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Image J功能非常強(qiáng)大，大家可以看前幾期對的介紹，今天帶你解鎖老司機(jī)必會的Image J實(shí)用技巧，下面是針對螢光圖片的五個使用技巧。廢話不多說看下方介紹。 一、如何拆分與Merge多通道熒光圖片： File->Open->分別打開Red，Green， Blue三個通道的圖片：
Image -> Color -> Merge Channels可以Merge熒光圖片。 二、圖片與像素值互換： 圖片由許多像素點(diǎn)（Pixel）組成，每個像素點(diǎn)對應(yīng)有不同的像素值（Pixel values），如下圖所示：
方法為： Image J打開圖片：
Image菜單下，Transform，Image toresults，得到了對應(yīng)每個像素點(diǎn)的像素值：
同樣在Image菜單下，Transform，Results toimage可以把像素值的表格轉(zhuǎn)換為圖片。 三、熒光核漿比分析： 步驟： ImageJ打開分析圖片：
Image -> Color -> Split Channels拆分RGB通道 得到RGB三通道（此時R、G、B通道均為8-bit圖片）：
也可以使用Image-> Color -> Merge Channels將已拆分通道合并：
圖中兩個細(xì)胞有連接，以左邊入核明顯細(xì)胞為例。首先使用
不規(guī)則選框?qū)⒆筮吋?xì)胞框選中：
Analyze->Tools->ROI manager（感興趣區(qū)管理器），點(diǎn)擊Add：
選擇需要測量的參數(shù)：在ImageJ軟件Analyze下選擇Set Measurements設(shè)置測量參數(shù)，選擇Integrated density，Area，Limit to threshold（Image -> Adjust -> Threshold 調(diào)節(jié)閾值，紅色代表選中，選擇Limitto threshold只計算紅色選擇的面積），點(diǎn)擊OK。 Image -> Adjust -> Threshold 調(diào)節(jié)閾值，選擇所有陽性信號（紅色代表選中）：
Analyze，Measure，得到結(jié)果：
黃色ROI中的紅色的灰度值總和為177096，黃色中的紅色占黃色面積的51%。 如果不加黃色ROI，進(jìn)行同等條件的測量：
得到的結(jié)果不僅僅只有左邊這個細(xì)胞，其灰度值總和為254633，大于177096，紅色占整張圖片的面積百分比為14.9%，遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于51%。 此時我們已經(jīng)得到單個細(xì)胞總的熒光強(qiáng)度（灰度值）A=177096。接下來需要計算核內(nèi)的熒光強(qiáng)度B，用總的熒光強(qiáng)度A-B得到胞漿熒光強(qiáng)度C。 對細(xì)胞核圖片同樣進(jìn)行Image -> Adjust-> Threshold 調(diào)節(jié)閾值，選擇所有陽性信號：
Analyze-> Analyze particles分析粒子得到的結(jié)果添加到ROI：
ROI-3是我們需要分析的細(xì)胞核，在上述已經(jīng)閾值選定的綠色熒光通道中點(diǎn)擊ROI-3可在圖中顯示細(xì)胞核輪廓，Analyze，Measure（快捷鍵Ctrl+M），得到核內(nèi)的熒光強(qiáng)度B：
核漿比=B/(A-B)=98684/(177096-98684)=1.26。 四、熒光圖片加偽彩： 加偽彩是對灰度圖片而言。Lookup tables（LUT）根據(jù)像素點(diǎn)不同的像素值顯示為不同的顏色，即為偽彩，如下圖所示：
打開灰度圖片或者將RGB通道圖片拆分為對應(yīng)通道的灰度圖片，在Image菜單下選擇Lookup tables（Fire）：
有多種LUT可供選擇，在Image，Color下點(diǎn)擊ShowLUT：
在Analyze下點(diǎn)擊Tools，選擇Calibration Bar，即可給偽彩圖片添加Bar（顯示不同顏色所對應(yīng)的灰度值）：
五、調(diào)整熒光顯示效果： 打開兩通道層掃共聚焦熒光圖片如下：
目前看起來效果并不好如何進(jìn)行調(diào)整？ 步驟：
得到如下效果：
得到可以顯示不同層面的最大強(qiáng)大的熒光圖片，效果如下：
Image，Stacks，3D projection：
得到沿著Y軸旋轉(zhuǎn)的動圖：
Save as，Gif，保存為動圖展示：
今天分享的Image J實(shí)用技巧，希望對大家有所幫助！更多相關(guān)Image J實(shí)用技巧大家可以留言給我們，一起學(xué)習(xí)進(jìn)步。 |
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