作者：解螺旋.毛博

轉(zhuǎn)載請注明來源：解螺旋，醫(yī)生科研助手

Transwell技術(shù)在細胞共培養(yǎng)、細胞趨化、細胞遷移、細胞侵襲中經(jīng)常被應(yīng)用到，相對來說，它的操作還是較簡單，重復(fù)性也比較好，可還是有小伙伴叫苦不迭：為啥我總是失敗呢？毛博今天就來幫你對癥下藥，一一梳理，看看是哪出了問題。 

Transwell技術(shù)的名稱來自于就是一個叫Transwell的小杯子，可以放在細胞培養(yǎng)板里面。有不同形狀，不同大小，不同選擇。但無論如何，它的關(guān)鍵部分都是一樣的，那就是杯子底層的那張膜。這張膜一般是聚碳酸酯膜，帶有微孔，孔徑大小有0.1－12.0 μm。根據(jù)不同的實驗需要，需要選用不同的孔徑，共培養(yǎng)、細胞趨化、細胞遷移、細胞侵襲等多種方面的研究，應(yīng)用的孔徑是有區(qū)別的。

(1).細胞共培養(yǎng)：

將細胞A種于上室，細胞B種于下室，可以研究細胞B分泌或代謝產(chǎn)生的物質(zhì)對細胞A的影響。應(yīng)選擇﹤3.0 μm孔徑。因為﹤3.0 μm孔徑，細胞不會遷徙通過。

(2).細胞趨化:

①細胞B對細胞A的趨化作用：將細胞A種于上室，細胞B種于下室，可以研究細胞B分泌或代謝產(chǎn)生的物質(zhì)對細胞A的趨化作用。

②趨化因子對細胞的趨化作用：將細胞種于上室，下室加入某種趨化因子，可研究該趨化因子對細胞的趨化作用。
應(yīng)選擇5.0、8.0、12.0 μm孔徑，上室細胞可穿過膜進入下室，計數(shù)進入下室的細胞量可反映下室成分對上室細胞的趨化能力。

(3).細胞遷移:

上室種細胞，一般是具備遷移能力的腫瘤細胞，下室加入FBS或某些特定的趨化因子，腫瘤細胞會向營養(yǎng)成分高的下室跑。應(yīng)選擇8.0、12.0 μm孔徑，計數(shù)進入下室的細胞量可反映細胞的遷移能力。

(4).細胞侵襲：

常用8.0、12.0 μm 孔徑，原理和方法與細胞遷移實驗類似。

① 重復(fù)使用的問題：

Transwell小室按照要求，都是一次性使用的。不過因為價格昂貴，其實洗洗泡泡還是可以重復(fù)用的。用完后用胰酶和75%酒精泡，室溫涼干。再次使用前用紫外里里外外都照上30 min。就可以啦。

② 上層培養(yǎng)液：

上層培養(yǎng)液采用無血清培養(yǎng)基，為維持滲透壓，需加入0.05%-0.2% BSA。

③ 下層培養(yǎng)液：

下層培養(yǎng)液采用含5%－10% FBS的培養(yǎng)基，具體濃度根據(jù)細胞侵襲力而定，侵襲力弱的細胞可適當(dāng)提高FBS濃度。

④ 細胞培養(yǎng)板：

常用的細胞培養(yǎng)板有6孔板、12孔板、24孔板等。細胞培養(yǎng)板沒什么特殊要求，普通的細胞培養(yǎng)板就可以。但要注意，細胞培養(yǎng)板應(yīng)當(dāng)與購買的Transwell小室相配套。不要一個大一個小，不配套啊。

⑤ 細胞計數(shù)：

那么，細胞遷移到下室了，如何計數(shù)和比較呢？用PBS緩沖液洗細胞1-2次,吸盡殘余的液體，加入甲醇固定20分鐘,棄固定液,加入結(jié)晶紫染液,染色10-20分鐘,棄染色液,用PBS沖洗干凈即可。如下圖所示，哪組遷移的多，哪組遷移的少，是不是一目了然了呢？