培養(yǎng)基medium

（一）培養(yǎng)基定義

    培養(yǎng)基(medium)是人工配制的適合微生物生長(zhǎng)繁殖或積累代謝產(chǎn)物的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。任何培養(yǎng)基中均需含有微生物所必需的能源、碳源、氮源、礦質(zhì)元素、水和生長(zhǎng)因素，但不同營(yíng)養(yǎng)類型、不同種類的微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)元素的要求又有很大差異。目前已使用的各種培養(yǎng)基都是前人經(jīng)過(guò)反復(fù)實(shí)踐，比較設(shè)計(jì)的成果。

     礦質(zhì)元素、生長(zhǎng)因子：微生物生長(zhǎng)繁殖需要P、K、Na、S、Mg、Ca等主要礦質(zhì)元素以及Fe、Cu等微量元素，因此培養(yǎng)基中常加入K2HPO4、KH2PO4、MgSO4、NaCl、KCl、FeSO4等無(wú)機(jī)鹽類；生長(zhǎng)因子主要是調(diào)節(jié)微生物代謝活動(dòng)的B族維生素，常由酵母膏、肝浸出液等提供。許多天然成分的原料如牛肉膏、麥芽汁、玉米粉、豆芽汁等，含有各種無(wú)機(jī)元素和生長(zhǎng)因子，不需另外添加。某些微生物的生長(zhǎng)需要特殊的生長(zhǎng)因子，如嗜血桿菌需要在培養(yǎng)基中加入Ⅴ(輔酶）、Ⅹ（高鐵血紅素）

（三）培養(yǎng)基的類型

    根據(jù)原料來(lái)源不同，可將培養(yǎng)基分為合成培養(yǎng)基、半合成培養(yǎng)基與天然培養(yǎng)基。

    合成培養(yǎng)基：由化學(xué)成分已知的有機(jī)物和無(wú)機(jī)物配制而成。成分精確，重復(fù)性強(qiáng)。但營(yíng)養(yǎng)局限，微生物生長(zhǎng)緩慢。適用于菌種分離、選育、遺傳分析及生物測(cè)定等。如培養(yǎng)放線菌的高氏培養(yǎng)基、培養(yǎng)霉菌的察氏培養(yǎng)基以及各種化能自養(yǎng)菌培養(yǎng)基等。

    半合成培養(yǎng)基：由某些天然物質(zhì)與少量已知成分的化學(xué)物質(zhì)配制而成。營(yíng)養(yǎng)全面，能有效地滿足微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)的需求。廣泛應(yīng)用于微生物的培養(yǎng)。如培養(yǎng)細(xì)菌用的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，培養(yǎng)霉菌的土豆葡萄糖培養(yǎng)基，工業(yè)生產(chǎn)中常用的玉米粉等天然物質(zhì)加無(wú)機(jī)鹽配制的各種發(fā)酵培養(yǎng)基等。

    天然培養(yǎng)基：由化學(xué)成分不清楚或不衡定的天然有機(jī)物配制而成。成分復(fù)雜，但營(yíng)養(yǎng)豐富全面。常用于實(shí)驗(yàn)研究和生產(chǎn)。如麥芽汁培養(yǎng)基、玉米粉培養(yǎng)基，以及生產(chǎn)中使用的麩皮、鋸末等。

    根據(jù)培養(yǎng)基的物理性質(zhì)，可分為液體培養(yǎng)基、固體培養(yǎng)基和半固體培養(yǎng)基。

    液體培養(yǎng)基：用各種營(yíng)養(yǎng)成分加水配成，或用天然物質(zhì)的浸汁(麥芽汁、豆芽汁等)制成。組分均一，適宜各類微生物的營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)。廣泛應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)研究及大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)中，有利于廣泛獲得大量菌體或代謝產(chǎn)物。

    固體培養(yǎng)基：在液體培養(yǎng)基中加入凝固劑，或用麩皮等固體原料配制。常用的凝固劑是瓊脂(又稱瓊膠、洋菜)，由石花菜等海藻中提取加工制成。市售瓊脂為條狀、片狀或粉末狀，主要成分為多聚半乳糖的硫酸酯，絕大多數(shù)微生物不能將其分解，在培養(yǎng)基中僅起支撐作用。其熔點(diǎn)約98℃，凝固點(diǎn)42℃，1.5～2％(2%--2.5%書(shū)上記錄)的水溶液在一般培養(yǎng)溫度下呈凝膠狀態(tài)。瓊脂固體培養(yǎng)基廣泛應(yīng)用于微生物的分離培養(yǎng)、菌種鑒定和保藏。

    半固體培養(yǎng)基：液體培養(yǎng)基中加入0.2～0.5％瓊脂制成。用于觀察細(xì)菌的運(yùn)動(dòng)、菌種鑒定及測(cè)定噬菌體的效價(jià)等。

    根據(jù)培養(yǎng)基的用途，可分為選擇培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基、加富培養(yǎng)基、基本培養(yǎng)基等。

    選擇培養(yǎng)基：根據(jù)某一類或某種微生物的特殊營(yíng)養(yǎng)要求而設(shè)計(jì)的培養(yǎng)基，用于提高所需微生物的分離效率。如分離固氮微生物的無(wú)氮培養(yǎng)基、加入濾紙條或纖維素粉為碳源分離纖維分解菌的培養(yǎng)基。在培養(yǎng)基中加入某種化合物，可有效地分離出對(duì)這種化合物有抗性的微生物，例如在放線菌培養(yǎng)基中加入數(shù)滴10％的酚，可抑制細(xì)菌和霉菌的生長(zhǎng)；加入一定量的青霉素、鏈霉素，可抑制細(xì)菌生長(zhǎng)等。

鑒別培養(yǎng)基：根據(jù)微生物的代謝特點(diǎn)，在培養(yǎng)基中加入某種指示劑，通過(guò)顯色反應(yīng)以鑒別不同的微生物。例如檢查乳制品和飲用水中是否有腸道細(xì)菌污染所用的伊紅-美藍(lán)培養(yǎng)基。當(dāng)大腸桿菌等腸道細(xì)菌生長(zhǎng)時(shí)，發(fā)酵培養(yǎng)基中的乳糖，使加入的伊紅-美藍(lán)變色，在菌落上沉積為紫黑色，并呈現(xiàn)金屬光澤。

（四）培養(yǎng)基的制備方法

    以下為常規(guī)方法，如配方中有特殊規(guī)定或要求，以配方為依據(jù)。

    1.根據(jù)配方，計(jì)算各種營(yíng)養(yǎng)成分用量。一般藥品可用普通藥物天平稱量，用量少的藥品，可按比例配成高濃度溶液，再按所需量用移液管吸取。稱好的藥品放入玻璃燒杯或搪瓷杯中。

2.在另一容器中將所需量的水(一般可用自來(lái)水，有特殊要求時(shí)需用蒸餾水)加熱，取全量的1/3左右倒入放藥品的容器中，用玻璃棒攪拌，待藥品全溶后，再將其余熱水全部倒入。

3.若配制固體培養(yǎng)基，則稱取1.5～2％?(2%--2.5%)的瓊脂放入已溶化的營(yíng)養(yǎng)液中，繼續(xù)加熱至瓊脂全部溶解。加熱中隨時(shí)攪拌，防止溢出或糊底。燒糊的培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)破壞，并產(chǎn)生有毒物質(zhì)，不宜再用。

4.待溶化的培養(yǎng)基稍冷卻后，按配方要求調(diào)整pH值。先取10毫升培養(yǎng)基裝入試管中，用pH試紙測(cè)其自然pH，再用1％NaOH(或1％HCl)調(diào)至所需pH，根據(jù)用量計(jì)算，換用10％NaOH(或10％HCl)調(diào)整所配全量培養(yǎng)基的pH。加堿(或酸)溶液時(shí)，應(yīng)邊滴加邊攪拌，至應(yīng)加量將近用完時(shí)，再次測(cè)試，最后調(diào)至要求的pH值。

5.配好的培養(yǎng)基，根據(jù)需要趁熱分裝至試管或錐形瓶中。分裝需用漏斗，以免瓊脂粘在管口或瓶口上。裝瓶量一般為瓶容量的1/3～1/2；裝試管一般為試管高度的1/5～1/4，以免滅菌時(shí)培養(yǎng)基上溢，粘濕棉塞。

6.用預(yù)先制好的棉塞塞住管口或瓶口。棉塞既有利于通氣，又有濾菌作用，故松緊、大小應(yīng)適當(dāng)，以免使用時(shí)影響操作。

最后用牛皮紙或報(bào)紙包住棉塞，扎緊在瓶頸或試管上方，以免滅菌時(shí)水蒸汽沾濕棉塞或脫落。

7.滅菌后取出的固體培養(yǎng)基，根據(jù)需要可將試管立即斜放，冷凝后即成斜面培養(yǎng)基，用于菌種擴(kuò)大培養(yǎng)及保藏；錐形瓶中的培養(yǎng)基，倒入無(wú)菌培養(yǎng)皿中，冷凝后即制成平板培養(yǎng)基，可用于菌種的分離、鑒定等。液體培養(yǎng)基冷卻后可直接根據(jù)需要接入菌種。

(五）培養(yǎng)基配方舉例

1)   氧化硫桿菌培養(yǎng)基

粉狀硫10克

MgSO40.5克

(NH4)2SO40.4克

FeSO40.01克

KH2PO44克

CaCl20.25克

水1000毫升

自然pH

2)   牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基(常用的細(xì)菌培養(yǎng)基)

牛肉膏5克

蛋白胨10克

NaCl5克

水1000毫升

pH7.2～7.4

瓊脂15～20克

3)   高氏一號(hào)培養(yǎng)基(常用的放線菌培養(yǎng)基)

可溶性淀粉20克

KNO31克

K2HPO40.5克

MgSO40.5克

NaCl 0.5克

FeSO40.01克

水1000毫升

瓊脂15～20克

pH7.4～7.6

4)   察氏培養(yǎng)基(培養(yǎng)霉菌用)

蔗糖 20克

NaNO33克

K2HPO41克

KCl1克

MgSO40.5克

FeSO40.01克

瓊脂20克

水1000毫升

自然pH

5)   無(wú)氮培養(yǎng)基(培養(yǎng)自生固氮菌用)

葡萄糖 10克

NaCl0.2克

KH2PO40.2克

CaSO4·2H2O0.1克

MgSO40.2克

CaCO35克

瓊脂 20克

水1000毫升

自然pH

6)   伊紅-美藍(lán)培養(yǎng)基(檢查腸道細(xì)菌用)

蛋白胨 10克

K2HPO42克

乳糖10克

瓊脂25克，

水1000毫升

pH7.6

2％伊紅水溶液2毫升

0.5％美藍(lán)水溶液2毫升

將乳糖、伊紅、美藍(lán)分別滅菌后，加入滅菌的培養(yǎng)基中搖勻，倒平板。

                                                來(lái)源：來(lái)寶網(wǎng)

 7）SS瓊脂

基礎(chǔ)培養(yǎng)基
　　牛肉膏　　5g
　　脙胨　5g
　　三號(hào)膽鹽3.5g
　　瓊脂　17g
　　蒸餾水1000mL
完全培養(yǎng)基
　　基礎(chǔ)培養(yǎng)基100mL
　　乳糖10g
　　檸檬酸鈉8.5g
　　硫代硫酸鈉8.5g
　　10%檸檬酸鐵溶液10mL
　　1%中性紅溶液2.5mL
　　0.1%煌綠溶液0.33mL
　　加熱溶化基礎(chǔ)培養(yǎng)基，按比例加入上述染料以外之各成分，充分混合均勻，校正至pH7.0，加入中性紅和煌綠溶液，傾注平板。
注：①制好的培養(yǎng)基宜當(dāng)日使用，或保存于冰箱內(nèi)于48h內(nèi)使用。
　　②煌綠溶液配好后應(yīng)在10d以內(nèi)使用。
　?、劭梢再?gòu)用SS瓊脂的干燥培養(yǎng)基。

【用途與用法】

用于沙門氏菌、志賀氏菌的選擇性分離培養(yǎng)

有較強(qiáng)的抑菌力，用于志賀菌和沙門菌的分離。因選擇性過(guò)強(qiáng)，可影響檢出率，所以，使用時(shí)最好加一種弱選擇平板以配對(duì)互補(bǔ)。

8）麥康凱瓊脂

成分
　　蛋白胨17g
　　脙胨 3g
　　豬膽鹽(或牛、羊膽鹽) 5g
　　氯化鈉　 5g
　　瓊脂　17g
　　蒸餾水1000mL
　　乳糖10g
　　0.01%結(jié)晶紫水溶液10mL
　　0.5%中性紅水溶液5mL
制法
　　1　將蛋白胨、胨、膽鹽和氯化鈉溶解于400mL蒸餾水中，校正pH7.2。將瓊脂加入600mL加熱溶解。將兩液合并，分裝于燒瓶?jī)?nèi)，121℃高壓滅菌15min備用。
　　2　臨用時(shí)加熱溶化瓊脂，趁熱加入乳糖，冷至50～55℃時(shí)，加入結(jié)晶紫和中性紅水溶液，搖勻后傾注平板。

注：結(jié)晶紫及中性紅水溶液配好后須經(jīng)高壓滅菌。

    具中等強(qiáng)度選擇性，抑菌力略強(qiáng)，有少數(shù)革蘭陰性菌不生長(zhǎng)。在麥康凱平板上能否生長(zhǎng)，是非發(fā)酵菌鑒定的一個(gè)依據(jù)。？

9）克氏雙糖鐵瓊脂(換用方法)

成分
　　蛋白胨　　　　　　 20g
　　牛肉膏　　　　　　 3g
　　酵母膏　　　　　　 3g
　　乳糖　　　　　　　 10g
　　葡萄糖　　　　　　 1g
　　氯化鈉　　　　　　 5g
　　檸檬酸鐵銨　　　　 0.5g
　　硫代硫酸鈉　　　　 0.5g
　　瓊脂　　　　　　　 12g
　　酚紅　　　　　　　 0.025g
　　蒸餾水　　　　　　 1000mL
　　pH7.4

制法
　　將除瓊脂和酚紅以外的各成分溶解于蒸餾水中，校正pH。加入瓊脂，加熱煮沸，以溶化瓊脂。加入0.2%酚紅水溶液12.5mL，搖勻。分裝試管，裝量宜多些，以便得到比較高的底層。121℃高壓滅菌15min。放置高層斜面?zhèn)溆谩?o:p>

克氏雙糖鐵瓊脂(KI)

上層培養(yǎng)基成分
　　血消化湯(PH7.6)　　　 500mL
　　瓊脂　　　　　　　　　6.5g
　　硫代硫酸鈉　　　　　　0.1g
　　硫酸亞鐵銨　　　　　　0.1g
　　乳糖　　　　　　　　　5g
　　0.2%酚紅溶液　　　　　5mL
下層培養(yǎng)基成分
　　血消化湯(pH7.6)　　　 500mL
　　瓊脂　　　　　　　　　2g
　　葡萄糖　　　　　　　　1g
　　0.2%酚紅溶液　　　　　5mL
制法
　　1　取血消化湯按上層和下層的瓊脂用量，分別加入瓊脂，加熱溶解。
　　2　分別加入其他各種成分。將上層培養(yǎng)基分裝于燒瓶?jī)?nèi)；將下層培養(yǎng)基分裝于滅菌12mm×100mm試管內(nèi)，每管約2mL。115℃高壓滅菌10min。
　　3　將上層培養(yǎng)基放在56℃水浴箱內(nèi)保溫；將下層培養(yǎng)基直立放在室溫內(nèi)，使其凝固。
　　4　俟下層培養(yǎng)基凝固后，以無(wú)菌手續(xù)將上層培養(yǎng)基分裝于下層培養(yǎng)基的上面，每管約1.5mL，放成斜面。

10）伊紅美藍(lán)瓊脂 (EMB)

伊紅美藍(lán)瓊脂是由 HOLT-HARRIS and TEAGUE (1916) 提出，按照 GB 標(biāo)準(zhǔn)和 SN 標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的培養(yǎng)基，用于食品、乳制品、水源和病源標(biāo)本中的革蘭氏陰性腸道菌的分離和鑒別。蛋白胨提供細(xì)菌生長(zhǎng)發(fā)育所需的氮源、維生素和氨基酸，乳糖提供發(fā)酵所需的碳源，磷酸氫二鉀維持緩沖體系，伊紅γ和美藍(lán)抑制絕大部分革蘭氏陽(yáng)性菌的生長(zhǎng)。瓊脂是凝固劑。大腸桿菌在 EMB 上發(fā)酵乳糖，形成黑色菌落，大部分有金屬光澤。沙門氏菌形成無(wú)色菌落。金黃色葡萄球菌基本上不生長(zhǎng)。

成方 (g/L)

蛋白胨10.0

乳糖10.0

伊紅γ0.4

美藍(lán)0.065

磷酸氫二鉀 (K2HPO4）2.0

瓊脂15.0

pH 7.1 ± 0.2 25 ℃

此配方可以進(jìn)行改良或增加營(yíng)養(yǎng)成份以獲得最佳的結(jié)果。
注意  此培養(yǎng)基僅用于試驗(yàn)室使用。
用法
稱取本品 37.4g 加熱溶解于 1000ml 蒸餾水，分裝三角瓶 , 每瓶 200ml ， 121 ℃ 高壓滅菌 15min ，冷至 50 ℃ 時(shí)傾倒無(wú)菌平皿。

貯存
制備好的培養(yǎng)基保存于 2 -8 ℃ ，應(yīng)避免光線直接照射。干燥培養(yǎng)基應(yīng)放置于陰暗干燥處， 保存溫度為 2 -25 ℃ 。

失效
干燥培養(yǎng)基超過(guò)保質(zhì)期、結(jié)塊和顏色變化都不能使用。
操作步驟
使用前，把制備好的培養(yǎng)基放置室溫 10-15 分鐘。

1.     按不同的標(biāo)準(zhǔn)和方法制備樣品；

2.     把樣品液加入試管中；

3.     37oC 培養(yǎng) 18-24 小時(shí)進(jìn)行計(jì)數(shù)。 .

質(zhì)量控制

1 、外觀： 此干燥培養(yǎng)基的粉末均勻，具有良好的流動(dòng)性，呈紫紅色。配制好的平板呈暗紅到藍(lán)紫色。
2 、微生物試驗(yàn)
在 37oC 培養(yǎng) 18-24 小時(shí)：

方法的局限性
本培養(yǎng)基僅為細(xì)菌鑒定的一部份，需做其它補(bǔ)充試驗(yàn)。

可抑制革蘭陽(yáng)性細(xì)菌，有選擇地促進(jìn)革蘭陰性細(xì)菌生長(zhǎng)，是較好的弱選擇性培養(yǎng)基。發(fā)酵型革蘭陰性桿菌因分解乳糖能力不同，在此平板上菌落顏色不同，便于鑒別菌種。

11）XLD 培養(yǎng)基

Xylose Lysine Desoxycholate Medium    
一種選擇性培養(yǎng)基，用來(lái)從食物和臨床標(biāo)本中分離和區(qū)分沙門氏菌和志賀氏菌的優(yōu)秀培養(yǎng)基。
配方：
產(chǎn)品名稱         產(chǎn)品成分        成分組成( 克/升 ) 
XLD 培養(yǎng)基
                   酵母浸膏       3 
                   木糖         3.75 
                   乳糖         7.5 
                    蔗糖         7.5 
                   Ｌ－賴氨酸      5 
                   去氧膽酸鈉     2.5 
                    檸檬酸鐵銨     0.8 
                    硫代硫酸鈉     6.8 
                     NaCl           5 
                    酚紅         0.08 
                     瓊脂          12 
                    PH 7.4 ±0.2 
注意事項(xiàng)：
1、干燥培養(yǎng)基超過(guò)保質(zhì)期、結(jié)塊和顏色變化都不能使用。 
2、不能高壓滅菌 

成分 　

硝酸鈉　3g 　　

磷酸氫二鉀　1g 　　

硫酸鎂(MgSO4·7H2O)　0.5g 　　

氯化鉀　0.5g 　　

硫酸亞鐵　0.01g 　　

蔗糖　30g 　　

瓊脂　20g 　　

蒸餾水　1000mL 　　

制法 　　

加熱溶解，分裝后121℃滅菌20min。 　　

用途 　　

    青霉、曲霉鑒定及保存菌種用。

12）大腸桿菌顯色培養(yǎng)基

大腸桿菌顯色培養(yǎng)基是青島海博生物公司改良的培養(yǎng)基，用于食品、水、牛奶、冰激凌和肉制品中大腸桿菌的快速檢測(cè)。大腸桿菌顯藍(lán)綠色，大腸菌群顯無(wú)色，其它菌顯黃色或無(wú)色，革蘭氏陽(yáng)性菌被抑制。

成份 (g/L)

此配方可以進(jìn)行改良或增加營(yíng)養(yǎng)成份以獲得最佳的結(jié)果。

注意
  此培養(yǎng)基僅供實(shí)驗(yàn)室使用。
用法
   稱取本品 50.1g 加入 1000ml 蒸餾水，加熱溶解并不停攪拌，煮沸不要超過(guò) 1 分鐘。分裝三角瓶， 121 ℃ 高壓滅菌 15 分鐘。取 1ml 制備好的樣品液加入直徑為 9cm 無(wú)菌平皿中心，傾入冷卻至 45 -50 ℃ 培養(yǎng)基約15ml ，混勻，凝固后， 36 ± 1 ℃ 倒置培養(yǎng) 18 ～ 24h ?；蚶鋮s至 45-50 ℃時(shí)，傾入無(wú)菌平皿，瓊脂完全凝固后，在 37 ℃的培養(yǎng)箱中倒置放置 1-2 小時(shí)，加入適當(dāng)稀釋度的樣品液 1ml ，涂布于培養(yǎng)基上， 36 ± 1 ℃培養(yǎng) 18 ～ 24h 。
貯存
  制備好的平板應(yīng)立即使用，應(yīng)避免光線直接照射。干燥培養(yǎng)基應(yīng)放置于陰暗干燥處， 保存溫度 2-8 ℃，注意避光保存。
失效
  干燥培養(yǎng)基超過(guò)保質(zhì)期、結(jié)塊和顏色變化都不能使用。
操作步驟
1 、按國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)、 SN 標(biāo)準(zhǔn)、 FDA 標(biāo)準(zhǔn)或其它方法制備樣品液
2 、取樣品液 1ml 加入 冷卻至 45-50 ℃顯色培養(yǎng)基中混勻或 涂布于平板上
3 、 36 ± 1 ℃ 培養(yǎng) 18 ～ 24h ，選用有 30 ～ 200 個(gè)菌落的平板，計(jì)數(shù)平板上出現(xiàn)的典型大腸桿菌菌落。大腸桿菌典型菌落為藍(lán)綠色，其它細(xì)菌為無(wú)色或黃色菌落。
總大腸桿菌 = 藍(lán)綠色菌落
4 、對(duì)可疑大腸桿菌菌落可劃線接種到營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上， 36 ± 1 ℃培養(yǎng) 12-16 小時(shí)，挑取單菌落做大腸桿菌全套生化試驗(yàn) ( 本公司有生化鑒定管套裝 20 支 x3 種 )
質(zhì)量控制
1 、外觀
此干燥培養(yǎng)基的粉末均勻，具有良好的流動(dòng)性，呈乳白色。制備好的平板呈透明無(wú)色固體培養(yǎng)基。
2 、微生物試驗(yàn)
在 36 ± 1 ℃ 培養(yǎng) 18 ～ 24h 小時(shí):

方法的局限性
  該顯色培養(yǎng)基鑒定大腸桿菌 ，少數(shù)情況下可能會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性，但不會(huì)出現(xiàn)假陰性，有時(shí)可能需做其它補(bǔ)充試驗(yàn)。

典型特征
  大腸桿菌典型菌落為藍(lán)綠色，大腸菌群為無(wú)色菌落，其它細(xì)菌為無(wú)色或黃色菌落。

13）BAM Media M178: Wagatsuma Agar