FISH在急性髓細(xì)胞白血病中的應(yīng)用

急性髓系白血病(AML)是成人白血病中最常見(jiàn)的類(lèi)型，WHO分型將其分成4大類(lèi)型，各類(lèi)型中又含各種亞型，部分亞型根據(jù)核型分類(lèi)，應(yīng)用FISH 技術(shù)核型檢測(cè)對(duì)AML分類(lèi)及指導(dǎo)預(yù)后有著重要意義。許露露等應(yīng)用多探針FISH與染色體核型分析4O例AML患者，結(jié)果顯示，40例AML中，共22例多探針FISH 檢出了細(xì)胞遺傳學(xué)改變，包括：AML1／ETO、PML一RARa、MLL基因斷裂重排、Del(5q)、Del(7q)、P53基因缺失、8號(hào)染色體三體7種細(xì)胞遺傳學(xué)異常。而常規(guī)染色體核型分析僅檢出11例遺傳學(xué)異常。多探針FISH 與染色體核型分析的總陽(yáng)性率分別為57．5%及27．5%。Li等報(bào)道了11例AML患者G顯帶僅有4例發(fā)現(xiàn)inv(16)，但采用雙色FISH檢測(cè)均發(fā)現(xiàn)了inv(16)，陽(yáng)性細(xì)胞率達(dá)93．45%(86．6%一98．7%)。據(jù)此認(rèn)為FISH檢測(cè)AML患者常見(jiàn)遺傳學(xué)異常更省時(shí)、準(zhǔn)確、高效，且有利于完善白血病的分層診段。

FISH 在慢性粒細(xì)胞白血病中的應(yīng)用

t(9；22)是慢性粒細(xì)胞白血病(CML)特異性的染色體異常，見(jiàn)于9O%～95%CML患者。近期研究顯示t(9；22)CML衍生的9號(hào)染色體缺失是一強(qiáng)大的預(yù)后差的指標(biāo)。Xinh等檢測(cè)了47例CML患者，11例發(fā)現(xiàn)衍生的9號(hào)染色體缺失，其中兩例既存在伴有衍生物的9號(hào)染色體的Ph+細(xì)胞，也存在不伴有衍生的9號(hào)染色體的Ph+細(xì)胞，后者數(shù)量明顯少于前者。

CML加速期和急變期常常出現(xiàn)額外染色體異常和復(fù)雜核型異常。對(duì)伴有復(fù)雜染色體異常CCAs的CML-BC患者M(jìn)—FISH 技術(shù)可以明確常規(guī)核型(CC)分析中復(fù)雜染色體異常，發(fā)現(xiàn)和糾正CC分析中漏檢及誤檢的異常，還可能發(fā)現(xiàn)新的異常核型克隆。陳麗娟等對(duì)常規(guī)R顯帶具有CCAs的22例CML一BC標(biāo)本應(yīng)用M—FISH 方法確定復(fù)雜染色體易位及標(biāo)記染色體的組成，識(shí)別并確定微小易位。22例CML-BC中所有染色體均涉及異常。在CML一BC的檢測(cè)中，除標(biāo)準(zhǔn)t(9；22)易位外M—FISH共檢出56種結(jié)構(gòu)異常，其中5種平衡易位，51種不平衡易位，不平衡易位包括了2種插入，6種缺失及43種易位及衍生染色體；另外還檢出23種數(shù)目異常。

FISH在急性淋巴細(xì)胞白血病中的應(yīng)用

7O%成人急性淋巴細(xì)胞白血病(ALL)和8O%兒童ALL具有克隆性染色體異常。兒童最多見(jiàn)的白血病類(lèi)型為ALL，其中約44%含t(12；21)，形成TEL ～AML1，但由于斷裂點(diǎn)部位的關(guān)系，受累的染色體帶和易位的交換物質(zhì)的大小非常相似，故常規(guī)核型分析不易識(shí)別，王愷等應(yīng)用聯(lián)合雙色間期FISH 和常規(guī)染色體核型分析技術(shù)(CCA)對(duì)31例兒童初治ALL的骨髓有核細(xì)胞進(jìn)行(t12；21)TEL AML1融合基因檢測(cè)。結(jié)果7例患兒經(jīng)FISH檢測(cè)發(fā)現(xiàn)TEl 一AML1融合基因，占總病例的22．6%；而CCA檢測(cè)均未發(fā)現(xiàn)有可疑的(t12；21)。在成人ALL中，伴有t(12；21)ALL 發(fā)生率雖然較低，但Lee等采用FISH技術(shù)檢測(cè)了74例成人ALL患者，2例有TEL—AML1重排，3例發(fā)現(xiàn)TEL基因缺失，但不伴有TEL-AML1重排，中位生存期分別是33個(gè)月和5個(gè)月，而其余TEL一AML1陰性ALL為16．7個(gè)月。因此推薦TEL—AML1重排FISH也應(yīng)該用于檢測(cè)成人ALL。

FISH在慢性淋巴細(xì)胞白血病中的應(yīng)用

慢性淋巴細(xì)胞白血病(CLL)是克隆性淋巴細(xì)胞增殖性疾病，以B淋巴細(xì)胞增殖性為主的B-CLL占95%。CLL具有顯著的臨床預(yù)后異質(zhì)性，短者幾個(gè)月，長(zhǎng)者生存期同正常人。染色體核型異常與臨床預(yù)后有密切關(guān)系。常規(guī)染色體顯帶技術(shù)僅2O%CLL可檢查到克隆性染色體異常，加用PWM等有絲分裂原刺激劑，近5O%CLL檢測(cè)到克隆性染色體異常。隨著染色體DNA探針FISH 技術(shù)及比較基因組技術(shù)的發(fā)展，可檢測(cè)分裂中期和間期細(xì)胞，新的克隆性異常染色體不斷被發(fā)現(xiàn)，近8O%CLL患者可檢測(cè)到染色體異常。梁興林應(yīng)用問(wèn)期熒光原位雜交方法對(duì)21例慢性淋巴細(xì)胞白血病患者染色體進(jìn)行檢測(cè)分析。21例患者中，15例(71．4%)檢出有遺傳學(xué)異常，包括del(13ql4．3)異常、del(13ql4)異常、+12異常、del(17pl3)異常以及del(11q22．3)異常。

FISH 在多發(fā)性骨髓瘤中的應(yīng)用

多發(fā)性骨髓瘤(MM)迄今仍是一種不可治愈的漿細(xì)胞惡性克隆性疾病，在血液系統(tǒng)惡性腫瘤中約占1O%。MM細(xì)胞遺傳學(xué)異常決定了其臨床高度異質(zhì)性。由于漿細(xì)胞為終末分化細(xì)胞，增殖活性較低，很難獲得足夠的分裂相進(jìn)行分析，且由于瘤細(xì)胞比例低，正常分裂相多見(jiàn)，故核型異常檢出率僅為15%～3O%；而MM 中復(fù)雜核型多見(jiàn)，染色體形態(tài)差，常規(guī)細(xì)胞遺傳學(xué)(CC)方法檢測(cè)染色體異常有一定的困難，采用高純度的磁珠分選系統(tǒng)(MACS)結(jié)合間期熒光原位雜交(I-FIsH)技術(shù)可明顯提高M(jìn)M 分子細(xì)胞遺傳學(xué)異常檢出率。陳麗娟等對(duì)7例常規(guī)復(fù)雜核型多發(fā)性骨髓瘤患者進(jìn)行檢測(cè)，常規(guī)核型分析檢出29種結(jié)構(gòu)異常，其中包括缺失4種，不明來(lái)源的額外物質(zhì)的增加7種，衍生染色體4種，平衡易位和等臂染色體各1種，其余12種均為標(biāo)記染色體，其組成和來(lái)源不同。采用M—FISH明確了常規(guī)核型分析中沒(méi)有明確的異常，包括不明來(lái)源的額外物質(zhì)的增加7種，衍生染色體4種，12種標(biāo)記染色體。但是核型分析中的1例小片段的缺失M—FISH沒(méi)有檢測(cè)出來(lái)。

FISH在骨髓增生異常綜合征中的應(yīng)用

骨髓增生異常綜合征(MDS)是一組異質(zhì)性的造血干細(xì)胞惡性克隆性疾病。4O%～ 7O%的原發(fā)性MDS和95%的治療相關(guān)性MDS(t—MDS)可檢出克隆性染色體異常。其檢出率的高低不但和疾病早晚階段有關(guān)，也和方法學(xué)有關(guān)。MDS染色體畸變類(lèi)型顯示很大的異質(zhì)性。國(guó)際預(yù)后積分系統(tǒng)(IPSS)現(xiàn)已被廣泛使用。它將MDS按細(xì)胞遺傳學(xué)分為3個(gè)不同的預(yù)后類(lèi)型：高危、低危和中危。凡臨床上疑為MDS的患者均應(yīng)接受染色體檢查。常規(guī)核型分析(CC)仍為最常用的方法。熒光原位雜交(FISH)是CC的重要補(bǔ)充。CC聯(lián)合適當(dāng)?shù)腇ISH將允許對(duì)大多數(shù)MDS患者作出精確的細(xì)胞遺傳學(xué)分析。15%非繼發(fā)性MDS和5O%繼發(fā)性MDS患者存在CCAs，伴CCAs患者預(yù)后不良，常規(guī)治療完全緩解率低，所以，這一遺傳學(xué)亞群的患者需要新的治療策略。傳統(tǒng)的CC方法不能詳細(xì)準(zhǔn)確描述CCAs，M—FISH 可以在一次雜交中，同時(shí)以24種顏色顯示所有染色體，克服了核型分析的一些局限。

FISH技術(shù)在淋巴瘤中的應(yīng)用

淋巴瘤是起源于淋巴組織的常見(jiàn)惡性腫瘤，其復(fù)雜的生物學(xué)行為使得臨床分類(lèi)治療非常困難，目前在淋巴瘤診斷方面，F(xiàn)ISH 技術(shù)已經(jīng)成為當(dāng)今白血?。馨土鲈\斷和分型的重要手段之一，尤其當(dāng)免疫組化染色不理想時(shí)輔以FISH技術(shù)的表型分析有助于淋巴瘤的明確診斷和正確分類(lèi)。張應(yīng)蒙等應(yīng)用FISH技術(shù)精確地測(cè)定出了各種B細(xì)胞淋巴瘤中染色體數(shù)量和結(jié)構(gòu)的畸變，包括彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤，常見(jiàn)受累的是3，6，14，l號(hào)染色體；B小淋巴細(xì)胞瘤，常見(jiàn)的是12號(hào)三倍體(20%)、l1q22～23缺失(20%)、6q2l缺失(5%)、del(13ql4)可達(dá)5O%以上；MALT淋巴瘤中有3．25%～5O%有t(11；18)(q2l；q21)異常；8O%以上的濾泡性淋巴瘤有t(14；18)(q32；q21)異常；套細(xì)胞淋巴瘤(MCL)最常見(jiàn)的分子生物學(xué)特征是t(11；14)(q13；q32)bcl-1／JH 易位，大約75 MCI 有該染色體異常，事實(shí)上用FISH檢測(cè)，所有的MCL均有t(11；14)(q13；q32)；Burkitt淋巴瘤均有MYC基因重排，最常見(jiàn)的是t(8；14)(q24；q32)。

FISH技術(shù)檢測(cè)B細(xì)胞淋巴瘤發(fā)生相關(guān)病毒 病毒感染是淋巴瘤發(fā)生的重要原因，與病毒分離培養(yǎng)、形態(tài)學(xué)觀(guān)察和血清學(xué)檢查相比，F(xiàn)ISH技術(shù)更加快速、敏感、有效，能在受感染的部位顯示特定病毒的DNA或RNA序列，確定感染病毒的存在，確定受感染細(xì)胞的類(lèi)型，對(duì)研究病毒在淋巴瘤發(fā)生發(fā)展中的作用，對(duì)淋巴瘤預(yù)后的影響及某些淋巴瘤類(lèi)型的診斷與鑒別診斷有重要意義。

FISH技術(shù)在白血病微小殘留病灶中的應(yīng)用

白血病患者的微小殘留病灶(MRD)是影響治療效果的一個(gè)重要臨床問(wèn)題。在目前判斷標(biāo)準(zhǔn)確定的MRD范圍內(nèi)，常規(guī)骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)及細(xì)胞遺傳學(xué)方法，不能敏感地檢測(cè)MRD，難以客觀(guān)地對(duì)白血病治療效果、預(yù)測(cè)復(fù)發(fā)和調(diào)整治療方案做出評(píng)價(jià)。FISH不但可以檢測(cè)染色體畸變，也可檢測(cè)數(shù)目異常，其敏感性雖比RT PCR略低，但假陽(yáng)性率也低，并可對(duì)白血病患者進(jìn)行動(dòng)態(tài)定量分析，為伴有t(15；17)APL、伴有t(8；21)的AML伴有inv(16)(pl3；q22)或t(16；l6)(pl3；q11)AMI M4Eo、伴有1lq23／MLL重排的急性白血病、伴有t(9；22)CML及伴有其他特異性染色體異常的白血病微小殘留病變的檢測(cè)提供了直觀(guān)、敏感和特異的指標(biāo)，可用于觀(guān)察化療及骨髓移植的治療效果，檢測(cè)早期復(fù)發(fā)。

FISH在對(duì)異性間造血干細(xì)胞移植的植入狀態(tài)檢測(cè)中的應(yīng)用

異基因造血干細(xì)胞移植(allogeneic hematopoietic stemceil transplantat on，allo HSCT)已經(jīng)成為治療血液系統(tǒng)惡性、非惡性疾病的有效手段。其主要通過(guò)性染色體計(jì)數(shù)探針動(dòng)態(tài)檢測(cè)供／受者混合性嵌合體比例變化判定移植是否成功，對(duì)指導(dǎo)移植后治療和預(yù)測(cè)復(fù)發(fā)具有十分重要的意義。劉啟發(fā)等對(duì)57例白血病患者接受性別不同的供體HSCT，在移植后不同時(shí)期留取骨髓細(xì)胞，采用雙色間期熒光原位雜交(interphasefluorescence in situ hybridization，I-FISH)技術(shù)對(duì)性染色體和bcr／abl融合基因進(jìn)行監(jiān)測(cè)，結(jié)果顯示，I FISH 測(cè)定性染色體和bcr／abl融合基因敏感性高于常規(guī)核型分析l在移植早期(3個(gè)月)混合嵌合狀態(tài)比完全嵌合狀態(tài)患者復(fù)發(fā)率高；嵌合率下降出現(xiàn)在白血病血液學(xué)復(fù)發(fā)前。

小結(jié)

FISH在血液系統(tǒng)惡性腫瘤的診斷、療效、預(yù)后判斷及MRD檢測(cè)中具有重要的臨床意義。雖然FISH有助于CCAs的分析，明確染色體易位、大片段缺失、不明來(lái)源的額外物質(zhì)的增加、衍生染色體和標(biāo)記染色體，但不能檢測(cè)小的及缺失、重復(fù)、倒位及涉及著絲粒區(qū)和端粒區(qū)的異常。因此，在血液病運(yùn)用中可與CC相互結(jié)合，互為補(bǔ)充。隨著國(guó)家衛(wèi)生相關(guān)部門(mén)對(duì)該技術(shù)的規(guī)范化和標(biāo)準(zhǔn)化，F(xiàn)ISH診斷必將成為血液腫瘤臨床及基礎(chǔ)研究的重要手段。