1．學(xué)會(huì)實(shí)驗(yàn)小鼠的抓取、固定和性別、年齡鑒定。

2．掌握小鼠的灌胃，皮下、肌肉、腹腔和尾靜脈注射方法。

3．掌握小鼠的常規(guī)采血方法和處死法。

二、實(shí)驗(yàn)器材和動(dòng)物

彎剪一把，眼科彎無鉤攝一把，單面刀片一片，1ml注射器兩個(gè)，5號(hào)針頭兩個(gè)，灌胃針頭一個(gè)，大號(hào)平鑷一把，棉簽4～6根，臘塊一個(gè)。試管架一個(gè)，試管四支，細(xì)塑料導(dǎo)管一根，小培養(yǎng)皿一個(gè)，干棉球若干，大頭針若干。75％酒精棉球，8％碘酒棉球。小鼠兩只(雌雄各一只)。

三、實(shí)驗(yàn)方法

1．性別鑒定

小鼠的性別主要靠觀察動(dòng)物肛門與生殖器之間的距離來區(qū)分，距離較遠(yuǎn)的為雄性，距離較近的為雌性(圖2-1)。

 
圖2-1  小鼠性別鑒定：左側(cè)為雄鼠，右側(cè)為雌鼠

2．年齡鑒定

小鼠主要由專門實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)場供應(yīng)，在那里每一種動(dòng)物都有生長的背景記錄。一般在領(lǐng)動(dòng)物時(shí)可直接向飼養(yǎng)員詢問，也可根據(jù)體重年齡相關(guān)曲線(圖2-2)間接查得。

 
圖2-2  大、小鼠年齡與體重間的關(guān)系

3．灌胃

操作者左手抓取并固定住小鼠。使其頭頸拉直，右手持接有灌胃針頭的注射器，針頭沿鼠右側(cè)嘴角，順著舌下插入口咽，針頭稍上撬便于通過食道進(jìn)入胃里，這時(shí)方可給藥。藥量為0.3ml，進(jìn)針過程中，若動(dòng)物有嘔吐動(dòng)作或強(qiáng)烈掙扎，則表明針頭插入氣管，這時(shí)，應(yīng)及時(shí)退針，不可推藥，待動(dòng)物恢復(fù)安靜后，再重復(fù)操作。

4．皮下注射

根據(jù)實(shí)驗(yàn)的需要，可以選擇任一部位做皮下注射，但一般都取背部、后肢和腹部等部位。注射時(shí)，操作者左手抓取和固定動(dòng)物，并暴露注射部位，右手持注射器，以約150角進(jìn)針到皮下后，針頭壓平，順皮下插入約1cm即可注射。

5．肌內(nèi)注射

小鼠的肌內(nèi)注射多在大腿外側(cè)肌肉進(jìn)行，而且注射液量很有限，小鼠一般最大注射量0.2-0.3ml，注射前需備皮，左手固定動(dòng)物，以150角刺入肌肉，回抽無血即可推出藥液。

6．腹腔注射

這是最常用的給藥方法。把動(dòng)物固定在左手掌內(nèi)，右手持注射器，以150角由腹部外生殖器上0.5～1cm處進(jìn)針，到皮下后壓平針頭，在皮下向前移動(dòng)針頭0.2～0.3cm后，再以450～600角刺入腹腔，若有明顯的落空感即說明已進(jìn)入腹腔，這時(shí)回抽無血方可注射。

7．尾靜脈注射

將鼠裝入鼠盒中，先用濕紗布擦凈尾巴，再用75％酒精棉球消毒。待酒精干后，左手拇指和食指捏住尾巴遠(yuǎn)心端，以適當(dāng)角度(150～300)對(duì)準(zhǔn)尾巴遠(yuǎn)端的血管進(jìn)針，當(dāng)針頭斜面基本進(jìn)入血管后使其平伸，然后輕輕推動(dòng)注射器栓，如阻力大，不可硬性推藥，如果推動(dòng)阻力很小，并能看到藥液順血管移動(dòng)，則可注完全部藥液。

 注意：
 (1)尾靜脈注射往往一次不能成功。但只要不使尾靜脈腫脹而造成血管模糊不清，均可由尾靜脈近心端依次重復(fù)注射，直到成功為止。

(2)注入藥物后退針要快，并用干棉球加壓止血1～2min。
   
8．摘眼球采血法
    有些需要血樣較多的實(shí)驗(yàn)可利用該法采血。我們知道眼球底部連于眶動(dòng)脈和眶靜脈，那么只要將眼球摘除，血液就會(huì)從血管內(nèi)流出。
其具體方法是，操作者左手抓住并固定鼠頭在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，稍使壓力使其眼球外突，右手持彎無鉤小鑷順勢(shì)去眼球，左手拇指和食指捏住并固定其頭部，右手迅速提起鼠尾和后肢，使鼠倒置。在收血小試管上，待其血流停止，即將鼠放回原處，有時(shí)動(dòng)物還能存活。本法采血較多，一般一次可得1ml左右，但缺點(diǎn)是動(dòng)物采血后多數(shù)死亡。

9．眼后眶靜脈叢導(dǎo)管法采血

采用一根細(xì)塑料管(一頭在火上拉細(xì)并剪成似針頭的斜面尖端)左手把鼠頭側(cè)位固定在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，右手持塑料管尖端刺入眼球和眼眶后界之間的后眼眶靜脈叢，將細(xì)管移入收血皿內(nèi)擺正，血便順管放出。這一技術(shù)放血量不大，而且導(dǎo)管上往往還要沾去一部分血，但其優(yōu)點(diǎn)是動(dòng)物很少死亡，血液不易污染，還可重復(fù)采血。

用這種方法不能采集到無菌的血樣，血液中可能混有眼窩內(nèi)的組織液和腺體分泌物，污染血樣。對(duì)同一只眼多次采血，可能引起一些并發(fā)癥，如眼出血、炎癥和失明等。另外，這種技術(shù)可能會(huì)對(duì)一些人視覺上產(chǎn)生不愉快的感覺。鑒于以上這些原因，有些國家禁止使用這種方法。

10．頸動(dòng)脈或頸靜脈采血法

將動(dòng)物乙醚吸入麻醉，背臥固定剪去頸部被毛，并用合適的抗生素擦凈。做頸動(dòng)脈、頸靜脈分離術(shù)，使其暴露清楚后，用注射針沿頸動(dòng)脈或靜脈平行方向刺入，抽取所需要血量，也可插入一塑料導(dǎo)管直接放血。采用這種方法，體重20g小鼠可采血1ml左右，體重300g大鼠可采血8～10ml。

11．股動(dòng)脈或靜脈采血法

麻醉動(dòng)物，背臥固定，切開左或右腹股溝的皮膚，做股動(dòng)脈或靜脈暴露分離手術(shù)，然后用注射器(或插管)采血。連續(xù)多次股動(dòng)脈采血時(shí)，則采血部位要選擇盡量靠遠(yuǎn)心端。本法采血量大致同頸動(dòng)脈或靜脈采血量。

12．尾尖采血

多用乙醚吸入麻醉后，剪去小鼠尾尖1～2mm(大鼠3～5mm)，然后自尾部向尾尖按摩，血從尾尖血管流出。為了采得較多的血，常將鼠尾泡于50℃水中，擦干后剪去尾尖。采血后用橡膠布扎尾尖進(jìn)行壓迫止血，亦可用電燒灼止血。

若需反復(fù)多次尾尖采血，則在每次采血時(shí)只剪去尾尖很少一段，采血后，先用棉球壓迫止血并立即用6％液體火棉膠涂于尾部傷口，使傷口外結(jié)一層火棉膠薄膜，保護(hù)傷口。當(dāng)然也可以采用交替切割尾靜脈方法取血，該法是用一鋒利的刀片在尾上切破一段靜脈，使血由切口流出。每次可采血0.3～0.5ml。三根尾靜脈可以從尾尖部開始交替切割，切割后用棉簽壓迫止血，約經(jīng)3d傷口結(jié)痂長好。

13．心臟采血

動(dòng)物背臥固定，剪去心前區(qū)被毛，常規(guī)消毒皮膚，在左側(cè)第3～4肋間，用左手食指觸摸到心臟搏動(dòng)，右手取注射器(4～5號(hào)針頭)，選擇心跳最強(qiáng)處進(jìn)針，當(dāng)針刺入心臟時(shí)，血液由于心臟跳動(dòng)的力量而自動(dòng)進(jìn)入注射器(圖2-3)。

14．腹主動(dòng)脈采血

將動(dòng)物乙醚吸入麻醉后背臥固定于臘板上，立即剖開腹腔，找到腹動(dòng)脈(圖2-4)(位于后腔靜脈左側(cè)沿著脊柱的正中線后行，其腹面有左腎靜脈通過)，用注射器采血即可。采血量一般小鼠可達(dá)1ml左右，大鼠10ml左右。

小鼠心臟采血

 
大鼠腹主動(dòng)脈示意圖