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血漿凝血酶原時間測定
血漿凝血酶原時間測定(prothrombin time，PT)，是在體外模擬外源性凝血途徑的全部條件，測定血漿凝固所需的時間，用以反映外源凝血途徑有關(guān)因子是否異常，是篩檢凝血功能最基本，最常用的試驗之一。 1．原理 在抗凝血漿中，加入足夠量的組織凝血活酶(組織因子，TF)和適量的鈣離子，即可滿足外源凝血的全部條件。從加入鈣離子到血漿凝固所需要的時間即稱為血漿凝血酶原時間。 PT的長短反映了血漿中凝血酶原、纖維蛋白原和因子V、Ⅶ、X的水平。 2．試劑 (1)抗凝劑：109 mmol／L枸櫞酸鈉液(相當(dāng)于含2個分子結(jié)晶水的枸櫞酸鈉32 g／L)。 (2)凝血活酶試劑：市售商品，應(yīng)標有ISI、批號及有效期。凍干者應(yīng)按說明書指定的溶液復(fù)溶。 (3)氯化鈣(CaCl2)溶液：濃度為25 mmol／L(目前大部分商品試劑已將凝血活酶、緩沖液與氯化鈣液事先混合好，可不必另配 CaCl2液)。 (4)質(zhì)控物(正常及異常對照血漿)：有商品供應(yīng)。 3．儀器 (1)手工法：秒表，保持36．5～38．5℃的恒溫水浴箱。 (2)儀器法：各種自動或半自動凝血儀，嚴格按各自的說明書操作。儀器法依測定原理主要有三種：光學(xué)法即比濁法、電流法即鉤方法和黏度法即磁珠法。 4．血液標本的采集、運送及貯存 (1)用一次性塑料采血器或硅化玻璃注射器，采靜脈血液。采血技術(shù)要熟練，不可過多損傷血管及周圍組織，致使組織液混入血液中。采血時止血帶不可束縛過緊，并不應(yīng)超過2分鐘。針筒內(nèi)見到回血即應(yīng)解開止血帶，否則某些凝血及纖溶因子會活化，并可使血細胞比容(Hct)升高。 (2)靜脈采血1．8 ml，加入含有109 mmol／L枸櫞酸鈉溶0．2 ml的試管中，充分混勻。最好用已加有定量枸櫞酸鈉液的專用硅化真空采血管采血，以保證血與枸櫞酸鈉液比例準確，防止凝血因子活化，并保持清潔，防止不潔的試管和不合格橡皮塞的污染。 (3)貯血應(yīng)用清潔塑料管或硅化玻璃管或其他不沾濕的容器，避免接觸活化凝血因子。取得血液后應(yīng)盡快送到血液檢驗室。在運送中應(yīng)避免劇烈振動和日光直射。一般要求自采血到測定不得超過4小時，不可久貯。如在室溫中貯存過久，V因子會破壞；另一方面，在4℃貯存過久，會導(dǎo)致第Ⅶ因子活化。實驗室在取得血樣后應(yīng)盡快分離血漿并盡快測定。血液如發(fā)現(xiàn)凝固，應(yīng)棄去不用。 5．標本制備 PT和AFTT試驗都必須用乏血小板血漿(PPP)，以3 000轉(zhuǎn)／分鐘，離心30分鐘。用濁度法測定終點的自動化凝血儀，溶血和較明顯的黃疸及脂血均會影響測定結(jié)果，此時可改用手工法或電子機械式(非比濁法)凝血儀測定。 6．測定步驟 (1)手工法 ①按上述方法制備乏血小板血漿。 ②將氯化鈣凝血活酶溶液，健康人混合凍于血漿和待測血漿，置37％水浴中預(yù)溫5分鐘。 ③取試管2支，分別加入待測血漿、健康人混合凍干血漿0．1 ml，37℃水浴預(yù)溫30秒，再加入預(yù)溫的25 mmol／L氯化鈣凝血活酶溶液0．2 ml，混勻，開動秒表計時。 ④不斷地傾斜試管至液體流動緩慢趨于停止時，終止計時，記錄所需時間。重復(fù)以上測定2～3次，取其平均值。 ⑤健康人混合凍干血漿的測定值應(yīng)在11～13秒范圍，待測血漿PT值取2～3次的平均值報告。 (2)儀器法：凝血測定儀一般均供應(yīng)配套試劑，備有詳細說明書，應(yīng)嚴格按說明書操作。 7．注意事項 (1)整個操作所用器具應(yīng)使用對凝血因子無激活作用的塑料制品或硅化的玻璃器皿。 (2)采血要順利，抗凝要充分，采血后應(yīng)仔細檢查標本有無溶血，黃疸和凝血塊，任何微小的凝塊都會影響測定結(jié)果，必須重新采血。 (3)采血后宜在1小時內(nèi)完成測定，4℃冰箱內(nèi)保存不應(yīng)超過4小時。 (4)水浴溫度要控制在(37．0±0．5)℃，溫度過高或過低都可影響測定結(jié)果。 (5)血細胞比容(Hct)<0．2或>0．5時，抗凝劑的用量應(yīng)做適當(dāng)?shù)恼{(diào)整，抗凝劑(ml)=(100-Hct)×血液(ml) ×0．00185。 (6)由于每次使用的氯化鈣凝血活酶活性不盡相同，測定的條件也有變動，故每次測定均需有正常對照，氯化鈣凝血活酶必須注明國際敏感指數(shù)(ISI)。 8．報告格式和參考值 (1)以直接測定的時間(PT)報告：參考值PT為11～13秒，超過正常對照3秒有意義。 (2)以PT比值(PTR)報告：PTR=待測血漿的PT／健康人混合凍干血漿的PT。參考值PTR為0．85～1．15。 (3)以國際標準化比值(INR)報告：INR=PTRISI(ISI為氯化鈣凝血活酶試劑國際敏感指數(shù))；參考值INR：0．8～1．5。由于PT和PTR測定值存在的偏差較大，對臨床上指導(dǎo)口服抗凝藥物治療用量有一定危險性，因此在報告PT、PTR時，一定要報告INR。 (4)凝血酶原時間活動度(PTA)：即先以不同稀釋度的血漿制成校正曲線，然后從曲線上讀取。參考值為PTA≥80％。 9．臨床意義 (1)PT延長：PT超過正常對照3秒以上或凝血酶原比值超過正常范圍即為延長，主要見于：①先天性因子Ⅱ、V、Ⅶ、X減少及纖維蛋白原的缺乏(低或無纖維蛋白血癥)；②獲得性凝血因子缺乏，如DIC、原發(fā)性纖溶亢進癥、肝病、阻塞性黃疸、維生素K缺乏、血循環(huán)中抗凝物質(zhì)增多等。 (2)PT縮短：①先天性因子V增多；②DIC早期(高凝狀態(tài))；③口服避孕藥、其他血栓前狀態(tài)及血栓性疾病(凝血因子和血小板活性增高，血管損傷等)。 (轉(zhuǎn)自：中國期刊網(wǎng) 孫曉春 李 娟） |
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