?甾醇類化合物及總甾醇提取物在制備鎮(zhèn)痛藥物中的應(yīng)用的制作方法

專利名稱：甾醇類化合物及總甾醇提取物在制備鎮(zhèn)痛藥物中的應(yīng)用的制作方法

技術(shù)領(lǐng)域：

本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，尤其是天然藥物化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及甾醇類化合物及總甾醇提取物在制備鎮(zhèn)痛藥物中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

疼痛是一種常見的臨床癥狀，己經(jīng)成為影響人們生活和工作的重要疾病之一。調(diào)查顯示，頭痛、牙痛、肌肉和關(guān)節(jié)痛是我國居民最常經(jīng)歷的疼痛，其次為受運動損傷導(dǎo)致的疼痛和經(jīng)痛。其中，不同年齡

段頭痛發(fā)生比例都超過了半數(shù)；30歲以下以及30-45歲人群頭痛發(fā)生率都超過70%;肌肉關(guān)節(jié)痛和牙痛。

目前常用的鎮(zhèn)痛藥可分為兩大類，以嗎啡為代表的阿片類麻醉性鎮(zhèn)痛藥和以阿斯匹林為代表的非甾體類抗炎藥。阿片類鎮(zhèn)痛藥是中樞神經(jīng)抑制劑，雖效果明顯但易成癮并產(chǎn)生耐受性。非甾體類抗炎藥作用于外周神經(jīng)系統(tǒng)，是以阻斷前列腺素的合成為目的，該類藥物長期服用能產(chǎn)生變態(tài)反應(yīng)、胃出血和潰瘍。因此，迫切需要尋找安全有效的鎮(zhèn)痛藥物。

從中草藥中尋找和研制的天然藥物，鎮(zhèn)痛效果良好，具有療效好、副作用小、適合長期服用及安全可靠等許多優(yōu)點，已愈來愈引起人們的重視，成為一個重要的研究發(fā)展方向。

甾醇類化合物，尤其是植物中的甾醇類化合物，主要有谷甾醇、豆甾醇、菜油甾醇、菜籽甾醇、以及甾醇糖苷、甾醇酯和?；薮继擒盏取：芏嘀参镏卸己戌薮碱惢衔?，在植物中一般以混合物形式3存在。有大量關(guān)于甾醇類化合物生物活性的報道。例如，甾醇糖苷具有 補體活化和抗炎活性；包括P -谷甾醇葡萄糖苷和其它P -谷甾醇糖苷 的甾醇糖苷混合物具有免疫調(diào)節(jié)作用；體內(nèi)試驗表明，甾醇類化合物 對Hashimoto氏甲狀腺炎、遺傳性過敏癥eczema、牛皮癬、哮喘和腫 瘤都有作用。甾醇可降低膽固醇，還可以用于治療抑郁癥(見中國專 利申請200510111265，公開號CN1977848A)。但甾醇類化合物及總 甾醇提取物的鎮(zhèn)痛作用未見報道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明旨在提供甾醇類化合物及總甾醇提取物的醫(yī)藥新用途，即 甾醇類化合物及總甾醇提取物在制備鎮(zhèn)痛藥物中的應(yīng)用，以獲得療效 好、副作用小、安全可靠、能長期服用的鎮(zhèn)痛藥物。

以天然植物或中草藥為原料，可以獲得甾醇類化合物或總甾醇提 取物?？捎玫奶烊恢参锘蛑兴幇ò俸?、白芍、大棗、大豆(或大豆 油脫臭餾出物)、牛膝、油菜籽(或菜籽油脫臭餾出物)、小麥(或小 麥麩)等。

采用的工藝包括溶劑提取法、溶劑萃取法、樹脂吸附法或二氧化 碳超臨界萃取等方法中的一種或多種；并可結(jié)合濃縮干燥、減壓干燥 或冷凍干燥等常用干燥方法，利用包括吸附樹脂柱層析、真空液相柱 層析、硅膠柱層析、Sephadex凝膠柱層析、中低壓柱層析以及高壓液 相(HPLC)柱層析，和沉淀、結(jié)晶等方法進行純化和精制。

在采用溶劑提取法中，所用溶劑可選用水、甲醇、乙醇、丙醇、 丁醇、戊醇、丙酮、乙酸乙酯、甲酸乙酯、氯仿、二氯甲烷、乙醚或 石油醚等有機溶劑或兩種或多種互溶的混合溶劑，在室溫下浸漬提取 或用超聲提取或加熱狀態(tài)下的回流提取，提取次數(shù)可為一次，也可為多次。

在采用溶劑萃取法中，可將上述得到的提取物懸浮于水中用合適 的溶劑丁醇、戊醇、乙酸乙酯、甲酸乙酯、氯仿、二氯甲烷、乙醚或 石油醚等直接進行萃取，萃取次數(shù)可為一次，也可為多次。

上述的樹脂法為大孔吸附樹脂法，水、醇或含水醇提取物可用大 孔吸附樹脂進行處理，棄去水洗脫部分，全部或部分收集醇洗脫部分 即得。

所采用的二氧化碳超臨界萃取法可根據(jù)情況加入適當?shù)膴A帶劑， 如環(huán)己烷、氯仿、乙酸乙酯、甲醇或乙醇等。 本發(fā)明所述甾醇類化合物為甾醇。

所述甾醇類化合物為谷甾醇(Sitosterol)、豆甾醇(Stigmasterol)、 菜油甾醇(Campesterol )菜籽甾醇(brassicasterol )、膽甾醇

(cholesterol)、菠菜甾醇(spinasterol)、巖藻甾醇(flicosterol)、羊 毛甾醇(lanosterol)、燕麥甾醇(avenasterol)、禾本甾醇(gramisterol)、 多孔甾醇(poriferasterol)、菌甾醇(flingisterol)、扶桑甾醇(rosasterol)、 莧菜甾醇(amasterol)、糞甾醇(epicoprosterol )、刺松藻甾醇

(codisterol)、鈍葉甾醇(obtusifoliol)、蜆甾醇(corbisterol)、粉茍 苣甾醇(chondrilla sterol)、鏈甾醇(desmosterol)、桐甾醇(clerosterol)、 或大戟甾醇(euphorbosterol)等來源于植物的甾醇。

所述總甾醇提取物是指由天然植物或中藥中通過上述提取分離 方法得到的含有上述一種或一種以上甾醇類化合物的提取物，其中總 甾醇含量在50 90%。

以甾醇類化合物或總甾醇提取物作為制備鎮(zhèn)痛藥物的有效成份， 可單獨應(yīng)用或者合用或與可接受的賦形劑等結(jié)合，按照常規(guī)方法制成 口服劑型或非口服劑型的治療疼痛的藥物。

5試驗結(jié)果表明，甾醇類化合物或總甾醇提取物都具有明顯的鎮(zhèn)痛 效果，可用于制備鎮(zhèn)痛藥物；且具有明顯療效，副作用小，安全可靠， 能夠長期服用。

具體實施例方式

實施例1 甾醇類化合物e-谷甾醇提取分離

取百合科植物百合的干燥鱗莖(葉)片lkg，用80%乙醇回流提 取，濃縮浸提液得乙醇提取物，提取物混懸于水中，用石油醚萃取， 濃縮得石油醚提取物，石油醚提取物上硅膠柱層析，正己烷-乙酸乙

酯梯度洗脫，氯仿甲醇溶液中結(jié)晶，得到e-谷甾醇。

實施例2大棗中甾醇類化合物的提取分離

取千燥大棗用80%乙醇回流提取，濃縮浸提液得乙醇提取物，提 取物混懸于水中，用乙酸乙酯萃取，濃縮得乙酸乙酯提取物；將乙酸 乙酯提取物混懸于5%氫氧化鈉水溶液中，用乙酸乙酯萃取，萃取物 上硅膠柱，正己烷-氯仿-甲醇梯度洗脫，洗脫餾分放置或甲醇重結(jié)晶， 得到P -谷甾醇和P -谷甾醇葡萄糖苷。

實施例3 白芍中甾醇化合物的提取分離

取白芍飲片，用85%乙醇回流提取，濃縮浸提液得乙醇提取物， 提取物混懸于水中，用石油醚萃取，濃縮得石油醚提取物，石油醚提 取物上硅膠柱層析，正己烷-乙酸乙酯梯度洗脫，氯仿甲醇溶液中結(jié) 晶，得到卜谷甾醇。

實施例4 百合中總甾醇提取物的提取分離

取百合科植物百合的干燥鱗莖(葉)片，用80%乙醇回流提取， 濃縮浸提液得乙醇提取物，提取物混懸于水中，用氯仿萃取，將氯仿萃取物溶液丙酮中，過濾，丙酮溶液濃縮干燥后，加甲醇熱熔，放置 一定時間后，過濾，收集沉淀物，干燥，得百合總甾醇提取物。

實施例5 大豆中總甾醇提取物的提取分離

將大豆脫臭餾出物溶于乙酸乙酯，用5%氫氧化鈉萃取，水系， 濃縮干燥后熱熔于甲醇，放置，濾出沉淀既為總甾醇提取物。

實施例6 牛膝中總甾醇提取物的提取分離

取干燥牛膝，粉碎，用80%乙醇回流提取，提取物混懸于水中， 以乙酸乙酯萃取，萃取液再用5%氫氧化鈉洗滌后，用甲醇熱熔放冷 沉淀，反復(fù)多次的牛膝總甾醇提取物。

實施例7 菜籽油脫臭餾出物中總甾醇提取物的提取分離

將菜籽油脫臭餾出物溶于一定濃度的熱甲醇或乙醇中，放置，結(jié) 晶。經(jīng)多次重復(fù)結(jié)晶，濾出沉淀既為總甾醇提取物。

實施例8 甾醇類化合物鎮(zhèn)痛作用試驗

選用e-谷甾醇和豆甾醇為代表，應(yīng)用于小鼠扭體實驗以驗證甾 醇類化合物鎮(zhèn)痛作用。

操作方法為取18 22g小鼠30只，隨機分為三組，分別按體 重100mg/kg、 30mg/kg和10mg/kg 口服給藥，給藥組樣品液0.6m1/ 只；另設(shè)對照組給等體積生理鹽水。60分鐘后，各鼠腹腔注射0.7% 醋酸0.1ml/10g，觀察并記錄10分鐘內(nèi)產(chǎn)生扭體反應(yīng)的動物數(shù)或每組 扭體反應(yīng)的次數(shù)，與對照組比較其鎮(zhèn)痛效果。同時以阿米替林為比較， 結(jié)果見表l。表1. 甾醇類化合物小鼠扭體試驗結(jié)果

化合物劑量(mg/kg)對照組扭體次數(shù)實驗組扭體次數(shù)抑制率(％)P值

e-谷甾醇10po36.3±8.132.1±6.911.6>0.05

30po26.4±12.626.4>0.05

訓(xùn)po18.6±4.148.8O.001

豆甾醇10po42.3±8.433.4±8.620.9>0.05

30po27.5±8.135.0<0.01

100po32.7±10.222.7<0.05

阿米替林 (Amitriptyline)15po8.6±4.676.3O.001

以上實驗表明，甾醇類化合物如p-谷甾醇和豆甾醇等具有鎮(zhèn)痛 作用。

實施例9菜籽油脫臭餾出物總甾醇提取物鎮(zhèn)痛作用試驗

取實施例7的菜籽油脫臭餾出物總甾醇提取物，進行小鼠醋酸扭 體實驗，操作方法同實施例8，同時以阿米替林為比較，結(jié)果如表2。

表2.甾醇提取物小鼠扭體試驗結(jié)果

劑量(mg/kg)對照組扭體次數(shù)實驗組扭體次數(shù)抑制率 (%)P值

菜籽油脫臭餾 出物總甾醇提 取物10 po39.0±8.529.6±5.524.0<0.05

30 po22.7±9.541.8<0.01

圃po21.3±5.945.5<0.01

300 po22.5±2.642.3<0.01

阿米替林 (Amitriptyline)15 po10.7±7.372.6<0.01

8

權(quán)利要求

1、甾醇類化合物及總甾醇提取物在制備鎮(zhèn)痛藥物中的應(yīng)用。

2、 權(quán)利要求1所述的甾醇類化合物及總甾醇提取物在制備鎮(zhèn)痛藥物 中的應(yīng)用，其特征在于，所述甾醇類化合物為甾醇。

3、 權(quán)利要求1所述的甾醇類化合物及總甾醇提取物在制備鎮(zhèn)痛藥物 中的應(yīng)用，其特征在于，所述總甾醇提取物是從百合、白芍、大棗、 大豆、大豆油脫臭餾出物、牛膝、油菜籽、菜籽油脫臭餾出物、小麥 或小麥麩中提取得到的含有一種或多種甾醇類化合物的提取物，其中 總甾醇含量為50-90%。

4、 權(quán)利要求2所述的甾醇類化合物及總甾醇提取物在制備鎮(zhèn)痛藥物 中的應(yīng)用，其特征在于，所述甾醇為谷甾醇、豆甾醇、菜油甾醇、菜 籽甾醇、膽甾醇、菠菜甾醇、巖藻甾醇、羊毛甾醇、燕麥甾醇、禾本 甾醇、多孔甾醇、菌甾醇、扶桑甾醇、莧菜甾醇、糞甾醇、刺松藻甾 醇、鈍葉甾醇、蜆甾醇、粉苞苣甾醇、鏈甾醇、桐甾醇或大戟甾醇。

5、 權(quán)利要求2所述的甾醇類化合物及總甾醇提取物在制備鎮(zhèn)痛藥物 中的應(yīng)用，其特征在于，所述甾醇為谷甾醇或豆甾醇。

6、 權(quán)利要求1至5任一項所述的甾醇類化合物及總甾醇提取物在 制備鎮(zhèn)痛藥物中的應(yīng)用，其特征在于，所述藥物以一種或多種甾醇類 化合物、或總甾醇提取物作為活性成分，單獨應(yīng)用，或者加上藥學(xué)上 可接受的賦形劑制成的口服或非口服制劑。

全文摘要

本發(fā)明公開了甾醇類化合物及總甾醇提取物在制備鎮(zhèn)痛藥物中的應(yīng)用?？傜薮继崛∥餅閺闹参锘蛑胁菟幹刑崛〉暮环N或多種甾醇類化合物的提取物，總甾醇含量50-90％；甾醇類化合物為甾醇，如谷甾醇和豆甾醇等。經(jīng)動物試驗表明，這些物質(zhì)都具有鎮(zhèn)痛作用，可以用于制備鎮(zhèn)痛藥物。