒體熒光探針如TMR和羅丹明123，也能很容易的聚集在功能線粒體上，但是一旦線粒體膜電位喪失即會(huì)被洗掉，從而在一些需要細(xì)胞進(jìn)行醛類固定或者包含線粒體能量狀態(tài)影響因子的實(shí)驗(yàn)中，使其應(yīng)用大受限制。
基本信息：

產(chǎn)品應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)實(shí)測(cè)：（由美侖細(xì)胞生物學(xué)項(xiàng)目組獨(dú)立完成）
本品配成 1mM 儲(chǔ)存液后為紫色色液體，溶液澄清度且顏色檢測(cè)無(wú)可見(jiàn)異物；然后進(jìn)行熒光染色檢測(cè)：工作條件：熒光顯微鏡，C6 細(xì)胞，400×，工作濃度 500nM，孵育45min。
結(jié)果：經(jīng)染色，在40倍物鏡下可看到細(xì)胞內(nèi)線粒體被染上清晰的紅色熒光。

儲(chǔ)存條件：-20℃，避光防潮密閉干燥

操作說(shuō)明（僅供參考） 

1. 儲(chǔ)存液的配制

本品是以粉末形式提供，使用前需將本品回溫至室溫。 之后使用細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)別的無(wú)水DMSO將其充分溶解至終濃度1 mM，即向50 μg粉末中加入94 μL DMSO即可。
【注】可根據(jù)單次的使用量將儲(chǔ)存液分裝后放到-20℃避光，避免反復(fù)凍融。

1. 工作液的配制

【注】根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖褂貌煌奶结槤舛?，以下的起始操作條件僅作參考，可根據(jù)細(xì)胞類型和其他的相關(guān)因素如細(xì)胞或組織的透化等進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整。
用適當(dāng)?shù)木彌_液或者細(xì)胞培養(yǎng)基稀釋1 mM儲(chǔ)存液至工作液濃度。一般推薦使用濃度為25-500nM。對(duì)于后續(xù)需要做固定或透化的樣本，推薦工作濃度為100-500 nM，為了降低過(guò)度加載導(dǎo)致的潛在偽影和線粒體毒性，在不影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的前提下應(yīng)盡可能低濃度染色。另外，濃度過(guò)高也可能對(duì)其他細(xì)胞結(jié)構(gòu)進(jìn)行染色。

1. 染色及檢測(cè)

（1）貼壁細(xì)胞的染色
培養(yǎng)皿/板內(nèi)加入適量的培養(yǎng)基覆蓋蓋玻片進(jìn)行爬片培養(yǎng)。當(dāng)細(xì)胞長(zhǎng)至所需豐度，吸除培養(yǎng)液，加入37℃預(yù)熱的MitoTracker Red CMXRos染色工作液。在所使用細(xì)胞正常培養(yǎng)條件下孵育15-45 min（最佳孵育時(shí)間需優(yōu)化）。染色結(jié)束后，使用新鮮培養(yǎng)液或緩沖液替換上述染色液，即可將其置于熒光顯微鏡下觀察或熒光酶標(biāo)儀下讀數(shù)?；蛘哌M(jìn)行后續(xù)的固定和透化步驟，見(jiàn)步驟4。
（2）懸浮細(xì)胞的染色
離心收集細(xì)胞，吸除上清，利用37℃預(yù)熱的MitoTracker Red CMXRos染色工作液輕輕重懸細(xì)胞。在所使用細(xì)胞正常培養(yǎng)條件下孵育15-45 min（最佳孵育時(shí)間需優(yōu)化）。染色結(jié)束后，離心收集細(xì)胞，利用37℃預(yù)熱的新鮮培養(yǎng)液或緩沖液重懸細(xì)胞，被染色的細(xì)胞可用流式細(xì)胞儀、熒光酶標(biāo)儀、熒光顯微鏡進(jìn)行分析。
如果需要蓋玻片上固定化的細(xì)胞，那么可在鋪片前先用多聚賴氨酸（poly-D-lysine）包被載玻片或蓋玻片。 或者進(jìn)行后續(xù)的固定和透化步驟，見(jiàn)步驟4。

1. 固定和透化

（1）染色結(jié)束后，利用培養(yǎng)液或緩沖液清洗細(xì)胞。
（2）小心吸走清洗液。換用新鮮配制且預(yù)熱的含2-4%甲醛的緩沖液或培養(yǎng)液進(jìn)行細(xì)胞固定。經(jīng)驗(yàn)證，本染料MitoTracker? Red CMXRos由含3.7%甲醛的完全培養(yǎng)液于37℃孵育內(nèi)皮細(xì)胞15min能起到良好的固定效果。
（3）清洗細(xì)胞：吸除固定液，用適當(dāng)緩沖液沖洗細(xì)胞數(shù)次。
（4）細(xì)胞透化（可選）：
像ICC等實(shí)驗(yàn)需要細(xì)胞要做透化，則可將已固定的細(xì)胞直接加入含有去污劑如Triton X-100的緩沖液中孵育。透化結(jié)束后，用緩沖液清洗細(xì)胞即可進(jìn)行后續(xù)ICC實(shí)驗(yàn)。經(jīng)檢測(cè)，利用含0.2% Triton X-100的PBS孵育內(nèi)皮細(xì)胞10min可以達(dá)到良好的透化效果。另外，還可利用預(yù)冷的丙酮透化5 min，之后用PBS清洗細(xì)胞。經(jīng)驗(yàn)證，即使后繼沒(méi)有進(jìn)一步的抗體標(biāo)記，丙酮透化處理也可降低背景信號(hào)。

注意事項(xiàng)

• 熒光染料均存在淬滅問(wèn)題，請(qǐng)盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。
• 為了您的安全和健康，操作時(shí)請(qǐng)穿著實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套。
• 我司產(chǎn)品為非無(wú)菌包裝，若用于細(xì)胞培養(yǎng)，請(qǐng)?zhí)崆白鲱A(yù)處理，除去熱原細(xì)菌，否則會(huì)導(dǎo)致染菌。