專(zhuān)題2  細(xì)胞工程   2.2 動(dòng)物細(xì)胞工程      2.2.1  動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)和核移植技術(shù)

1、動(dòng)物細(xì)胞工程有哪些常用的技術(shù)手段？

   動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)、動(dòng)物細(xì)胞核移植、動(dòng)物細(xì)胞融合、生產(chǎn)單克隆抗體等

2、什么是動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)？

   就是從動(dòng)物機(jī)體中取出相關(guān)的組織，將它分散成單個(gè)細(xì)胞后，放在適宜的培養(yǎng)基中，使其生長(zhǎng)和增值。

3、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)包括哪些基本過(guò)程？

   ⑴、動(dòng)物組織 + 胰蛋白酶或膠原蛋白酶，得到分散的單個(gè)動(dòng)物細(xì)胞。

   ⑵、培養(yǎng)液稀釋動(dòng)物細(xì)胞，制成細(xì)胞懸浮液，培養(yǎng)瓶培養(yǎng)增值。

   ⑶、出現(xiàn)接觸抑制時(shí)，再用胰蛋白酶處理成單個(gè)細(xì)胞的懸浮液，繼續(xù)培養(yǎng)增值。

4、什么是細(xì)胞貼壁？

   ⑴、概念：指培養(yǎng)過(guò)程中，細(xì)胞貼附在瓶壁上的現(xiàn)象。

   ⑵、培養(yǎng)貼附性細(xì)胞的要求：培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿的內(nèi)表面光滑、無(wú)毒。

5、什么是接觸抑制？

   指貼壁細(xì)胞因?yàn)楸砻嫦嗷ソ佑|時(shí)導(dǎo)致細(xì)胞停止分裂增值的現(xiàn)象。

6、什么是原代培養(yǎng)？

   指動(dòng)物組織經(jīng)過(guò)胰蛋白酶處理后的初次培養(yǎng)。一般能傳代約10代，得到細(xì)胞株。

7、什么是傳代培養(yǎng)？

   指貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞（10代后）經(jīng)胰蛋白酶處理后的繼續(xù)培養(yǎng)，得到細(xì)胞系，能無(wú)限傳代。

   細(xì)胞系的細(xì)胞已經(jīng)發(fā)生突變，基本上具有癌細(xì)胞的特性。

8、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)需要哪些條件？

   ⑴、無(wú)菌無(wú)毒的環(huán)境：培養(yǎng)液應(yīng)事先進(jìn)行滅菌處理。

   ⑵、營(yíng)養(yǎng)（合成培養(yǎng)基的成分）：糖、氨基酸、促生長(zhǎng)因子、無(wú)機(jī)鹽、微量元素、血漿、血清等。

   ⑶、溫度：適宜溫度未36.5⁰C±0.5⁰C

   ⑷、PH：7.2~7.4

   ⑸、氣體環(huán)境：空氣95%，CO₂5%

9、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)有哪些應(yīng)用？

   ⑴、生產(chǎn)病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體等。

   ⑵、用于檢測(cè)有毒物質(zhì)，判斷某種物質(zhì)的毒性。

10、什么是動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)？

   ⑴、概念：就是將動(dòng)物的一個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞核，移入一個(gè)已經(jīng)去掉細(xì)胞核的卵母細(xì)胞中，使其重組并

            發(fā)育成一個(gè)新的胚胎，并使這個(gè)胚胎最終發(fā)育成為動(dòng)物個(gè)體。

   ⑵、原理：細(xì)胞核全能性

   ⑶、過(guò)程：

       ①、供體體細(xì)胞經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)后，提取細(xì)胞核；

       ②、提取卵巢卵母細(xì)胞，在其減數(shù)分裂第二次分裂中期除去細(xì)胞核，制成無(wú)核細(xì)胞質(zhì)；

       ③、將供體核與無(wú)核卵母細(xì)胞質(zhì)融合，并培養(yǎng)成早期胚胎；

       ④、將早期胚胎移植到代孕母體子宮內(nèi)，發(fā)育成新個(gè)體。

11、怎樣獲得克隆動(dòng)物？

   ⑴、原理：細(xì)胞核全能性

   ⑵、技術(shù)支持：動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)

   ⑶、應(yīng)用：

       ①、加速家畜遺傳改良進(jìn)程，促進(jìn)優(yōu)良畜群繁育。

       ②、保護(hù)瀕危物種

       ③、生產(chǎn)醫(yī)用蛋白

       ④、作為異種移植的細(xì)胞、組織或器官供體。

       ⑤、用于組織器官的移植

   ⑷、尚存問(wèn)題：克隆動(dòng)物存在遺傳和生理缺陷。

                如體重較大、異常肥胖、發(fā)育困難、臟器缺陷、免疫失調(diào)等

12、什么是克隆動(dòng)物？

    指利用核移植方法的無(wú)性繁殖技術(shù)得到的動(dòng)物。

補(bǔ)充說(shuō)明：經(jīng)閱讀過(guò)本貼的網(wǎng)友提示，現(xiàn)將核移植的另一種方式增補(bǔ)于此。

  ⑴、動(dòng)物核移植：就是將動(dòng)物的一個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞核，移入一個(gè)已經(jīng)去掉細(xì)胞核的卵母細(xì)胞中，使其重組并

                 發(fā)育成一個(gè)新的胚胎，并使這個(gè)胚胎最終發(fā)育成為動(dòng)物個(gè)體。

      這是選修3教科書(shū)第47頁(yè)上的黑體字，說(shuō)明的也是傳統(tǒng)的（克隆多利羊）時(shí)的做法。

  ⑵、選修3教科書(shū)第48頁(yè)上圖2-21描述了克隆牛過(guò)程中采用的另一種核移植方法：

      將經(jīng)過(guò)培養(yǎng)的供體細(xì)胞直接注入去核卵母細(xì)胞，并以此重構(gòu)卵母細(xì)胞克隆牛。