小編正式開啟每日奉獻一菌的編輯模式,不要離開,總有一株菌是您希望了解的~哦,對了,據說法國生物梅里埃公司有一款小型儀器適用于分枝桿菌抗酸染色與熒光染色,噓,小編也只是聽說啦~
分枝桿菌
分枝桿菌屬是一類細長或略帶彎曲、為數眾多(包括54個種)呈分支狀生長的需氧桿菌。因其繁殖時呈分支狀生長故稱分枝桿菌。本屬細菌的主要特點是細胞壁含有大量脂類,可占其干重的60%,這與其染色性、抵抗力、致病性等密切相關。一般不易著色,若經加溫或延長染色時間而著色后,能抵抗3%鹽酸酒精的脫色作用,故又稱抗酸桿菌。需氧生長,無鞭毛,無芽胞和莢膜。引起的疾病均為慢性,有肉芽腫病變的炎癥特點。
分枝桿菌的種類較多,包括結核分枝桿菌、非典型分枝桿菌和麻風分枝桿菌。
一、結核分枝桿菌
結核分枝桿菌簡稱結核桿菌,是引起人和動物結核病的病原菌。目前已知在我國引起人類結核病的主要有人型和牛型結核分枝桿菌。
?。ㄒ唬┥飳W特性
1.形態(tài)與染色:結核分枝桿菌為細長或略帶彎曲的桿菌,其大小約(1~4)μm×0.4μm。在培養(yǎng)基中可呈球狀或絲狀,陳舊培養(yǎng)物或干酪化的淋巴結中可見到分枝狀。抗酸染色時菌體呈紅色。顯微鏡下常堆積成團、成束,排列無序,也有呈鏈狀、索狀者。革蘭染色陽性,既往在組織中曾發(fā)現革蘭陽性的非抗酸顆粒,接種動物可產生典型的結核病變,后被稱為Much顆粒。金胺“0”等染色,在熒光顯微鏡下菌體可發(fā)生熒光。
2.培養(yǎng)特性:本菌專性需氧,在無氧條件下迅速死亡,在5%~10%C02環(huán)境中可刺激其生長。燭缸不適合本菌培養(yǎng),需用二氧化碳培養(yǎng)箱。培養(yǎng)溫度適應范圍較大,35~40℃均可生長,最適溫度為35~37℃。最適pH為6.5~6.8。兼性胞內寄生菌,在細胞內外均可發(fā)育繁殖,強毒株可長期生存于巨噬細胞內。生長時還需適當的濕度。本菌生長緩慢,最快的分裂速度為18h一代。
在固體培養(yǎng)基上,一般需2~6周才能長出菌落。菌落呈干燥顆粒狀,不透明,乳白色或米黃色,表面呈皺紋狀,形似菜花。
在液體培養(yǎng)基中生長較快,多為表面生長,形成菌膜,且干燥易碎而沉于管底。此種特性與菌體的疏水性有關。有毒力菌株在液體培養(yǎng)基中可呈索狀生長,無毒株則無此現象。
結核分枝桿菌營養(yǎng)要求較高,必須在血清、卵黃、馬鈴薯、甘油以及某些無機鹽類的特殊培養(yǎng)基(羅氏培養(yǎng)基)上才能生長。但經多次傳代或長期保存的菌種,也能在營養(yǎng)較簡單的培養(yǎng)基中生長。
據報道少量鐵質可促進結核分枝桿菌生長,鐵質可使細菌產生分枝桿菌生長素。選擇培養(yǎng)基加有抗微生物藥物,以抑制標本中雜菌、真菌等污染菌的生長。常用的選擇劑有結晶紫、孔雀綠、青霉素、萘啶酸、林可霉素、多粘菌素B等。
3.生化反應:各型結核桿菌均不發(fā)酵糖類,能產生過氧化氫酶,耐熱觸酶試驗、聚山梨酯-80水解試驗和耐熱磷酸酶試驗均為陰性,脲酶試驗和中性紅試驗均為陽性。人型結核分枝桿菌煙酸試驗、硝酸鹽還原和煙酰胺酶試驗均為陽性,借此可與牛型結核分枝桿菌鑒別。
4.抵抗力:對酒精敏感。
5.變異性:形態(tài)、菌落、毒力、免疫原性和耐藥性等變異。
毒力變異:卡介苗(BCG)——將有毒的牛型結核分枝桿菌培養(yǎng)于含有甘油、膽汁、馬鈴薯的培養(yǎng)基中經13年傳種230代,獲得減毒菌株,再接種動物,不能致病而使其獲得免疫力。用于預防結核病。
?。ǘ┡R床意義
1.致病性:該菌不產生內毒素和外毒素和侵襲性酶??稍诩毎麅取⑼馍L與大量繁殖,致病物質主要是莢膜、脂質、蛋白質。結核分枝桿菌主要通過呼吸道、消化道和受損傷的皮膚侵入易感機體,引起多種組織器官的結核病,其中以通過呼吸道引起的肺結核最多見。肺部感染可分為原發(fā)性感染和繼發(fā)性感染。肺外感染可發(fā)生在腦、腎、腸、及腹膜等處。機體對菌體成分和其代謝產物引起免疫損傷以及變態(tài)反應,從而導致一系列組織學上的病理變化。(機理)
2.Koch現象:機體對結核分枝桿菌的特異性免疫和遲發(fā)型超敏反應同時存在。結核的特異性免疫是通過結核分枝桿菌感染后所產生,試驗證明,將有毒結核分枝桿菌純培養(yǎng)物初次接種于健康豚鼠,不產生速發(fā)型過敏反應,而經10~14d,局部逐漸形成腫塊,繼而壞死,潰瘍,直至動物死亡。若在8~12周之前給動物接種減毒或小量結核分枝桿菌,第二次接種時則局部反應提前,于2~3d內發(fā)生紅腫硬結,后有潰瘍但很快趨于痊愈。此現象為Koch在1891年觀察到的,故稱為Koch現象。免疫性和遲發(fā)型超敏反應由不同的T細胞亞群介導。
3.結核菌素試驗:利用Ⅳ型變態(tài)反應的原理,檢測機體是否感染過結核桿菌。本實驗對嬰幼兒結核病的診斷有意義。
?。ㄈ┪⑸飳W檢驗
1.標本采集:根據感染部位的不同,可采集不同標本。結核患者各感染部位的標本中大多都混有其他細菌,為此應采取能抑制污染菌的方法。若作分離培養(yǎng),必須使用滅菌容器,患者應停藥1~2天后再采集標本??刹杉怠⒛?、糞便、胃液、胸水、腹水、腦脊液、關節(jié)液、膿液等。
2.檢驗方法
?。?)涂片檢查
直接涂片包括:
1)薄涂片:挑取痰或其他處理過的標本約0.01ml,涂沫于載玻片上,用萋-尼(熱染法)或Kinyoun(冷染法)抗酸染色,油鏡鏡檢,報告方法:-:全視野(或100個視野)未找到抗酸菌;+:全視野發(fā)現3~9個;++:全視野發(fā)現10~99個;+++:每視野發(fā)現1~9個;++++:每視野發(fā)現10個以上(全視野發(fā)現1~2個時報告抗酸菌的個數)。
2)厚涂片:取標本0.1ml,涂片,抗酸染色、鏡檢,報告方法同上。
3)集菌涂片:主要方法有沉淀集菌法和漂浮集菌法。
4)熒光顯微鏡檢查法:制片同前。用金銨“O”染色,在熒光顯微鏡下分枝桿菌可發(fā)出熒光。
?。?)分離培養(yǎng)
1)固體培養(yǎng)法:結核分枝桿菌的分離培養(yǎng)對于結核病的診斷、療效觀察及抗結核藥物的研究均具有重要意義。培養(yǎng)前針對標本應做適當的前處理,如痰可做4%H2S04或4%NaOH處理20~30min,除去雜菌再接種于羅氏培養(yǎng)基,37℃5%~10%C02培養(yǎng),定時觀察,至4~8周。此方法可準確診斷結核桿菌。
2)液體培養(yǎng)法:Bactec-460半自動培養(yǎng)方法,Bact,Vitck-3D,全自動快速培養(yǎng)系統(tǒng)。
3)噬菌體法。
?。?)基因快速診斷:PCR反向膜探針雜交,DNA探針,16s rRNA基因序列測定,高效液相色譜(HPLC)監(jiān)測分枝菌酸。簡便快速、靈敏度高、特異性強。但需注意實驗器材的污染問題,以免出現假陽性。
(4)耐藥性:結核桿菌對多種抗結核藥物產生耐藥性,對利福平耐藥是由rpoB的基因突變,鏈霉素耐藥是和編碼核糖體S12蛋白的rpsl基因發(fā)生突變以及編碼16SrRNA的rrs基因發(fā)生突變,異煙肼的耐藥與過氧化氫酶和過氧化物酶的失活有關。
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利福平、異煙肼、乙胺丁醇、鏈霉素為第一線藥物。利福平與異煙肼合用可以減少耐藥的產生。對于嚴重感染,可用吡嗪酰胺與利福平及異煙肼聯(lián)合使用。
二、非典型(非結核)分枝桿菌
分枝桿菌屬中除結核桿菌和麻風桿菌以外,均稱為非結核分枝桿菌或非典型分枝桿菌。因其染色性同樣具有抗酸性亦稱非結核抗酸菌,其中有14~17個非典菌種能使人致病,可侵犯全身臟器和組織,以肺最常見,其臨床癥狀、X線所見很難與肺結核病區(qū)別,而大多數非典菌對主要抗結核藥耐藥,故該菌的感染和發(fā)病已成為流行病學和臨床上的主要課題,與發(fā)達國家一樣,我國近年來發(fā)現率也有增高趨勢。以第Ⅲ群鳥-胞內分枝桿菌和第Ⅳ群偶發(fā)分枝桿菌及龜分枝桿菌為多。
三、麻風分枝桿菌
麻風分枝桿菌(M Leprae)簡稱麻風桿菌,是麻風病的病原菌。首先由Han-senl937年從麻風病人組織中發(fā)現。麻風分枝桿菌亦為抗酸桿菌,但較結核桿菌短而粗。抗酸染色著色均勻,呈束狀或團狀排列。為典型的胞內寄生菌,該菌所在的細胞胞質呈泡沫狀稱麻風細胞。用藥后細菌可斷裂為顆粒狀,鏈狀等,著色不均勻,叫不完整染色菌。革蘭陽性無動力、無莢膜和芽胞。
麻風分枝桿菌是麻風的病原菌,麻風是一種慢性傳染病,早期主要損害皮膚、黏膜和神經末梢,晚期可侵犯深部組織和器官,此菌尚未人工培養(yǎng)成功,已用犰狳建立良好的動物模型。人類是麻風分枝桿菌的唯一宿主,也是唯一傳染源。本病在世界各地均有流行,尤以第三世界較為廣泛。
麻風病根據機體的免疫、病理變化和臨床表現可將多數患者分為瘤型,結核樣型和界線類綜合征。
治療原則:早發(fā)現,早治療。治療藥物主要有砜類、利福平、氯苯吩嗪及丙硫異煙胺。一般采用二或三種藥物聯(lián)合治療。麻風病目前尚無特異性預防方法。