昨日某大學(xué)一初入免疫學(xué)實驗室同學(xué)詢抗豬IgM二抗,不想小師妹以為小福只想多賣產(chǎn)品故意欺騙她:“我要的是二抗,不是單抗!” 今天小福就給大家講講什么是一抗什么是二抗。 在百度百科,我們查到: “一抗體就是能和非抗體性抗原(特異性抗原)特異性結(jié)合的蛋白。種類包括單克隆抗體和多克隆抗體。二抗體是能和抗體結(jié)合,即抗體的抗體,其主要作用是檢測抗體的存在,放大一抗的信號?!?/span> 在免疫學(xué)實驗中,通常我們檢測某個物質(zhì)(也就是抗原),需要先加入抗-抗原的抗體(primary antibody),再加入抗-Primary Antibody的抗體(Second Antibody),通常這個Second Antibody上標(biāo)記一個酶或者熒光素什么,這些酶和熒光素是作為信號呈現(xiàn)的;因為大部分實驗都是這樣一個構(gòu)架模式,所以這個一抗,二抗這個名字就是這么來的,這個名稱也非常便于表述,但是在比較正規(guī)的文獻中大家一般看不到一抗二抗的字眼,一般會這樣表述:比如我們用western blot 檢測GAPDH,一抗會表述為:mouse anti-GAPDH monoclonal Antibody,二抗會表述為:HRP Conjugated Goat anti-mouse Igs antibody。 再理一下:通常這個所謂的二抗的“二”,是由于它是抗-抗體的抗體,所以才稱它為“二”;這個抗-抗體的抗體也可以是單抗,這個應(yīng)該可以詮釋那位同學(xué)的疑惑吧。 如果在上述的實驗中,我們要檢測的抗原是免疫球蛋白(抗體),比如,檢測抗原human IgG1 Antibody ,實驗構(gòu)架可能是這樣的:首先加入的抗體為Rabbit anti-(human IgG1 antibody),再次加入的抗體可能為HRP Conjugated Goat anti-(Rabbit Igs Antibody) antibody。 這里誰是二抗誰是一抗是不是有點暈頭?其實在有些實驗中不一定非要指出誰是一抗誰是二抗,只需要回憶回憶猴子撈月亮的故事,后一個抗體抓住前一個抗體的“尾巴”,最后一個抗體把酶或者熒光素連起來,讓檢測信號可以高信噪比呈現(xiàn)這就完事了。 當(dāng)然,能夠在免疫實驗系統(tǒng)中一個抓另外一個“尾巴”的不僅僅是抗體,準(zhǔn)確的說應(yīng)該叫Binding Reagent,這里面大名鼎鼎的就是生物素系統(tǒng)-鏈霉親和素系統(tǒng),這個很多時候比二抗還好用,但是必須首先對一抗進行生物素標(biāo)記。 |
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