1、細(xì)胞轉(zhuǎn)染有脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染，病毒轉(zhuǎn)染、電轉(zhuǎn)染、磷酸鈣法、顯微注射….下面主要講最常用的脂質(zhì)體lip2000介導(dǎo)的細(xì)胞轉(zhuǎn)染。

2、轉(zhuǎn)染效率影響因素：1、細(xì)胞種類(lèi)，細(xì)胞狀態(tài)，2、質(zhì)粒大小， 3、轉(zhuǎn)染試劑。

3、轉(zhuǎn)染前細(xì)胞的狀態(tài)和密度都非常影響轉(zhuǎn)染效率和后期的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞的密度為50%-80%較好，同時(shí)注意在轉(zhuǎn)染后收細(xì)胞時(shí)的密度不要過(guò)爆。比如轉(zhuǎn)染質(zhì)粒到細(xì)胞內(nèi)，48小時(shí)后做WB，那么此時(shí)細(xì)胞的密度最好不要長(zhǎng)滿. 因?yàn)榧?xì)胞長(zhǎng)的過(guò)爆嚴(yán)重影響細(xì)胞的狀態(tài)（周期進(jìn)程阻滯，凋亡增加等）從而影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。一般為前一天下午鋪板，第二天上午進(jìn)行轉(zhuǎn)染，48小時(shí)候收細(xì)胞進(jìn)行功能檢測(cè)。

4、不同的質(zhì)粒和脂質(zhì)體最佳搭配比例不同，轉(zhuǎn)染前，應(yīng)該摸一個(gè)最佳配比。質(zhì)粒：脂質(zhì)體=1：1， 1：1.5， 1：2， 1：2.5， 1：3， 1：3.5的梯度比例來(lái)檢測(cè)最佳轉(zhuǎn)染比例（一般質(zhì)粒有帶熒光，可以通過(guò)觀察每組熒光強(qiáng)弱來(lái)判斷轉(zhuǎn)染效率，沒(méi)有熒光的只能通過(guò)qPCR來(lái)檢測(cè)各組轉(zhuǎn)染效率）。

5、質(zhì)粒的純度影響轉(zhuǎn)染效率：1、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染基于電荷吸引原理，如果DNA不純，如帶少量的鹽離子，蛋白，代謝物污染都會(huì)顯著影響轉(zhuǎn)染復(fù)合物的有效形成及轉(zhuǎn)染的進(jìn)行。2、含有內(nèi)毒素的質(zhì)粒對(duì)細(xì)胞有很大的毒性作用。建議使用QIAGEN公司的超純質(zhì)粒抽提試劑盒。

6、轉(zhuǎn)染時(shí)，小心輕柔的將lip2000加到培養(yǎng)基中并輕輕混勻（說(shuō)明書(shū)上的用詞為：Mix gently），避免粗暴用力吹打，會(huì)導(dǎo)致脂質(zhì)體失效。

7、轉(zhuǎn)染時(shí)各種培養(yǎng)皿添加的質(zhì)粒和脂質(zhì)體參考量見(jiàn)下表：

8、雖然現(xiàn)在的大多數(shù)轉(zhuǎn)染試劑可以使用帶血清的培養(yǎng)基進(jìn)行轉(zhuǎn)染，但轉(zhuǎn)染時(shí)建議用無(wú)血無(wú)抗生素的opti-MEM培養(yǎng)基提高轉(zhuǎn)染效率。轉(zhuǎn)染后6小時(shí)更換培養(yǎng)基，一是lip2000具有一定毒性，二是培養(yǎng)基需要更換成有血清培養(yǎng)基。

9、支原體污染會(huì)嚴(yán)重影響細(xì)胞轉(zhuǎn)染的效率，且支原體污染不會(huì)像細(xì)菌污染那么明顯可見(jiàn)，轉(zhuǎn)染前可以用環(huán)丙沙星殺一殺支原體。

10、轉(zhuǎn)染后效率的檢測(cè)：1、觀察轉(zhuǎn)染后細(xì)胞熒光情況。2、qPCR驗(yàn)證。3、WB檢測(cè)敲減或者過(guò)表達(dá)蛋白。

11、轉(zhuǎn)染后發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染效率不高，可以通過(guò)兩種方法：1、復(fù)轉(zhuǎn)染，即轉(zhuǎn)染后12-24小時(shí)再次進(jìn)行轉(zhuǎn)染，前提是該細(xì)胞對(duì)脂質(zhì)體的耐受性較好，轉(zhuǎn)染后細(xì)胞死亡數(shù)較少。2、通過(guò)藥篩來(lái)殺死未轉(zhuǎn)入成功的細(xì)胞。前提是該質(zhì)粒帶有抗生素抗性的基因。

12、附加為常用的幾種轉(zhuǎn)染試劑說(shuō)明書(shū)，點(diǎn)擊帖子最下方的閱讀原文。