結(jié)    果

    MSC對再生障礙性貧血小鼠存活率的影響

    照射組于照射后2-3天、2周體重輕微下降，3周左右恢復(fù)正常，至28天時(shí)均存活。模型組于制模后3-7天體重明顯下降，第9天略有回升，12天再次明顯 下降，蒼白、活動明顯減少，弓背，松毛，9只于12-19天死亡，解剖發(fā)現(xiàn)各臟器蒼白，胸腺、脾臟、淋巴結(jié)萎縮，部分小鼠小腸有出血點(diǎn)，另2只于3周后體 重回升，活動漸增多，毛光滑，模型組小鼠28天存活率為18.2%。MSC組體重變化與照射組相似，2只于16天死亡，其28天存活率為80%。各組 KaplanMeier生存函數(shù)曲線如圖1所示，MSC組與模型組生存曲線比較差別具有極顯著意義（Log Rank統(tǒng)計(jì)量=7.33，p=0.0068）。

    MSC對外周血象的影響

    結(jié)果見附表。如表所示，模型組小鼠于制模后7天WBC明顯下降，與MSC組及照射組比較差異均具有顯著意義（p<0.01）；10天時(shí)3組血象指標(biāo) 均顯著降低；14天時(shí)模型組外周血象仍明顯降低，而MSC組和照射組開始回升，至21天血象基本恢復(fù)正常。9只再生障礙性貧血模型鼠于3周內(nèi)死亡，2只生 存至21天時(shí)血象亦逐漸回升。

    MSC對骨髓造血的影響

    再生障礙性貧血模型小鼠瀕死前單測骨髓有核細(xì)胞數(shù)為0.03×107，存活至28天的2只小鼠骨髓有核細(xì)胞數(shù)均為0.3×107，造血集落培養(yǎng)在實(shí)驗(yàn)中均 無集落形成；制模后28天 MSC組骨髓有核細(xì)胞數(shù)平均為1.3 ×107，顯著高于模型組（p<0.01），集落培養(yǎng)可見30-50個(gè)CFUGM生長。照射組與MSC組結(jié)果一致。骨髓病理切片如圖2所示，模型 組骨髓有核細(xì)胞增生明顯減低，有核細(xì)胞數(shù)明顯減少，由大量脂肪細(xì)胞填充骨髓腔，而MSC和照射組骨髓增生活躍，脂肪細(xì)胞較少，以MSC組更為顯著。

　　討    論

    再生障礙性貧血模型小鼠經(jīng)亞致死量射線照射后，造血干細(xì)胞和骨髓微環(huán)境均受到嚴(yán)重?fù)p傷，當(dāng)輸入次要組織相容性抗原不合的小鼠胸腺淋巴結(jié)細(xì)胞后，可進(jìn)一步誘導(dǎo)免疫性骨髓造血功能損傷。再生障礙性貧血小鼠的病理改變與人類再生障礙性貧血相似，是目前篩選治療藥 物較理想的再生障礙性貧血模型［6］。姚軍等采用的照射劑量是6 Gy，再生障礙性貧血發(fā)生率為96.2%，死亡時(shí)間集中在制模后8-14天。我們在預(yù)實(shí)驗(yàn)中采用6 Gy照射劑量，4只照射小鼠于照射后2周左右均死亡，6只模型小鼠于制模后7-8天全部死亡，照射劑量偏大。本研究將照射劑量調(diào)整為5 Gy，照射組小鼠均出現(xiàn)一過性全血細(xì)胞減少，3周左右血象基本恢復(fù)正常，而模型組小鼠于制模后1周出現(xiàn)血象下降，81.8%于3周內(nèi)因造血功能衰竭死亡，病理檢查符合再生障礙性貧血表現(xiàn)。

    MSC具有高增殖和多向分化潛能，易于采集、分離純化和體外擴(kuò)增，不表達(dá)或僅表達(dá)可忽略水平的MHCⅡ及T細(xì)胞共刺激分子B71、B72、CD40、CD40L，免疫原性弱［7］，在細(xì)胞治療、基因治療中具有廣泛的應(yīng)用前 景。近年來證實(shí)，MSC除具有促進(jìn)體內(nèi)造血重建外，還具有抑制同種異基因免疫反應(yīng)、降低移植物抗宿主病的作用［1,2］。本研究結(jié)果顯示，于制模后3天靜 脈輸注MSC可減慢再生障礙性貧血模型小鼠白細(xì)胞下降速度，促進(jìn)骨髓造血恢復(fù)，明顯降低死亡率。骨髓病理切片結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)，MSC靜脈輸注對再生障礙性 貧血小鼠骨髓造血恢復(fù)具有積極作用。MSC促進(jìn)再生障礙性貧血小鼠骨髓造血恢復(fù)的機(jī)制尚不清楚，可能與下列因素有關(guān)：①免疫負(fù)調(diào)節(jié)作用：體外實(shí)驗(yàn)證 實(shí)，MSC具有抑制異基因淋巴細(xì)胞增殖作用，且有劑量依賴性，但其作用機(jī)制尚不十分清楚。陸曉茜等［2］認(rèn)為，MSC可能是通過細(xì)胞間相互作用及誘導(dǎo)T淋 巴細(xì)胞亞群由Th1、Tc1向Th2、Tc2極化有關(guān)；寧紅梅等［8］體外實(shí)驗(yàn)研究提示，MSC的免疫負(fù)調(diào)節(jié)作用可能與誘導(dǎo)CD4+CD25+免疫調(diào)節(jié)性 T細(xì)胞增高有關(guān)。本研究于制模后3天輸入一定劑量的MSC，在一定程度上可以抑制胸腺淋巴結(jié)細(xì)胞介導(dǎo)的針對造血系統(tǒng)的免疫反應(yīng)，從而減輕免疫介導(dǎo)性骨髓損 傷。MSC組小鼠外周血象和骨髓病理改變與單照射組小鼠結(jié)果基本一致，這些高度提示MSC主要是通過免疫負(fù)調(diào)節(jié)作用抑制再生障礙性貧血小鼠體內(nèi)免疫反應(yīng)， 從而改善再生障礙性貧血小鼠預(yù)后。②修復(fù)造血微環(huán)境，促進(jìn)骨髓造血：射線照射可嚴(yán)重?fù)p傷骨髓造血細(xì)胞和造血微環(huán)境，MSC有向損傷組織處及炎癥反應(yīng)部位遷 移的特性，給再生障礙性貧血小鼠靜脈輸注MSC可使MSC主要?dú)w巢至骨髓，并通過細(xì)胞間直接接觸或通過分泌轉(zhuǎn)化生長因子β1、造血生長因子等間接方式發(fā) 揮造血支持、組織修復(fù)和局部免疫調(diào)節(jié)作用。

    絕大多數(shù)兒童再生障礙性貧血是T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的免疫性骨髓損傷，免疫抑制治療有效率達(dá)79%［9］，但其中部分患兒血象恢復(fù)不完全或復(fù)發(fā)，且仍有少部分患兒對免疫抑制治療無效。除同胞HLA全相合骨髓移植外，目前對免疫抑制治療無效或復(fù)發(fā)的患兒尚缺乏有效治療方法，臨床上亟待探索新的治療手段。MSC因具有免疫負(fù)調(diào)節(jié)及支持造血雙重作用，且具有可移植性，在再生障礙性貧血細(xì)胞治療中可能發(fā)揮重要作用。

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