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CTC（循環(huán)腫瘤細胞，Circulating Tumor Cell）是存在于外周血中的各類腫瘤細胞的統(tǒng)稱。因自發(fā)或診療操作從實體腫瘤病灶（原發(fā)灶、轉(zhuǎn)移灶）脫落，大部分CTC在進入外周血后發(fā)生凋亡或被吞噬，少數(shù)能夠逃逸并發(fā)展成為轉(zhuǎn)移灶，增加惡性腫瘤患者死亡風(fēng)險。CTC代表的是完整的、有活性的細胞，科學(xué)家可以提取DNA、RNA、蛋白質(zhì)，進行不同層次水平的檢測，更加完整的實時監(jiān)測腫瘤動態(tài)、評估治療效果，實現(xiàn)個體化治療。  CTC有哪些特點？  
目前CTC分離的方法 目前市面上CTC富集的方法主要有兩種：生物富集法和物理富集法。前者主要是基于腫瘤細胞表面特異性表達的marker，利用磁珠結(jié)合的抗體進行陽性富集或陰性富集，也可采用流式細胞分析儀進行分選。后者主要基于細胞的直徑進行富集，比如使用直徑為8微米的濾膜過濾去除白細胞分離CTC。 今天小編給大家介紹的是基于生物富集+顯微成像挑選兩步法進行CTC的分離。目前已經(jīng)有研究者使用該方法成功進行胰腺癌、乳腺癌和胃食管癌CTC的分離。 在2017年Lapin等發(fā)表的文章中，作者以21位胰腺癌患者的56份血樣作為研究對象，首先使用密度梯度離心的方法獲得單核細胞，然后用鏈霉親和素結(jié)合的beads與標記了生物素結(jié)合的CD45、CD16、CD19、CD163以及CD235/GYPA抗體的細胞進行孵育，去除beads結(jié)合的單核細胞和殘留的紅細胞，未結(jié)合beads的細胞即富集好的可能含有胰腺癌CTC的細胞。 作者又將這些細胞進行了Hoechst、EpCAM、MCAM以及CD45抗體的標記，置于MMI的CellEctor單細胞挑選系統(tǒng)上面，基于熒光顯微成像，按照細胞核可見/無beads結(jié)合/表達EpCAM-MCAM/不表達CD45/細胞圓形或卵圓形的標準在熒光顯微成像下圈選出細胞，CellEctor自動化實現(xiàn)純的特異性的胰腺癌CTC的分離。作者以此單細胞進行了下游的單細胞RT-PCR，分析了包括EpCAM在內(nèi)的13個marker。最終結(jié)果指示胰腺癌CTC的上皮樣分子以及間充質(zhì)樣分子表達與其它淋巴細胞不同，癌癥干細胞(CSC)marker以及胞外基質(zhì)蛋白(ECM)表達有明顯的升高。這項研究是基于單個的胰腺癌CTC，研究結(jié)果對于揭示與CTC向遠端器官轉(zhuǎn)移并定位相關(guān)的轉(zhuǎn)錄本以及上皮樣CTC預(yù)示更好的癌癥患者存活率具有重要的理論指導(dǎo)意義。  如上圖所示：藍色的Hoechst指示細胞核，綠色的EpCAM/MCAM指示胞膜，紅色的CD45指示淋巴細胞，最后一列Merge指示完整的CTC。 在2013年M Pizon等、2011年Hjortland等發(fā)表的文章中，均使用了類似的方法分別從乳腺癌患者、胃食管癌患者體內(nèi)分離出CTC進行基因表達、體外培養(yǎng)監(jiān)測腫瘤球形成的能力、全基因組CGH芯片分析等，為個體化治療提供了有力的理論依據(jù)。 基于免疫磁珠富集+顯微成像可視化單細胞挑選兩步法進行CTC的分離已經(jīng)是非常成熟的方法，以往的研究證實了這是一種高效的、能較好維持細胞活性的特異性獲得純的CTC的方法。其中第二步中使用到的CellEctor是德國MMI公司專門針對CTC、干細胞等罕見細胞設(shè)計的基于毛細管原理的單細胞挑選系統(tǒng)。該系統(tǒng)以高性能的自動倒置顯微鏡為平臺，搭載高精度電動載物臺，通過高精度CellPump簡單、精準地實現(xiàn)CTC、干細胞及其它罕見細胞的識別、吸取及轉(zhuǎn)移。  參考文獻：
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