草履蟲的培養(yǎng)方法 一、草履蟲（Paramecium 
草履蟲屬于原生動物門的纖毛綱，是一類體型較大的原生動物，在自然界廣泛分布，又容易采集和培養(yǎng)，是觀察研究原生動物的好材料。草履蟲種類很多，其中體型最大和最常見的是大草履蟲（Paramecium caudatum）。 1.采集 
草履蟲通常生活在水流速度不大的水溝、池塘和稻田中，大多積聚在有機質(zhì)豐富，光線充足的水面附近。當水溫在14～22℃時，繁殖最旺盛，數(shù)目最多、草履蟲的這些習性，是確定采集地點和方法的重要依據(jù)。 
(1)到水溝、池塘采集草履蟲。水溝和池塘是草履蟲的主要生活場所。在氣候溫暖的季節(jié)，到水質(zhì)沒有污染的水溝、池塘岸邊，選擇枯枝落葉多的地方，用廣口瓶沿水面采集池水，這樣的池水往往含有許多草履蟲。為了更有把握，可在不同地點多采幾瓶。采集后，廣口瓶內(nèi)要放置少許水草，瓶口不要加蓋，以免草履蟲因缺氧而窒息死亡。 
回到實驗室后，要把盛有池水的廣口瓶放在溫暖、明亮、陽光又不直射的地方，使瓶中的革履蟲迅速繁殖。三五天以后，對著光線用肉眼觀察，如果看到水中有許多小白點在不停地游動，很可能就是草履蟲。這時，用吸管吸取一滴帶有小白點的水，放在載玻片上，用顯微鏡進行觀察，在視野中會看到各種微小生物。如果發(fā)現(xiàn)有象倒置的草鞋一樣的小動物，不停地螺旋運動，那就是草履蟲，采集就成功了。 
(2)到稻田采集草履蟲。在稻田灌水期間，尋找田中的舊稻茬，用廣口瓶在稻茬附近取水，隨后放進幾根舊稻草。這樣的水中往往會有許多草履蟲。返回實驗室后，放在溫暖明亮處，三五天后，用顯微鏡檢查是否有草履蟲存在。 
(3)從新鮮稻草上采集草履蟲。當環(huán)境變得干旱或寒冷時，草履蟲能向身體表面分泌一層蛋白質(zhì)的薄膜，蟲體不吃不動，進入休眠狀態(tài)。這種狀態(tài)叫作包囊。在稻田水抽干時，草履蟲便形成許多包囊，附著在稻草近根部的幾節(jié)莖上。因此，可選取新鮮稻草近根部的幾節(jié)，剪成3～4厘米長的小段，放入廣口瓶中，注入清水，放在明亮溫暖處，一周以后，用顯微鏡檢查是否有草履蟲。 2.配制培養(yǎng)液 
草履蟲的食物主要是細菌。為了培養(yǎng)繁殖草履蟲，必須配制含有大量細菌的培養(yǎng)液。培養(yǎng)液的配制方法通常有以下兩種。 (1)稻草培養(yǎng)液。取新鮮潔凈的稻草，去掉上端和基部的幾節(jié)，將中部稻莖剪成3～4厘米長的小段，按1克稻草加清水100毫升的比例，將稻草和清水放入大燒杯中，加熱煮沸10～15分鐘，當液體呈現(xiàn)黃褐色時停止加熱。這樣的液體，由于加熱煮沸，只留下了細菌芽孢，其它生物已均被殺死，為培養(yǎng)草履蟲創(chuàng)造了良好條件。為了防止空氣中其它原生動物的包囊落入和蚊蟲產(chǎn)卵，燒杯口要用雙層紗布包嚴。然后放置在溫暖明亮處進行細菌繁殖。 
經(jīng)過3～4天，稻草中的枯草桿菌的芽孢開始萌發(fā)，并依靠稻草液中的豐富養(yǎng)料迅速繁殖，液體逐漸混濁，等到大量細菌在液體表面形成了一層灰白色薄膜時，稻草培養(yǎng)液便制成了。由于草履蟲喜歡微堿性環(huán)境，如果培養(yǎng)液呈酸性，可用1％碳酸氫鈉調(diào)至微堿性，但pH值不能大于7.5。 
(2)麥粒培養(yǎng)液。將5克麥粒（大麥、小麥均可）放入1000毫升清水中，加熱煮沸，煮到麥粒脹大裂開為止。然后在溫暖明亮處放置3～4天，便制成了麥粒培養(yǎng)液，此時培養(yǎng)液中已繁殖有大量的細菌。 3.接種 
接種是指將采集來的草履蟲轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)液的過程。接種草履蟲時必須提純，否則會混入其它小動物。這不但會影響草履蟲的純度，而且一旦混入草履蟲的天敵水輪蟲（Rotaria），將會使培養(yǎng)液中草履蟲的數(shù)量急劇下降。 
接種時，先將含有草履蟲的水液吸到表面皿中，再將表面皿置于低倍顯微鏡或解剖鏡下檢查，發(fā)現(xiàn)有草履蟲后，用口徑不大于0.2毫米的微吸管，將表面皿中草履蟲逐個吸出，接種到培養(yǎng)液的廣口瓶中進行繁殖。如果要培養(yǎng)純系的草履蟲，可按上述方法，在顯微鏡或解剖鏡下，從表面皿中吸出一個草履蟲，放入盛凹玻片中，上面再覆蓋一片凹玻片，用以防止培養(yǎng)液干燥。待草履蟲經(jīng)過橫分裂達到20～30個個體時，移到培養(yǎng)液的廣口瓶中進行繁殖。 4.培養(yǎng) 
(1)將接種有草履蟲的培養(yǎng)液的廣口瓶，放在溫暖明亮處進行培養(yǎng)，培養(yǎng)液的容器口要用紗布包嚴。大約1周后，就會有大量草履蟲出現(xiàn)。 
(2)如果是長期培養(yǎng)，就要定期更新培養(yǎng)液。這是因為隨著蟲體大量繁殖，培養(yǎng)液中營養(yǎng)逐漸減少，而蟲體排出代謝物卻又不斷增加，這就會引起草履蟲數(shù)量減少甚至全部死亡。因此在培養(yǎng)過程中，每隔3天左右須更新一次培養(yǎng)液。更新時，用吸管從廣口瓶底部吸去培養(yǎng)液及沉淀物，每次要吸去一半培養(yǎng)液，加入等量新鮮培養(yǎng)液。這樣可使草履蟲長期得到保存。 

草履蟲的采集和培養(yǎng) 1、采集  
地點：在比較肥沃、水不太流動的污水溝、河溝或池塘里，溝水較淺，淤泥黑色，泥表有一乳白色的薄膜。 
方法：用器皿輕輕刮取白膜，連同少許的水放于瓶中；或用器皿從表層取一些水，向光觀察，如果發(fā)現(xiàn)其中有針尖大小的小白點在游動，這可能就是草履蟲和其他原生動物，可以采回來。 2、分離 
       牛肉汁分離法  取載玻片平放在臺上，先用清潔的吸管吸取牛肉汁，滴一滴在玻片左端；再用另一根小吸管吸取草履蟲液，滴在玻片右端。用解剖針從牛肉汁一端引一條溝，把這兩個液滴連接起來。草履蟲對牛肉汁反應較敏感，它們很快經(jīng)過小溝被引到牛肉汁一端來。待草履蟲聚集后用吸水紙切斷水線，用吸管吸取牛肉汁中的草履蟲，接種到培養(yǎng)液內(nèi)，就可培養(yǎng)出大量草履蟲供實驗用。 3、培養(yǎng) 
     牛奶液培養(yǎng)  將牛奶液攪拌均勻后，移入草履蟲，溫度保持在攝氏22度，二三日后，草履蟲迅速繁殖，并且出現(xiàn)處于分裂生殖狀態(tài)的草履蟲。5日內(nèi)蟲體數(shù)量達到高峰，以后每隔2星期在原有的培養(yǎng)液內(nèi)再加入牛奶液，可長期維持草履蟲的生活。 1 草履蟲種源的釆集  在無化學污染的湖泊、池塘、小河和城市公園內(nèi)水域，用500ml燒杯取一些水，在水中取一些落葉放入燒杯，投入15粒小麥。20～28℃靜置10d后鏡檢，可發(fā)現(xiàn)許多草履蟲。另一種方法是取水體內(nèi)水生植物在杯內(nèi)洗，反復數(shù)次，用防蚊網(wǎng)過濾，濾下液靜置5~8d，投入15粒小麥，水面附近有白色移動的水紋，取之可作為草履蟲培養(yǎng)的種源。 
2 草履蟲純培養(yǎng)  常規(guī)接種方法，用微吸管在解剖鏡下取一個草履蟲移到厚凹玻片（1ml）內(nèi)，反復用備好的培養(yǎng)液洗5次，再移入備有20ml培養(yǎng)液的試管內(nèi)培養(yǎng)。1～2周后擴大培養(yǎng)。 3 草履蟲短期高密度快速培養(yǎng)方法   3.1  培養(yǎng)液配方 
小麥粒培養(yǎng)液：將10～12粒小麥放入500ml湖水，煮沸5min，加蓋冷卻24h后接種。 蛋白胨培養(yǎng)液：1g蛋白胨融入500ml自來水，煮沸，加蓋冷卻24h后接種。 牛奶培養(yǎng)液：將鮮牛奶以1：200的比例調(diào)配（酸奶更好）后接種。 大米培養(yǎng)液：將10粒米浸入500ml自來水中，加蓋放置24h后接種。 柵藻培養(yǎng)液：實驗室培養(yǎng)的柵藻，稀釋4倍后接種。 
湖水培養(yǎng)液：從無污染的湖中取水，煮沸，加蓋放置24小時后接種。 
3.2  培養(yǎng)方法  培養(yǎng)初期，小麥粒培養(yǎng)液是最好的方法，在試管內(nèi)放入1粒煮過的小麥粒，置于無太陽光直射的地方，2周后用100ml的燒杯擴大培養(yǎng)，杯內(nèi)投入5粒煮過的麥粒，每天滴入1滴稀釋3倍的鮮奶。使用蛋白胨和牛奶要注意加入的量不要過多；移入500ml燒杯后，每天加入1～2滴牛奶，十天左右可以得到高密度的草履蟲種群，不需要進行種群**，即可用于教學實驗；蛋白胨不能長期放置，會發(fā)臭，變質(zhì)，利用蛋白胨培養(yǎng)草履蟲比利用牛奶更難控制。牛奶和蛋白胨的投放量與草履蟲數(shù)量成正比。初次操作，應把培養(yǎng)液平均5份，置于5只100ml燒杯，編號1～5；培養(yǎng)的第一周，在編號1～5的燒杯里分別投放1、2、4、7、12滴稀釋10倍后的牛奶，每天觀察2次；第二周餌料的投放量總結(jié)第一周的培養(yǎng)結(jié)果進行適當調(diào)整。湖水和柵藻培養(yǎng)液只能維持草履蟲10～16天的營養(yǎng)，用于初期的少量培養(yǎng)比較好操作。大米培養(yǎng)液的水質(zhì)較渾濁。 
培養(yǎng)期間，燒杯口需要用3～4層紗布封口，以防其他原生動物包囊進入培養(yǎng)液。另外，需要每天早晚2次進行檢查，發(fā)現(xiàn)草履蟲**于水底，表明溶液中養(yǎng)料不足，倒掉一半上清液，加入適量營養(yǎng)液；發(fā)現(xiàn)草履蟲**在燒杯上部或水線以下的玻璃壁上，表明溶液中溶氧不足，原因是草履蟲密度過高或是水環(huán)境惡化。應立即把草履蟲移入新液或擴大培養(yǎng)；發(fā)現(xiàn)草履蟲日漸減少，可能有吸管蟲等草履蟲天敵，此時應倒掉所有培養(yǎng)的草履蟲，將器皿清洗干凈，重新接種培養(yǎng)。 4  高密度草履蟲種群的常年培養(yǎng)與管理 
4.1  培養(yǎng)  取帶綠色的湖水200ml于250ml的錐形瓶中，投入10粒小麥，取4層紗布封口，煮沸5min，靜置兩天。接種數(shù)毫升已經(jīng)提純的草履蟲,置于陰暗背光處。10～15d后準備3～5個1000ml錐形瓶，每個瓶盛湖水750ml，投入20粒小麥，紗布封口，煮沸5min。2d后每個瓶接種草履蟲50ml。培養(yǎng)溫度10～28℃（一年室內(nèi)溫度變化范圍）。 
4.2  管理  每周觀察一次，如果草履蟲分布于錐形瓶底，上層分布很少或沒有，應立刻煮麥粒加入。如果當天無時間煮麥粒，可先加入一滴牛奶；如果草履蟲**在瓶壁或培養(yǎng)液上層，表明培養(yǎng)液缺氧或營養(yǎng)過剩，這種情況大多出現(xiàn)在滴加過多牛奶后的第2d，或加入過多麥粒后的3～4d，或培養(yǎng)液加入過多，水面上升，水面與空氣接觸的表面積變小而造成草履蟲缺氧，應立即把上層的草履蟲移到干凈的錐形瓶，加入適量濾紙過濾的湖水。 
每2～3周更新一次麥粒，用13號水生生物網(wǎng)過濾一次培養(yǎng)液，網(wǎng)上物洗入大燒杯作為小型淡水渦蟲的餌料或稀釋后接種水蚤或輪蟲。 
5  草履蟲采集液、培養(yǎng)液和廢棄液的綜合開發(fā)利用  草履蟲培養(yǎng)液和置換出來的廢液將其稀釋3倍后接種水蚤，2～3周后會出現(xiàn)許多水蚤；將其稀釋2倍后接種輪蟲（Rotaria），2～3周后會出現(xiàn)許多輪蟲。草履蟲是小達氏渦蟲（Microdalyellia）、杰氏渦蟲（Gieysztoria）等小型淡水渦蟲的理想餌料，一只饑餓的中國小達氏渦蟲（Microdalyellia sinensis）1min內(nèi)能捕食20～40只草履蟲。也是實驗室人工孵化東方蠑螈、小型觀賞或?qū)嶒炗敏~的開口餌料。輪蟲是培養(yǎng)大口渦蟲的優(yōu)質(zhì)餌料，一只饑
餓的管大口渦蟲（Macrostomum tuba），5min內(nèi)能捕食30多只旋輪蟲【1】
。草履蟲培養(yǎng)廢液稀釋3倍后倒入大瓷盤，實驗室夜間開窗，不久有許多搖蚊幼蟲滋生，取羽化前的搖蚊幼蟲喂淡水三腸目渦蟲，可以3～5個月不換水。在50kg容量的玻璃缸內(nèi)注滿清水，植入3～5條水草，并用剪草法控制水草數(shù)量，靠窗，3d后把廢棄的草履蟲采集液或培養(yǎng)液2000ml倒入玻璃缸，移入枝角類，2周后移入數(shù)條三腸目、大口蟲目渦蟲，可以維持水蚤、水螅、渦蟲生長繁殖達3～5個月。水螅、三角渦蟲、大口渦蟲、草履蟲、輪蟲可以混養(yǎng)；水蚤被水螅捕食；水螅的排泄物和被水螅殺死沉于水底的死水蚤被渦蟲攝食，可以起到凈化水質(zhì)的作用；渦蟲的排泄物被細菌分解，細菌和有機碎屑又被草履蟲、輪蟲和水蚤捕食；草履蟲、輪蟲又是大口渦蟲的餌料。這種培養(yǎng)條件下，不必換水，水質(zhì)清澈，玻璃缸壁不長青苔，保持一定水位高度即可。我們實驗室數(shù)年來模仿自然生態(tài)，建立這種生態(tài)培養(yǎng)模式，節(jié)約許多人力和水資源，。并且在這種人工水生態(tài)環(huán)境下成功繁殖出一種淡水針海綿（見圖）。 

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6  草履蟲的收集、麻醉及其食物泡觀察 
6.1 收集草履蟲  采用冷凍法：把1000ml草履蟲液倒入量桶內(nèi)，放入100g冰塊，待冰融化后，用虹吸法抽除上清液即可。草履蟲遇冷下沉，是收集草履蟲的理想方法。 
6.2 麻醉草履蟲  一滴草履蟲液滴在玻片上，加一滴5％的乙醇，1～2min后加蓋玻片，草履蟲漸漸停止活動，不變形，纖毛擺動非常緩慢，伸縮泡和纖毛的活動以及細胞核易于觀察。5％的乙醇溶液需要用剛過濾后的水簇箱飼養(yǎng)水或新鮮池水臨時配制，當天使用。 
6.3 食物泡觀察  在100ml草履蟲培養(yǎng)液內(nèi)滴入0.5～1ml 0.01％中性紅溶液或亞甲基藍溶液，此時，草履蟲培養(yǎng)液幾乎無色，而顯微鏡下僅草履蟲的食物泡呈鮮紅色或藍色，利用上述【6.2】的麻醉方法，可以清晰地觀察到食物泡的遷移活動。在這種染料濃度環(huán)境下，不會影響草履蟲的正常生長。 
7 草履蟲培養(yǎng)注意事項與小結(jié)  只要有水生動物生活的水域，以本文方法都可以輕易采集到草履蟲。草履蟲的培養(yǎng)材料是一個重要因素
[2~5]
，但不是決定因素。本文認為，培養(yǎng)液的濃度是關鍵因素。其濃度在培養(yǎng)過程中是動態(tài)變化的，如，剛剛加入牛奶
或蛋白胨，第1d正常，第2～3d全部死完，這決不是餓死的，是高營養(yǎng)物質(zhì)誘發(fā)細菌大量繁殖、耗氧引起水體惡化造成的。培養(yǎng)液內(nèi)所需牛奶的濃度直接與草履蟲的密度相關，培養(yǎng)期間需要每天數(shù)次觀察草履蟲的動態(tài)，根據(jù)草履蟲的密度和分布動態(tài)，隨時作出調(diào)整。本文的常年培養(yǎng)方法是每7～14d檢查一次即可，其麥粒的投放數(shù)量是經(jīng)過長期連續(xù)培養(yǎng)實驗驗證，不斷調(diào)整得出的結(jié)論；麥粒過少，草履蟲生長緩慢而使其它原生動物孳生，草履蟲種群處于劣勢而被淘汰；過多則使溶液中細菌過度繁殖，造成水體溶解氧減少，引起草履蟲大量死亡。第1次接種需移入大量的草履蟲，促其盡快形成生，以此確保草履蟲種群的純度