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一種促進(jìn)石斛蘭組培苗壯苗及生根的方法 【專利摘要】本發(fā)明公開了一種促進(jìn)石斛蘭組培苗壯苗及生根的方法，包括如下步驟：1）將石斛蘭組培苗轉(zhuǎn)入壯苗及生根特定培養(yǎng)基中光照培養(yǎng)，壯苗并誘導(dǎo)生根；2）將已生根的組培苗經(jīng)煉苗后即可進(jìn)行移栽；3）將已生根的石斛蘭組培苗再生植株移栽于樹皮與蛭石混合的栽培基質(zhì)里。本發(fā)明操作簡單、易行，壯苗快，平均每株株高比對照組高3-4cm，莖直徑比對照組粗2-3mm，鮮重比對照組重3倍，生根早，4-5天見根的形成，生根率高，30天生根率達(dá)100%，平均每株生根7-8根；移栽成活率高，可達(dá)到95%。本發(fā)明可有效縮短誘導(dǎo)生根時間，根系發(fā)育良好，植株健壯；移栽成活率高，同時對其他蘭科組培苗的培養(yǎng)也具有重要參考價(jià)值。 【專利說明】一種促進(jìn)石斛蘭組培苗壯苗及生根的方法 【技術(shù)領(lǐng)域】 [0001]本發(fā)明屬于植物生物【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及石斛蘭的組織培養(yǎng)，尤其涉及一種促進(jìn)石斛蘭組培苗壯苗及生根的方法。 【背景技術(shù)】 [0002]石斛蘭(D.0rchids)為蘭科石斛屬(Dendrobium)多年生草本植物,其主要用途是觀賞和藥用。石斛蘭是國際著名的、最具觀賞價(jià)值的四大名蘭之一，具有種類繁多，花色艷麗，姿態(tài)優(yōu)美，花多而密，花期長等諸多優(yōu)良特性，可作盆栽和切花應(yīng)用，適宜我國大部分地區(qū)集約化商品生產(chǎn)，應(yīng)用前景廣闊。石斛蘭也是我國傳統(tǒng)的名貴中藥材，如著名的鐵皮石斛、霍山石斛、金釵石斛等，在我國均有悠久的應(yīng)用歷史?，F(xiàn)代藥理研究表明，石斛蘭有抗腫瘤、抗衰老、增強(qiáng)人體免疫力、擴(kuò)張血管及抗血小板凝集、促進(jìn)血液循環(huán)、增強(qiáng)心臟活力等保健藥用功效，具有極高的開發(fā)價(jià)值。 [0003]由于石斛蘭經(jīng)濟(jì)價(jià)值極高，野生資源過度采挖極嚴(yán)重，1998年8月頒布的《中國植物紅皮書》將幾乎我國所有的石斛蘭屬植物都列入了保護(hù)名錄。石斛蘭對生態(tài)環(huán)境要求嚴(yán)格，種子發(fā)芽率極低，生長緩慢，自然更新困難，遠(yuǎn)不能滿足需求。應(yīng)用組織培養(yǎng)進(jìn)行石斛蘭快速繁殖，對于解決資源緊缺和實(shí)現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化開發(fā)具有重要意義。 [0004]蘭科植物的組織培養(yǎng)始于20世紀(jì)60年代，Morel采用蘭花莖尖，在含有細(xì)胞分裂素的KC培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，莖尖分生組織膨大形成類原球莖，并分化出根和葉，首次獲得蘭花無病毒小植株。Wimber對Morel的方法進(jìn)行改進(jìn)，采用液體振蕩培養(yǎng)的方法大大加快了原球莖的增殖速度，短期內(nèi)可以獲得大量再生植株，此后組織培養(yǎng)技術(shù)在蘭花生產(chǎn)上得到了廣泛的應(yīng)用。 [0005]壯苗培養(yǎng)是提高移栽成活率的一項(xiàng)重要措施，生根效果也直接影響到生產(chǎn)效益。蘭科植物的壯苗與生根很大程 度上與培養(yǎng)基大量元素及微量元素組分、植物生長調(diào)節(jié)劑的種類和濃度、添加的天然提取物有關(guān)，此階段的關(guān)鍵在于嚴(yán)格篩選激素的種類和濃度。在基本培養(yǎng)基中添加一定濃度的NAA、IAA、IBA等激素有助于試管苗生根，但壯苗效果并不顯著。唐桂香等的研究結(jié)果表明，NAA有助于試管苗的生根，但NAA濃度為0.5mg/L時，平均根數(shù)和根長值最大。蒙愛東等利用組織培養(yǎng)技術(shù)研究了多效唑?qū)﹁F皮石斛試管苗壯苗培養(yǎng)的影響，結(jié)果表明，MS培養(yǎng)基中加入多效唑可明顯促進(jìn)試管苗的生長，有利于試管苗生根，提高移栽成活率；但是，多效唑處理后試管苗矮化、節(jié)間變短、葉變小、莖粗增大；葉片數(shù)與對照無顯著差異，葉長和葉寬顯著減?。桓L減小，根數(shù)顯著增加，根粗增加不明顯。 [0006]劉驊等認(rèn)為，最適宜鐵皮石斛試管苗壯苗的培養(yǎng)基是B5或1/2MS基本培養(yǎng)基中添加2mg/L的NAA，香蕉提取物10%，蔗糖2%。生根壯苗適宜的培養(yǎng)基還有N6+10%香蕉汁，1/2MS+IBA0.lmg/L, 1/2MS+10% 香蕉汁 +0.5%AC 和改良 N6+0.2mg/LNAA+10% 香蕉汁等。 [0007]從文獻(xiàn)報(bào)道可知，在生根培養(yǎng)基中通常加入香蕉汁、椰子汁等天然可促進(jìn)生根壯苗。但呂秀立等報(bào)道認(rèn)為添加10%椰子汁、香蕉汁等天然提取物，對春蘭組培苗后期生長并沒有促進(jìn)作用，反而會引起黃化和進(jìn)一步死亡。我們在大花蕙蘭、千代蘭、鐵皮石斛、鉤唇石斛等蘭科植物的組培中添加了香蕉汁、馬鈴薯汁，也發(fā)現(xiàn)天然提取物反而促進(jìn)了褐化的產(chǎn)生，根系生長不良，影響了植株的生長。 [0008]此外，由于天然提取物的提取方法、提取材料的成熟度和生理狀態(tài)不同，提取物的純度和有效濃度差異很大，對實(shí)驗(yàn)結(jié)果都會產(chǎn)生影響。天然提取物每次要現(xiàn)用現(xiàn)提取，無法長期保存，操作比較麻煩。在生根培養(yǎng)基中加入活性炭，有利于鐵皮石斛試管苗的生長，能使根系長得更加粗壯。在培養(yǎng)基中添加活性炭有助于提高試管苗的成活率，但對苗的根數(shù)和根長影響較小。 [0009]因此選擇更適合的既能促進(jìn)壯苗又促進(jìn)生根的植物生長調(diào)節(jié)劑猶為必要。 【發(fā)明內(nèi)容】 [0010]本發(fā)明的目的在于提供一種促進(jìn)石斛蘭組培苗壯苗及生根的方法，使石斛蘭組培苗在培養(yǎng)過程中生根快，生根率高，根系發(fā)達(dá)，根粗壯，再生植株生長健壯且移栽成活率高。 [0011]為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案如下: [0012]一種促進(jìn)石斛蘭組培苗壯苗及生根的方法，包括如下步驟: [0013]I)將石斛蘭組培苗轉(zhuǎn)入壯苗生根培養(yǎng)基中光照培養(yǎng)，誘導(dǎo)生根；所述壯苗生根培養(yǎng)基的配方為MS基本培養(yǎng)基+惡霉靈HMI和/或糖醇螯合復(fù)合肥+瓊脂粉+蔗糖。 [0014]2)在壯苗生根培養(yǎng)基中已生根的石斛蘭組培苗經(jīng)煉苗后移栽。 [0015]3)將已生根的石斛 蘭組培苗再生植株移栽于樹皮與蛭石1-3:1-3 (重量比)混合的栽培基質(zhì)里，噴水保濕，溫度25±2°C，相對濕度70-85%。 [0016]其中，上述步驟I)中，所述石斛蘭組培苗是采用本領(lǐng)域的常規(guī)組織培養(yǎng)方法，利用植物離體培養(yǎng)的器官(如根、芽、種子、原球莖等)在無菌和適宜的人工培養(yǎng)基及光照溫度等人工條件下，誘導(dǎo)培養(yǎng)所得的組織培養(yǎng)再生幼苗，此處的石斛蘭組培苗是無根的。 [0017]優(yōu)選地，上述步驟I)中，所述壯苗生根培養(yǎng)基的配方為MS基本培養(yǎng)基+1~IOmg/L惡霉靈HMI和/或糖醇螯合復(fù)合肥1000倍-8000倍+5_7g/L瓊脂粉+20_30g/L蔗糖。 [0018]優(yōu)選地，上述步驟I)中，所述壯苗生根培養(yǎng)基的配方為MS基本培養(yǎng)基+5mg/L惡霉靈HMI和/或糖醇螯合復(fù)合肥1000倍+5-7g/L瓊脂粉+20_30g/L蔗糖。 [0019]進(jìn)一步，上述步驟I)中，所述糖醇螯合復(fù)合肥優(yōu)選霍尚澳優(yōu)12元素液體復(fù)合肥。 [0020]上述步驟I)中，將石斛蘭組培苗在無菌條件下切取幼苗，轉(zhuǎn)入壯苗生根培養(yǎng)基中，光照培養(yǎng)條件為:培養(yǎng)溫度為25°C ±2°C，光照時間為12-16小時/天，光照強(qiáng)度為1000-20001ux。 [0021]上述步驟2)中，幼苗在壯苗生根培養(yǎng)基中一般培養(yǎng)4-5周，此時幼苗生長健壯，莖粗壯，葉色濃綠，根系發(fā)達(dá)，在培養(yǎng)室中逐漸打開蓋子，煉苗一周將苗移出瓶。 [0022]本發(fā)明在培養(yǎng)基中所使用的霍尚澳優(yōu)12元素液體復(fù)合肥為澳洲埃爾夫公司1991年研發(fā)的12元素液體復(fù)合肥(broad spectrum foliar)。 [0023]本發(fā)明在培養(yǎng)基中所使用的惡霉靈，化學(xué)名稱為3-羥基-5-甲基異惡唑，英文名稱為HymemzoK縮寫為HMI，下文不再贅述)，是一種內(nèi)吸性殺菌劑和種子消毒劑。它除了具有良好的殺菌作用外，在適宜的濃度下，對多種作物的生長有調(diào)節(jié)作用。惡霉靈施于水稻秧田，可促進(jìn)根系生長，增加分蘗，提高秧苗素質(zhì)；用惡霉靈浸稻種能提高發(fā)芽率，增加植株干重，用70%惡霉靈可濕性粉劑處理土壤，增產(chǎn)稻谷12% ;此外，惡霉靈對馬鈴薯、洋蔥、草莓、甜菜、豌豆均有促進(jìn)生長和增產(chǎn)作用。此前未見其在石斛蘭組織培養(yǎng)中應(yīng)用的報(bào)道。 [0024]培養(yǎng)基中植物所需營養(yǎng)元素?zé)o論是大量元素氮磷鉀還是微量元素硫鎂鋅硼等存在狀態(tài)和濃度配比都對植株壯苗及生根影響非常大。糖醇物質(zhì)可作為硼等其它營養(yǎng)元素載體，攜帶礦質(zhì)養(yǎng)分在植物韌皮部中快速運(yùn)輸。 [0025]糖醇螯合化肥是中、微量元素等養(yǎng)分的良好絡(luò)合劑，可與多種營養(yǎng)物質(zhì)結(jié)合形成穩(wěn)定的復(fù)合體，具有以下優(yōu)點(diǎn): [0026]1.是目前唯一能攜帶礦質(zhì)養(yǎng)分在韌皮部中進(jìn)行快速運(yùn)輸?shù)奈镔|(zhì)； [0027]2.是植物韌皮部汁液中的天然提取物，無毒、對植物、人體無任何損傷； [0028]3.分子量低，很容易被葉片吸收，進(jìn)入到植株體內(nèi)容易降解釋放出養(yǎng)分，耗能低； [0029]4.以液態(tài)為穩(wěn)定的存在形式，尤其在堿性溶液中溶解度更高。由于韌皮部內(nèi)是堿性環(huán)境，大部分金屬類礦質(zhì)養(yǎng)分在堿性環(huán)境下溶解性和移動性都較差，而糖醇復(fù)合體更能體現(xiàn)其能攜帶礦質(zhì)養(yǎng)分在韌皮部移動的優(yōu)勢； [0030]5.可以提高植物的抗逆性，一方面，糖醇是參與細(xì)胞內(nèi)滲透調(diào)節(jié)的重要物質(zhì)，植物在鹽害、干旱、淹水等逆境脅迫下，糖醇可通過調(diào)節(jié)細(xì)胞滲透性使植物適應(yīng)逆境生長；另一方面，糖醇可以提高對活性氧的抗性，避免由于紫外線日灼、干旱、病害、缺氧等原因造成的植株活性氧損傷。 [0031 ]目前還未見糖醇螯合復(fù)合肥在蘭科植物組培上應(yīng)用的報(bào)道。 [0032]本發(fā)明利用含有HMI和/或糖醇螯合復(fù)合肥的MS培養(yǎng)基對石斛蘭組培苗進(jìn)行生根誘導(dǎo)，極大地提高了生根率，移栽成活率也顯著提高。 [0033]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下有益效果: [0034]1.利用本發(fā)明的生根培養(yǎng)基誘導(dǎo)生根，其生根率可達(dá)100%，移栽成活率可達(dá)95%。 [0035]2.本發(fā)明能有效的縮短誘導(dǎo)生根時間，4-5天就見根的發(fā)生，且根系粗壯，根多，每個植株平均7-8個根。 [0036]3.本發(fā)明由于使用一定濃度的HMI和/或糖醇螯合復(fù)合肥，在促進(jìn)生根的同時，提高了植株對養(yǎng)分的快速吸收，植株生長快且健壯，莖粗，葉厚，葉色濃綠，達(dá)到壯苗的目的。 [0037]4.本發(fā)明操作方法簡單易行，成本低。在不加其他生長調(diào)節(jié)劑和其他不同天然附加物(如馬鈴薯、香蕉汁、蘋果汁、椰汁等)以及活性炭的情況下，即可達(dá)到生根快、生根率高、植株生長健壯,成活率高的效果,節(jié)約了成本,簡化了操作程序。 【專利附圖】  【附圖說明】 [0038]圖1為本發(fā)明實(shí)施例1植株的生長狀況。 [0039]圖2為本發(fā)明實(shí)施例1的生根植株。 [0040]圖3為本發(fā)明實(shí)施例1的植株。 [0041]圖4為本發(fā)明實(shí)施例2的生根植株。 [0042]圖5為本發(fā)明實(shí)施例2植株的生長狀況。 [0043]圖6為本發(fā)明實(shí)施例3的植株(左)與實(shí)施例1的植株(右)對比圖。 【具體實(shí)施方式】 [0044]以下結(jié)合附圖與具體實(shí)施例進(jìn)一步詳細(xì)描述本發(fā)明的技術(shù)方案。[0045]實(shí)施例1 [0046]本實(shí)施例的鐵皮石斛組培苗壯苗生根培養(yǎng)方法，具體步驟如下: [0047]I)取來自于莖段外植體的2cm高的鐵皮石斛組培苗(無根)，無菌條件下切取幼苗，轉(zhuǎn)入裝有壯苗生根培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，將培養(yǎng)瓶置于光照條件下培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為250C ±2°C，光照時間為16小時/每天，光照強(qiáng)度為lOOOlux ;生根壯苗培養(yǎng)基的配方為MS基本培養(yǎng)基+5mg/LHMI+5g/L瓊脂粉+30g/L蔗糖。 [0048]培養(yǎng)4-5天就有根的發(fā)生，培養(yǎng)一個月后統(tǒng)計(jì)生根率達(dá)100% (見圖1)，平均每株生根6-8根，根長植株高度平均達(dá)7.1-7.8cm (見圖2)，葉色濃綠，葉大且厚，莖直徑平均 0.47-0.5cm (見圖3)，平均每株鮮重1.4-1.6g。 [0049]2)幼苗在壯苗生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)4-5周，此時幼苗健壯，根系發(fā)達(dá)，逐步打開瓶蓋煉苗一周，將幼苗移出瓶，用清水沖洗根部的培養(yǎng)基，移栽到樹皮與蛭石1:1混合的栽培基質(zhì)里，噴水保濕。溫度25°c ±2°C，相對濕度70%。栽培的植株成活率高，達(dá)95%。植株生長健壯。 [0050]實(shí)施例2 [0051]本實(shí)施例的鐵皮石斛組培苗壯苗生根培養(yǎng)方法，具體步驟如下: [0052]I)取來自于莖段外植體的2cm高的鐵皮石斛組培苗(無根)，無菌條件下切取幼苗，轉(zhuǎn)入裝有壯苗生根培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，將培養(yǎng)瓶置于光照條件下培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為250C ±2°C，光照時間為16小時/天，光照強(qiáng)度為1000Iux ;生根壯苗培養(yǎng)基的配方為MS基本培養(yǎng)基+霍尚澳優(yōu)12元素液體復(fù)合肥1000倍+5g/L瓊脂粉+30g/L蔗糖； [0053]培養(yǎng)15天有根的發(fā)生，培養(yǎng)45天后統(tǒng)計(jì)生根率達(dá)100%，平均每株生根7-8根，根粗壯，整齊(見圖4)，植株高度平均達(dá)8.1-8.8cm，葉色濃綠(見圖5)，葉大且厚，莖直徑平均 0.5-0.6cm，平均每株鮮重 1.7-1.8g。 [0054]2)幼苗在壯苗生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)4-5周，此時幼苗健壯，根系發(fā)達(dá)，逐步打開瓶蓋煉苗一周，將幼苗移出瓶，用清水沖洗根部的培養(yǎng)基，移栽到樹皮與蛭石1:1混合的栽培基質(zhì)里，噴水保濕。溫度25°c ±2°C，相對濕度70%。栽培的植株成活率高，達(dá)95%。植株生長健壯。 [0055]實(shí)施例3 [0056]本實(shí)施例的鐵皮石斛組培苗壯苗生根培養(yǎng)方法，具體步驟如下: [0057]1)取來自于莖段外植體的2cm高的鐵皮石斛組培苗(無根)，無菌條件下切取幼苗，轉(zhuǎn)入裝有壯苗生根培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，將培養(yǎng)瓶置于光照條件下培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為250C ±2°C，光照時間為16小時/天，光照強(qiáng)度為1000Iux ;生根壯苗培養(yǎng)基的配方為MS基本培養(yǎng)基+5mg/LHMI+霍尚澳優(yōu)12元素液體復(fù)合肥1000倍+5g/L瓊脂粉+30g/L蔗糖； [0058]培養(yǎng)5天有根的發(fā)生，培養(yǎng)25天后統(tǒng)計(jì)生根率達(dá)100%，平均每株生根7-8根，根粗壯，整齊，植株生長勢強(qiáng)于只加HMI的處理(見圖6)，葉色濃綠，葉大且厚。 [0059]2)幼苗在壯苗生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)4-5周，此時幼苗健壯，根系發(fā)達(dá)，逐步打開瓶蓋煉苗一周，將幼苗移出瓶，用清水沖洗根部的培養(yǎng)基，移栽到樹皮與蛭石1:1混合的栽培基質(zhì)里，噴水保濕。溫度25°C ±2°C，相對濕度70%。栽培的植株成活率高，達(dá)95%。植株生長健壯。 [0060]實(shí)施例4對照組[0061]I)取來自于莖段外植體的，2cm高的鐵皮石斛組培苗(無根)，無菌條件下切取幼苗，轉(zhuǎn)入裝有不加任何激素MS培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，將培養(yǎng)瓶置于光照條件下培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為25°C ±2°C，光照時間為16小時/天，光照強(qiáng)度為lOOOlux ;培養(yǎng)基的配方為MS培養(yǎng)基+5g/L瓊脂粉+30g/L蔗糖； [0062]培養(yǎng)20天有根的發(fā)生，培養(yǎng)一個月后統(tǒng)計(jì)生根率達(dá)20%，平均每株生根3根，植株高度平均達(dá)3.4cm，植株細(xì)小，莖直徑平均0.2cm，平均每株鮮重0.5g。 [0063]2)幼苗在培養(yǎng)基中培養(yǎng)4-5周，逐步打開瓶蓋煉苗一周，將幼苗移出瓶，用清水沖洗根部的培養(yǎng)基，移栽到樹皮與蛭石1:1混合的栽培基質(zhì)里，噴水保濕。溫度25°C ±2°C，相對濕度70%。栽培的植株成活率僅為40%。植株長勢慢。 [0064]最后應(yīng)當(dāng)說明的是，以上實(shí)施例僅用以說明本發(fā)明的技術(shù)方案而非限制，盡管參照較佳實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的精神和范圍，其均應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的權(quán)利要求范圍中。` 【權(quán)利要求】 1.一種促進(jìn)石斛蘭組培苗壯苗及生根的方法，包括如下步驟: 1)將石斛蘭組培苗轉(zhuǎn)入壯苗生根培養(yǎng)基中光照培養(yǎng)，誘導(dǎo)生根；所述壯苗生根培養(yǎng)基的配方為MS基本培養(yǎng)基+惡霉靈HMI和/或糖醇螯合復(fù)合肥+瓊脂粉+蔗糖； 2)在壯苗生根培養(yǎng)基中已生根的石斛蘭組培苗經(jīng)煉苗后移栽； 3)將已生根的石斛蘭組培苗再生植株移栽于樹皮與蛭石混合的栽培基質(zhì)里，噴水保濕，溫度25 ± 2 °C，相對濕度70-85%。 2.如權(quán)利要求1所述的促進(jìn)石斛蘭組培苗壯苗及生根的方法，其特征在于，所述壯苗生根培養(yǎng)基的配方為MS基本培養(yǎng)基+1~10mg/L惡霉靈HMI和/或糖醇螯合復(fù)合肥1000倍-8000 倍 +5-7g/L 瓊脂粉 +20-30g/L 蔗糖。 3.如權(quán)利要求2所述的促進(jìn)石斛蘭組培苗壯苗及生根的方法，其特征在于，所述壯苗生根培養(yǎng)基的配方為MS基本培養(yǎng)基+5mg/L惡霉靈HMI和/或糖醇螯合復(fù)合肥1000倍+5-7g/L 瓊脂粉 +20-30g/L 蔗糖。 4.如權(quán)利要求2或3所述的促進(jìn)石斛蘭組培苗壯苗及生根的方法，其特征在于，所述的糖醇螯合復(fù)合肥為霍尚澳優(yōu)12元素液體復(fù)合肥。 5.如權(quán)利要求1所述的促進(jìn)石斛蘭組培苗壯苗及生根的方法，其特征在于，步驟I)中光照培養(yǎng)條件為:培養(yǎng)溫度為25°C ±2°C，光照時間為12-16小時/天，光照強(qiáng)度為1000-20001ux。 6.如權(quán)利要求1所述的促進(jìn)石斛蘭組培苗壯苗及生根的方法，其特征在于，步驟3)中所述樹皮與蛭石混合的栽培基質(zhì)·里兩者重量比為1-3:1_3。 【文檔編號】A01H4/00GK103843662SQ201410085598 【公開日】2014年6月11日 申請日期:2014年3月10日 優(yōu)先權(quán)日:2014年3月10日 【發(fā)明者】周音, 張建軍, 陳敏敏, 謝紀(jì)紅 申請人:上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院 |
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